ОЦВЕТЯВАНЕ С KINYOUN: ОБОСНОВКА И ТЕХНИКИ - БИОЛОГИЯ - 2025

На оцветяването Kinyoun е техника за оцветяване използва за оцветяване на бактерии и паразити, устойчиви киселина алкохол. Той е роден от модификацията на оцветяването на Ziehl-Neelsen; И двете техники се интерпретират по един и същ начин, но се различават по два елемента: при приготвянето на основния реагент и по това, че техниката на Kinyoun не използва топлина.

Поради тази причина е известно още като студено модифицирано студено петно ​​Ziehl-Neelsen или Kinyoun студено петно. Показан е за оцветяване на Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, атипични микобактерии, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris и Cyclosporas cayetanensis.

Cryptosporidium parvum, оцветена с петно ​​от Kinyoun. Punlop Anusonpornperm, от Wikimedia Commons

Струва си да се отбележи, че Nocardia оцветяват слабо с тази техника, тъй като са частично киселинно-алкохолни, така че за този род има модификация на методологията.

От своя страна студената техника на Kinyoun е комбинирана с трихромната техника, модифицирана от Дидие за откриване на кокцидии (Cryptosporidium parvum и Isospora belli) и спори на микроспоридия (Enterocytozoon bieneusi и Encephalitozoon intestinalis).

основа

Основният реагент за оцветяване е карболфуксин или карбол фуксин, който има свойството да се свързва с карболовите киселини, съществуващи в богатата на липиди восъчна клетъчна стена (миколови киселини) на микобактерии и някои паразити.

Тази връзка не се противодейства на киселинния белина; следователно, микроорганизмите се определят като киселинно бързи.

За разлика от техниката на Ziehl-Neelsen - която фиксира багрилото чрез топлина - в техниката на Kinyoun тази стъпка не е необходима, тъй като карболният разтвор на фуксин, приготвен за тази техника, съдържа висока концентрация на фенол.

Фенолът разтваря липидния материал в клетъчната стена, позволявайки на боята с карболфуксин да влезе. След като багрилото проникне, той остава фиксиран въпреки измиването с киселинен алкохол.

По този начин киселинно бързите микроорганизми придобиват характерния червен цвят, докато всичко, което не е киселинно бързо, се обезцветява и оцветява в синьо.

Техника

материали

- Модифициран карболов фуксин.

- Алкохол-киселина.

- метиленово синьо.

Приготвяне на Kinyoun carbol fuchsin

- Основен фуксин: 4 gr.

- Фенол: 8 мл.

- Алкохол (95%): 20 мл.

- Дестилирана вода: 100 мл.

Основният фуксин трябва да се разтваря бавно в алкохола, като се разбърква постоянно. Впоследствие кристализираният фенол се разтопява на водна баня при 56 ° С. След разтваряне, 8 ml се добавят към фуксиновия разтвор, приготвен по-горе.

Приготвяне на киселинно-алкохолния

- Концентрирана солна киселина: 3 ml.

- етанол (95%): 97 ml.

Тя трябва да бъде измерена, съединена и смесена.

Получаване на контрастно багрило с метиленово синьо

- метиленово синьо: 0,3 g.

- Дестилирана вода: 100 мл.

Претегля се и се разтваря.

Техника за оцветяване на Kinyoun

1- Пригответе намазка директно от пробата, която може да бъде храчка, белодробна течност, утайка на урината, цереброспинална течност или изпражнения; или от суспензия на микроорганизми, получени от чисти колонии, разработени в среда на първична култура.

2- Фиксирайте намазката с топлина.

3- Поставете намазката върху моста за оцветяване и покрийте с подготвения реагент Kinyoun carbol fuchsin. Оставете го да почива 3 до 5 минути.

4- Измийте с дестилирана вода.

5- Избелвайте с кисел алкохол за 3 минути и отново измийте с дестилирана вода.

6- Избелвайте отново с кисел алкохол за 1 или 2 минути, докато не се пренесе повече оцветяване.

