КАМЕРА НА НОЙБАУЕР: ИСТОРИЯ, ХАРАКТЕРИСТИКИ, ПРИЛОЖЕНИЯ - БИОЛОГИЯ - 2025

На Neubauer камера, hematometer или хемоцитометъра, е лаборатория инструмент, състоящ се от специално дебелина стъклена плоча. Тази камера се използва за преброяване на някои типове клетки, като червени кръвни клетки, бели кръвни клетки и тромбоцити, въпреки че може да се използва за преброяване на спори, сперма, паразити и др.

Той представя някои много особени характеристики, тъй като се състои от 3 зони, централна за броене и две поддържащи зони. Всяка камера има две зони за броене или кръстчета, една в горната част и една в долната част.

Камера на Нойбауер. Източник: SantiBadia Редактирано изображение.

Те имат множество разделения под формата на решетка. Площите за броене са средните квадрати, намиращи се в четирите ъгъла на двете решетки, плюс централния площад.

Сглобяването на камерата трябва да се извърши много внимателно, тъй като всеки детайл влияе върху броя на клетките. Много грешки могат да бъдат допуснати, но ако се появят някои от тях, камерата трябва да бъде разглобена, почистена и сглобена отново. Основните грешки включват следното:

Препълване на камерата или недопълване, оставяне на камерата да изсъхне, опит за отстраняване на излишната течност с марля, накланяне на камерата при транспортирането й, пълнене на мръсна или мокра камера, не смесване на разреждането или пробата, между другото. Всички тези грешки ще доведат до нереална стойност.

история

Камерата Neubauer е прецизен инструмент, а производственият процес е подложен на строг контрол на качеството. Той е създаден за прецизно броене на частици или образувани елементи на mm ³, като клетки в различни течности. Нежната му графика е издълбана с диамантен молив.

Характеристики на камерата на Нойбауер

Цялата камера е с размер на нормален слайд, така че да може да бъде поставена на сцената на микроскопа.

Камерата се състои от три централни правоъгълни повърхности (a, b, c). В зона "b" е разположена зоната R или преброяване, наричана също ретикулум. По един от всяка страна на камерата, разделен от зона "d".

Графична диаграма на Камарата на Нойбауер. Източник: Практическо ръководство по хематология. Училище по биоанализа на Университета в Карабобо, Венецуела.

Всяка решетка е полирана област, която съдържа гравирана площ за броене. Състои се от квадрат с площ 9 mm ² и е разделен вътрешно на 9 квадрата с площ 1 mm ² всеки. Четирите ъглови квадрата са разделени на 16 по-малки квадрата (0,0625 mm ² в площ).

Тези решетки са формирани от поредица от милиметрови линии, които се пресичат помежду си, съставляващи идеално грайферирани решетки, ограничени до определените измервания. Тези линии са гравирани с диамантен връх.

Подобрен ретикулум на Neubauer. Източник: Практическо ръководство по хематология на училището по биоанализа на Университета в Карабобо, Венецуела.

Четирите страни съответстват на областта за броене. Именно от тези страни или ъгли се преброяват по-голямата част от клетките (червените кръвни клетки и левкоцитите), докато тромбоцитите се броят в централната област.

Централната зона има повече деления, тя се състои от 1 mm ² квадрат, разделен на 25 квадрата, които имат площ от 0,04 mm ² всяко. Те от своя страна са разделени на 16 решетки с площ 0,0025 mm ².

Описание на подобрения ретикулум на Neubauer. а) Квадрат на ъглите, б) централен площад, в) среден квадрат на централния площад. Източник: Практическо ръководство по хематология на училището по биоанализа на Университета в Карабобо, Венецуела.

Зоните „a“ и „c“ служат като опора за поставяне на специален обект на покритие, наречен хематометричен слайд или хематометър.

Височината между фолиото и отброяващата повърхност е 0,1 мм. Измерванията на повърхността на кутиите, както и височината на камерата и разреждането на пробата са данни, необходими за извършване на окончателните изчисления.

Приложения

Използва се за броене на клетките. Той е особено полезен в областта на хематологията, тъй като позволява преброяване на 3-те кръвни клетки; т.е. червени кръвни клетки, бели кръвни клетки и тромбоцити.

