ОЦВЕТЯВАНЕ НА КАПСУЛИ: ОБОСНОВКА И ТЕХНИКИ - БИОЛОГИЯ - 2025

В оцветяване капсулата е техника за диференциално оцветяване, което има свойството на стрес полизахаридна структура околната някои бактерии и дрожди, наречени капсула. Използва се в клинични лаборатории, за да помогне за диагностициране на определени патологии, причинени от капсулирани микроорганизми.

Използва се и в учебни лаборатории за демонстриране на тази морфологична структура пред студентите от кариерите в областта на здравните науки, като: медицина, биоанализа, медицинска сестра или цитотехнология, наред с други.

Оцветяване с петна от капсула Klebsiella pneumoniae. Индийски мастилен метод със сафранин. Източник: А.А.В

Има няколко прости техники за доказване на присъствието на капсулата в микроорганизмите, които я притежават, това са: отрицателното петно, петно ​​от Антъни и вариант, който комбинира предишните две.

Отрицателното оцветяване се използва главно в проби от CSF, когато се подозира наличието на дрожди Cryptococcus neoformans. Тази мая е честа причина за менингит.

Тази техника използва нигрозин или индийско мастило и се основава на създаване на контраст между фона на препарата и непроницаемата капсула на микроорганизма. Фонът става тъмен, а капсулата е безцветна. По този начин се разкрива тази структура.

По отношение на техниката на Anthony може да се каже, че тя се използва най-вече в учебни лаборатории за демонстриране на полизахаридната структура в бактерии като Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae и Neisseria meningitidis.

Използването на тази техника за диагностични цели е много рядко, тъй като има и други рутинни тестове, които позволяват идентифицирането на тези микроорганизми.

основа

Капсулата е силна структура от полизахариден характер. Това предпазва микроорганизмите от фагоцитоза и следователно е трудно проникваща структура.

Ето защо петна от капсули се основават на контраст. Оцветителите оцветяват дъното на препарата, докато капсулата остава безцветна.

Следователно с тези техники капсулата е лесно разпознаваема. Ако микроорганизмът няма капсула, той няма да се различи с този тип оцветяване, защото всичко ще бъде оцветено в един и същи цвят.

Всички техники, използвани за оцветяване на капсулата, имат една и съща обосновка, въпреки използването на различни багрила и процедури.

Техники ал

-Антонично петно

Петното на Антъни използва кристално виолетово като петно. Това ще оцвети бактериалното тяло и фона лилаво.

От друга страна се използва 20% меден сулфат. Това служи като измиващ разтвор, тоест премахва излишния виолетов кристал от препарата, като прави капсулите бистри, но без бактериалното тяло или фона да губят цвят.

материали

- Преливно мляко.

- Пързалка.

- 1% виолетов кристал.

- 20% меден сулфат.

- Оптичен микроскоп.

- Потапяне масло.

процес

Тази техника се състои от:

1. Култивирайте микроорганизма в преливно мляко за 36 часа.
2. Поставете капка от културата в края на пързалка и до нея поставете капка виолетово стъкло, разбъркайте и разстелете с края на друг слайд.
3. Въздухът е сух и не се загрява.
4. Измива се с 20% разтвор на меден сулфат, оставя се да изсъхне на въздух.
5. Наблюдавайте под микроскоп с потапяща цел. Търсете към краищата на разпространението.

Важно е да не използвате топлина нито за фиксиране, нито за изсушаване, тъй като това уврежда капсулата. Също така не мийте с вода.

Интерпретация

Иридисцентното мляко е отлична културална среда, тъй като осигурява необходимите хранителни вещества, за да може микроорганизмът да развие видна капсула.

От друга страна, преливащото се мляко ще образува плътно и компактно дъно, което ще бъде оцветено в лилаво заедно с бактериалното тяло, но капсулата, която заобикаля микроорганизма, ще остане безцветна. Следователно около бактериалното тяло се наблюдава ясен ореол.

Графично изображение при микроскопично наблюдение на намазка от Klebsiella pneumoniae, оцветена с петно ​​на Антъни. Източник: Изработено от автора MSc. Мариелса Гил.

предимство

Това е проста техника за изпълнение. Не изисква фиксиране.