7- Измийте с дестилирана вода и оставете да се отцеди, като поставете пързалката във вертикално положение.

8- Покрийте препарата с метиленово синьо и оставете да действа 4 минути.

9- Измийте с дестилирана вода и оставете да изсъхне на въздух.

10- Проучете 40X и след това 100X.

За да подобрите и ускорите оцветяването на киселинно бързите микроорганизми, добавете 1 капка овлажняващ агент (като Tergitol № 7) към 30 до 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.

Някои лаборатории променят контрастното багрило с метиленово синьо до яркозелено или пикринова киселина; първата дава зелен цвят на фона, а втората генерира жълт цвят.

Специална техника на Kinyoun за нокардиите

За подобряване на оцветяването на бактерии от род Nocardia се използва модификация на петното Kinyoun. Техниката е следната:

1- Покрийте намазката с Kinyoun carbol fuchsin за 3 минути.

2- Измийте с дестилирана вода.

3- Обезцветете накратко с кисел алкохол, приготвен на 3%, докато не се отнесе повече оцветяване.

4- Измийте отново с дестилирана вода.

5- Покрийте препарата с метиленово синьо и оставете да действа 30 секунди.

6- Измийте с дестилирана вода и оставете да изсъхне на въздух.

Комбинирана техника на карбол фуксин и трихром, модифицирана от Дидие

Тази техника се препоръчва за анализ на проби от изпражнения за кокцидии и спори Microsporidium sp едновременно. Следващата процедура е следната:

1- Покрийте намазката с Kinyoun carbol fuchsin за 10 минути.

2- Извадете оцветителя и измийте с дестилирана вода.

3- Избелвайте за 30 секунди с алкохол солна киселина.

4- Измийте отново с дестилирана вода.

5- Покрийте намазката с трихромен разтвор за 30 минути при 37 ° С.

6- Измийте с дестилирана вода.

7- Избелвайте за 10 секунди с алкохол с оцетна киселина.

8- Измийте намаза за 30 секунди, като използвате 95% етанол.

QA

Като положителна контрола се приготвят намазки с щамове Mycobacterium tuberculosis и се оцветяват с реагентите, подготвени за проверка дали бактериите придобиват подходящия цвят (червено-фуксия).

Отрицателните контроли могат да се използват и чрез приготвяне на намазки с всякакъв щам, различен от кисел алкохол, като по този начин се проверява дали цялата проба придобива контрастен цвят.

Техника Kinyoun в сравнение с техниката Ziehl-Neelsen

Техниката Kinyoun е по-проста, тъй като елиминира стъпката на нагряване, но основното й предимство е, че избягва отделянето на пари, силно токсични и причиняващи рак в дългосрочен план. Следователно петното от Kinyoun е по-безопасно за оцветяване на персонала.

Важно е да се вземе предвид, че трябва да се внимава реагентите да не влизат в пряк контакт с кожата, тъй като те са корозивни и белината е запалима.

Що се отнася до недостатъците, отрицателната намазка не означава непременно, че организмът не присъства. Освен това, наличието на клетъчни отломки може да доведе до фалшиви позитиви, което да доведе до объркване в диагнозата.

препратка

1. Приложна клинична химия. (2016 г.). BK Kinyoun Kit. Наличен на: cromakit.es
2. Ороско-Рико Мигел. Петна от Kinyoun и две кокцидии при ХИВ. Медицински журнал MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Аржентина. Редакция Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. (5-то изд.). Аржентина, редакция Panamericana SA
5. Сътрудници на Уикипедия "Петна от Кинюн." Уикипедия, Свободната енциклопедия. Уикипедия, Безплатната енциклопедия, 8 февруари 2018 г. Уеб. 5 януари 2019г.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Прилагане на техника за оцветяване за едновременна диагностика на Coccidia и Microsporidia. Институт по хигиена на Университета на Републиката. Монтевидео. Уругвай. Предлага се на адрес: higiena.edu.uy