Въпреки това, той може да се използва в други области, например за броене на сперма, спори, бактерии или други важни елементи в зависимост от вида на пробата.

Как да използвам?

приготвяне на пробата

За извършване на броя на клетките обикновено се започва от предишно разреждане. Пример: за да преброите белите кръвни клетки, пригответе разреждане 1:20 с течност на Тюрк. Разреждането се смесва добре преди зареждане на пипетата и монтиране на камерата на Neubauer.

Има моменти, когато разреждането от 1:20 не е достатъчно, за да се брои. Например при пациенти, страдащи от някои видове хронични левкемии. В тези случаи трябва да се правят по-големи разреждания като 1: 100.

Ако, от друга страна, броят е много малък, както при тежки левкопении, могат да се направят по-малки разреждания за концентриране на пробата. Пример: можете да направите разреждане 1:10.

Промените, които се правят, влияят на изчисленията.

Монтиране на камера Neubauer

Камерата на Neubauer се сглобява чрез поставяне на хематометричния слайд в централната зона. И двете трябва да са много чисти и сухи. За да поставите ламелата, тя се хваща за краищата и внимателно се спуска върху камерата.

Това се запълва с поставяне на върха на автоматична пипета или пипета Thoma под ъгъл 35 ° в края на зоната за зареждане. Течността се изхвърля гладко и зоната на зареждане се запълва от капилярност. Това се прави от двете страни, за да се заредят двете кръстосани коси.

Очилата не трябва да се претоварват и не трябва да им се отказва течност. Натоварването трябва да е точно. Важно е пълнежът да се извършва хомогенно, тоест не трябва да има мехурчета.

След като камерата е сглобена, тя се оставя да почива 2 минути, така че клетките да се утаяват до дъното и визуализацията и броя им да са по-лесни.

След времето на почивка се монтира на сцената на светлинния микроскоп за наблюдение. Първо се фокусира с 10X цел и ако е необходимо, след това преминава към 40X.

За да се подобри неговата визуализация, преминаването на светлината от микроскопа се намалява. За да направите това, кондензаторът се спуска и диафрагмата е леко затворена.

преброяване

За броя на белите кръвни клетки или левкоцитите трябва да се брои цялата повърхност на четирите средни ъглови квадрата и централният квадрат на всеки ретикулум.

Преброяването започва от квадрата в горния ляв ъгъл. Започвате от първия квадрат на първия ред, тоест отляво надясно, докато стигнете до противоположния край.

Там слизате и поглеждате назад от дясно на ляво, докато стигнете до другия край и така нататък, клетките във всяка мрежа се броят по зигзаг. 16 броя решетки на всеки среден квадрат се броят.

За да избегнете броенето на клетка два пъти, има правила за клетките, които са разположени на граничните линии на всяка мрежа. Клетките в лявата и горната линия се броят, а клетките в дясната и долната линия се игнорират.

Трябва да има ръчен брояч на клетки, така че операторът да натисне клавиша на устройството толкова пъти, колкото са наблюдавани клетки. С използването на брояча, операторът може да брои, без да се налага да вдига поглед от микроскопичното поле. В края на броя ще видите общия брой на преброените клетки.

Изчисленията

За изчисленията можете да продължите по няколко начина. Може да се преброи единична решетка или и двете, и двете да бъдат осреднени. В тези две ситуации преброените клетки трябва да бъдат умножени по коефициент, който в този случай би бил 40. И така се получава общото число на mm ³.

Но ако двете решетки се броят и средната стойност не се вземе, тя трябва да бъде умножена по различен коефициент, в случая с 20.

-Фактор на умножение

Ето как се изчислява коефициентът на умножение

За изчисленията се вземат предвид различни данни, включително титър на разреждане, височина на камерата и преброената площ.

разреждане

Използваното стандартно разреждане е 1:20 за броя на левкоцитите.

Височина на камерата

Височината между камерата и листа от кръвни клетки е 0,1 mm.

Преброена площ

Ако се броят 5 квадрата от 1 mm ² площ, това означава, че общата площ за броене е 5 mm ². Тези данни трябва да се умножат по височината на камерата, за да се получи общия обем, преброен. Тоест 5 мм ² х 0,1 мм = 0,5 мм ³.