Също така трябва да се отбележи, че могат да се използват и други културни среди, но млечната среда е за предпочитане, тъй като има предимството да предоставя по-видни капсули.

Недостатъци

Това е малко по-трудоемка техника от отрицателното оцветяване и нейната визуализация изисква изчакване на препарата да изсъхне напълно.

-Отрицателно оцветяване

материали

- Плъзгащи се слайдове.

- културална среда с микроорганизма.

- китайско мастило или нигрозин.

- Оптичен микроскоп.

- Физиологичен физиологичен разтвор.

процес

Поставете капка физиологичен разтвор на покривалото и разтворете малка част от микробната култура. Важно е препаратът да не е прекалено гъст. След това поставете капка китайско мастило или нигрозин и разбъркайте.

След това върху препарата се поставя покриващ лист, без да прелива течността. Наблюдава се под микроскоп, като първо се фокусира върху 10X цел и след това се придвижва до 40X.

Тази техника може да се използва директно и върху CSF проби. Тоест, вместо да се постави капка микробна култура, се поставя капка CSF.

предимство

Това е прост метод за изпълнение и в същото време евтин. Не изисква фиксиране или изсушаване на препарата.

Недостатъци

Недостатъкът е, че трябва да се наблюдава под микроскоп, преди препаратът да изсъхне, защото ако това се случи, микроорганизмите ще се свият, което ще затрудни визуализацията.

От друга страна, фалшивите положителни резултати могат да възникнат, ако анализаторът е неопитен, тъй като левкоцитите често се бъркат с дрождите.

Наблюдението на дрождени капсули с китайската мастило или нигрозин техника трябва да се счита за предполагаема диагноза на Cryptococcus neoformans, докато не се демонстрира с културата.

Това е така, защото има други дрожди, които биха могли да бъдат причина за менингит, а не само Cryptococcus neoformans, като тези от рода Candida и Rhodotorula, както и други видове Cryptococcus.

Интерпретация

Ако има капсулирани микроорганизми, ще се наблюдава тъмен фон с прозрачни тела, плаващи в течността, подчертавайки присъствието на капсулата.

Капсула Cryptococcus neoformans, оцветена с китайско мастило. Източник: Кредит за снимки: Доставчици на съдържание: CDC / Dr. Леанор Хейли

-Индийска техника с мастило

Тази техника може да се направи и с нигрозин. Това е комбинация от техниките, обяснени по-рано. Тази техника използва кристално виолетово и индийско мастило или нигрозин.

Бактериалното тяло се превръща в лилаво от кристално виолетовото, защото е отрицателно заредено, докато нигрозин оцветява дъното на намазката. Ако бактерията има капсула, тя ще се появи като прозрачен ореол около микроорганизма.

Кристалното виолетово може да бъде заменено с всеки от тези цветове: сафранин, основен фуксин или метиленово синьо.

материали

- Виолетово стъкло.

- Нигрозин или индийско мастило.

- Плъзгащи се слайдове.

- Микроскоп.

процес

- Култивирайте микроорганизма в културална среда.

- Поставете капка от културата в края на пързалката и до нея поставете капка индийско мастило или нигрозин кристал, разбъркайте и разстелете с края на друг слайд.

- Въздухът е сух и не се фиксира на топлина.

- Покрийте с виолетов кристален разтвор за 1 минута, измийте с дестилирана вода, но много деликатно (мека струя), оставете да изсъхне на открито.

- Наблюдавайте под микроскоп с потапяща цел. Търсете към краищата на разпространението.

Интерпретация

Ще се види лилаво бактериално тяло и тъмен фон. Капсулата, ако е налице, ще изглежда безцветна около бактериите.

Препратки

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Основни техники на микробиологията. Наблюдение на бактерии. Редука (биология). Серия микробиология. 2010; 3 (5): 15-38. д
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Основни петна в лабораторията по микробиология. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Достъпно на: medigraphic.com
3. Gil M. Отрицателно оцветяване: обосновка, техника, предимства и недостатъци. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Аржентина. Редакция Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Петна от капсула: Принцип, процедура и резултати. 2019. Ръководство за медицинска микробиология. Достъпно в: microbeonline.com