ОТРИЦАТЕЛНО ОЦВЕТЯВАНЕ: ОБОСНОВКА, ТЕХНИКА, ПРЕДИМСТВА И НЕДОСТАТЪЦИ - БИОЛОГИЯ - 2025

На оцветяването отрицателен е метод за специално оцветяване да се подчертае присъствието на капсулата в някои микроорганизми, главно Streptococcus пневмония, пневмония и Klebsiella Cryptococcus neoformans-, от клинични образци или чисти култури.

Директната проба, която обикновено се използва за прилагане на отрицателно оцветяване, е цереброспиналната течност. Тази техника представлява бърза алтернатива за предполагаемата диагноза на менингит, особено Cryptococcus neoformans.

A. Зъбен зъбен камък, оцветен с мастило в Индия, B. Cryptococcus neoformans var gatti слабо капсулиран, както се среща в природата, използвайки нигрозин. В. Cryptococcus neoformans var gatti с дебела капсула, както се намира в неговата паразитна форма, използвайки нигрозин. D. Cryptococcus neoformans с леко разредено мастило в Индия. Gisell Quinde, от Wikimedia Commons / CDC, през Wikimedia Commons / Кредит за снимки: Доставчици (и) на съдържание: CDC / Dr. Леанор Хейли, през Wikimedia Commons

По същия начин, това петно ​​може да се прилага върху храчки и стерилни течности като цяло, както и върху щамове, получени от млади чисти култури. Тази техника използва нигрозин или индийско мастило за неговото изпълнение; Следователно е много проста и икономична методика, която се прилага, която предоставя информация с голяма диагностична стойност за кратко време.

В този смисъл всяка лаборатория е способна да извърши това оцветяване. Разбира се, лабораторията трябва да разполага с компетентен персонал, способен да разпознава изолирани или пъпчиви дрожди Cryptococcus neoformans и да ги разграничава от левкоцитите и артефактите, които пробата може да представи.

основа

Мастилото Нигрозин и Индия работят по подобен начин; следователно, всяко от двете вещества може да се използва взаимозаменяемо.

Тази техника се нарича отрицателно оцветяване, тъй като действа по обратен начин спрямо останалите техники за оцветяване. При това остава непроменено структурата, която се търси или която човек иска да види; тоест микроорганизми.

Следователно оцветяването се основава на оцветяване на дъното на намазката с тъмен цвят. При този сценарий капсулираните структури ще се открояват в светъл или безцветен цвят.

По принцип дрождите са рефлекторни, заобиколени от бистър ореол, който съответства на капсулата. Това се случва, защото мастилото в Индия и нигрозинът са вещества, които не могат да проникнат в полизахарида, съставляващ капсулата от живи микроорганизми.

Струва си да се отбележи, че и други структури, които могат да присъстват в директната проба, като левкоцити или червени кръвни клетки, не проникват нито в двете.

Ако обаче микроорганизмите са мъртви, багрилото може да проникне вътре в тях, така че това оцветяване е полезно и за оценка на жизнеспособността на микроорганизмите.

Техника

материали

Нигрозин

Нигрозин дължи името си на черния цвят, който има. Това е синтетично вещество, което се получава при нагряване на сместа от органични съединения - като нитробензин, анилин и анилин хидрохлорит - с помощта на катализатор (желязо или мед) в споменатата реакция.

Китайско мастило

Китайското мастило е вещество, използвано главно от азиатците за писане, правене на произведения на изкуството и монохроматична живопис. Той е много популярен в китайската култура.

Получава се от мастило от калмари, смесено с прахообразен въглен, продукт на изгаряне на ниско смолисти дървета.

Възможно е също така да се приготви от сажди от изгаряне на въглеводороди (растителни масла), заедно с протеинов желатин, който му придава правилната консистенция, за да се избегне утаяването на въглеродните частици.

Спецификации за вземане на проби

- Не изисква гладуване.

- CSF, храчката или стерилната течна проба трябва да съдържа най-малко 1 ml обем и трябва незабавно да се прехвърли в лабораторията при стайна температура.

- CSF и пробите от стерилна течност трябва да се вземат от специализиран лекар.

- Това също може да бъде чиста култура на подозрителен щам, свързан с гореспоменатите патогени.

Изпълнение на техниката с директни проби

- Пробите трябва да бъдат центрофугирани, след това супернатантата се изхвърля и седиментът се взема.

- Капка от центрофугирания материал (утайка) и капка мастило от Индия или нигрозин се поставят върху чиста пързалка.

- Трябва да се смеси добре и да се покрие с покриващ лист, което позволява на капката да се разпространи като тънък филм, без да преминава по краищата.

- Впоследствие препаратът се монтира на микроскоп.

- Ако препаратът е твърде тъмен, може да се разрежда с вода.

Изпълнение на техниката с щамове от културата

- Много малка част от младата култура се взема със игла за засяване и се разтваря в капка мастило от Индия, поставено преди това върху чиста пързалка.

- Отгоре се поставя покривка.

- Наблюдава се в микроскоп при 10Х и след това при 40Х.

Можете също да разтворите част от колонията в дестилирана вода и от там вземете капка и да я смесите с мастилото в Индия. По този начин препаратът няма да е толкова гъст, което позволява да се наблюдават структурите в изолация; ако има тълпи, няма да се наблюдава добре.

Друга методология е следната:

- Поставете капка култура за суспензия в единия край на пързалката.

- Поставете капка нигрозин в същия край и разбъркайте.

- С помощта на друг слайд разстелете пробата, сякаш правите хематологична намазка.

- Оставете да изсъхне и наблюдавайте под микроскоп.

Наблюдение с микроскоп

Първо трябва да се съсредоточите с 10X цел, за да имате широк изглед на полето. Впоследствие трябва да се търси, ако има ясни пространства; ако има, фокусирайте 40X, за да видите подробности.

предимство

- Изпълнява се лесно.

- Това е евтина техника.

- Този метод не изисква намазването да се фиксира на топлина или с химикали; следователно, микроорганизмите се наблюдават без изкривявания.

- Свежият препарат не е необходимо да се суши, така че може да се наблюдава веднага, генерирайки резултати бързо.

недостатък

След като бъдат сглобени, трябва незабавно да се наблюдават свежи препарати; ако се оставят да изсъхнат, вече не е възможно да ги наблюдавате и трябва да се инсталира нов.

Оцветяване на тъкан с мастило в Индия

Друга функция, която мастилото в Индия може да изпълни, е в патологичните лаборатории. Това се прилага за хирургично извлечени тъканни проби, за да се маркират резекционните граници на тумора.

Маркираната тъкан се напръсква с оцетна киселина. Това действа като мочалка и предотвратява изтичането на мастило, когато тъканта се подлага на рутинна обработка за биопсичния препарат.

Процедурата се състои в къпане на тъканта в алкохол и ксилол и след това накисването й в парафинов восък. Тази маркировка насочва патолога при наблюдение на тъканта, като посочва къде е границата на хирургичната резекция или друга интересна точка.

Препратки

1. «Nigrosina». Уикипедия, Свободната енциклопедия. 11 юли 2017, 22:46 UTC 6 януари 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. „Китайско мастило“. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 1 окт 2018, 03:08 UTC. 6 януари 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J и сътрудници. (2006 г.). Трудов персонал на автономната общност на Естремадура. Специфична програма том IV. Редакционен MAD. Севиля-Испания, стр. 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006).Специализиран лаборант, Галикийска здравна служба (SERGAS). Том на специфичния дневен ред 2. Редакционен MAD. Севиля-Испания, стр. 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Аржентина. Редакция Panamericana SA