Формули и изчисления

С данните, с които разполагаме, се казва:

Ако в 0,5 mm ³ - има брой на клетките

В 1 mm ³ --- ще има - X n ° клетки

X брой клетки = (броят на клетките се броят х 1) / 0,5 mm ³

Но разреждането също трябва да се вземе предвид. Следователно, формулата е следната:

(брой на броя на клетките x 1) x 20 / 0.5 mm ³

Накрая, за да обобщим, броят на преброените клетки може да се умножи по 40. По този начин се получава стойността на левкоцитите на mm ³.

Ако се преброят двете сетча, данните за преброената площ се променят, което в този случай би било 10 квадрата, тоест 10 mm ². И общ преброен обем от 1 mm3. Формулата би била:

(брой на броя на клетките x 1) x 20/1 mm ³

Следователно в този случай коефициентът на умножение би бил 20.

грешки

-Ако при зареждане на камерата тя е превишена или надвишена с течност, височината на камерата ще варира. Това води до това, че броят е по-висок от реалното. Ако се опитате да премахнете излишното с марля или памук, това е огромна грешка. Това действие ще накара клетките да се концентрират, увеличавайки броя.

-Ако се зарежда лошо, броят ще бъде по-нисък от реалния.

-Ако камерата е монтирана и оставена да изсъхне, вече не е възможно да се брои, защото ще даде грешни резултати.

-Ако разреждането на пробата не се смеси добре преди зареждането на камерата, съществува риск от грешка в отчитането, тъй като клетките няма да бъдат хомогенно разпределени. Следователно, ще има по-ниска или по-висока концентрация на клетките, в зависимост от това дали пробата е взета съответно от повърхността на течността или от дъното на епруветката.

-Наличието на мехурчета намалява количеството течност, която трябва да влезе в ретикулума, пречи на правилната визуализация и разпределение на клетките. Всичко това значително влияе на резултатите.

-По време на броенето не гледайте нагоре от микроскопа, докато не е завършен всеки голям квадрат, за да не се загубите.

-Една от причините за грешка е накланянето на камерата след монтажа. Поради тази причина етапът на микроскопа трябва да бъде внимателно повдигнат.

Препоръка

Ако по някаква причина откриете ненормалност в пълненето на камерата, препоръчително е да разглобите този препарат, да почистите камерата и да сглобите отново от нулата.

Внимавайте много, когато почиствате камерата, за да не надраскате кръстосаните косми. От друга страна, имайте предвид, че хематометричният слайд е деликатен и крехък. Неправилното боравене може да го счупи.

Преди да започнете да броите, уверете се, че клетките са добре разпределени. Неравномерното разпределение на клетките се получава при неправилно смесване на проби или разреждане. Ако това се случи, монтажа трябва да се повтори.

Един от начините да се знае дали клетките са добре разпределени е чрез сравняване на броя на всеки голям квадрат, броят на клетките, преброен от всеки квадрат, не трябва да бъде прекомерно различен от една в друга.

-Ако броят на белите кръвни клетки е над 50 000 mm ^3, препоръчително е да се повтори броя, като се направи по-голямо разреждане.

-Ако промените разреждането, трябва да преизчислите коефициента на умножение, тъй като това влияе на формулата.

Препратки

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Сравнение на концентрацията на сперматозоидите, използвайки камерата на Маклер и камерата на Neubauer. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Предлага се в: scielo.
2. Камера на Нойбауер. (2018 г., 27 март). Уикипедия, Свободната енциклопедия. Дата на консултация: 04:10, 23 юни 2019 г. от es.wikipedia.org
3. Менези A, Rojas L, Sifontes S. Прилагане на алтернативен метод за броене в камерата на Neubauer за определяне на концентрацията на Trichomonas vaginalis. Преподобни кубчета Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Достъпно на: researchgate.net
4. Гомес-Перес Роалд Е. Анализ на спермограмата. Преподобни Венеция. Ендокринолог. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Предлага се на: ve.scielo
5. Хематологично практическо ръководство на Школата по биоанализа на Университета в Карабобо. Венецуела, 1998