НАМАЗВАНЕ НА КРЪВТА: ХАРАКТЕРИСТИКИ, ВИДОВЕ, ТЕХНИКИ И ХИСТОЛОГИЯ - БИОЛОГИЯ - 2024

В кръвта намазка е натривка от периферна кръв, който се използва за анализиране на компонентите, присъстващи в кръвната циркулация. Наблюдението на кръвен маз дава хематологични данни, които са много полезни за диагнозата и проследяването на много патологии.

Кръвният маз позволява да се определи количеството на различните видове бели кръвни клетки (левкоцитна формула), както и да се направи анализ на морфологията и формата на еритроцитите, левкоцитите и тромбоцитите.

Приготвяне на кръвния маз. Източник: Кръв в лабораторна чаша. Public DomainPictures.net

В него могат да бъдат открити аномалии в броя на клетките, като: левкоцитоза или левкопения, лимфоцитоза или лимфопения, неутрофилия или неутропения, тромбоцитоза или тромбоцитопении и еозинофилия. Възможно е също да се наблюдават аномалии в размера и формата на клетките.

Освен това е възможно да се открият различни видове анемии, левкемии и бактериални или кръвни паразитни инфекции.

За това има различни видове намазки, които се извършват в зависимост от целта на изследването. Има тънки намазки и гъсти намазки. Тези намазки се различават по техниката на изпълнение и целта на изследването.

Тези с фини капки се използват като допълнение към пълна хематология. Това предоставя данни за левкоцитната формула, в допълнение към анализа на формата и морфологията на трите клетъчни серии, съставляващи кръвта: червена серия, бяла серия и тромбоцити. Въпреки че те служат и като допълнение към изследването на дебел кръвен филм.

Плътният филм се използва за диагностициране на заболявания, причинени от хемопаразити, като малария или малария, токсоплазмоза, лайшманиоза, болест на Шагас, бабезиоза и микрофилариаза.

Характеристики на кръвен маз

Добрият кръвен маз трябва да отговаря на определени характеристики. Сред тях можем да споменем:

-Пробата трябва да отговаря на минималните изисквания за качество, за да бъде представителна.

-Вземането на проби трябва да бъде добре извършено.

-Временно изпълнение на намазката.

-Ако се извършва с венозна кръв, използвайте антикоагулант, който не деформира клетките и смесете епруветката, преди да направите намазката.

-Ако се прави с капилярна кръв, изхвърлете първата капка.

-Разпространението трябва да е хомогенно. Това гарантира, че клетките са равномерно разпределени и че кръвните клетки могат да бъдат добре анализирани за форма и брой.

-Страните на намазката трябва да са гладки от началото до края.

-Мазът трябва да отговаря на разстояние от 1 до 2 мм от страните на слайда.

-Смазният слой трябва постепенно да намалява дебелината от началото до края (намазва се с фина капка по метода на слайда).

-Той трябва да бъде правилно етикетиран, за да се избегне объркване на пробата.

-Фиксирайте и оцветете правилно за ясно наблюдение на кръвни елементи.

-Поставете намазка много добре, преди да монтирате препарата под микроскоп. Поставянето на потапящо масло върху мокър намаз ще доведе до образуването на мицели, които пречат на клетките да се видят.

Видове кръвна замазка

Периферните кръвни мазки могат да бъдат класифицирани в тънки намазки и дебели намазки. Тези с тънък слой се използват за изследване на левкоцитната формула и морфологично наблюдение на кръвните клетки. Извънклетъчните бактерии като борелия и вътреклетъчни хемопаразити, като плазмодий, могат също да се видят.

При финото петно ​​може да се идентифицират видовете паразити, следователно това е по-специфична техника от дебелото петно, но дебелото петно ​​е по-чувствително, тъй като това е техника на концентрация, използвана за изчерпателното търсене на извънклетъчни хемопаразити.

Има два вида намазки с фини капки: тези, които се извършват на слайдове и такива, които се извършват на покривки. Дебелите намазки се извършват на слайдове.

Техники за вземане на кръвни проби

Кръвните мазки могат да бъдат направени от капилярна пункция или венозна проба, взета с антикоагулант. Ако се извършва от кръв с антикоагулант, намазката може да се приготви до 2 часа след вземане на пробата.

Трябва да се внимава да се използват антикоагуланти, които не деформират кръвните клетки. Най-добрият вариант е EDTA. Напротив, трябва да се избягва употребата на антикоагуланти като тринатриев цитрат.

Ако пробата се вземе чрез капилярна пункция, намазката трябва да се удължи незабавно, преди да се образуват кръвни съсиреци.

Първата капка трябва да се изхвърли, което позволява на следващата капка да излезе спонтанно, за да се избегне разреждане на пробата с тъканна течност. Това е най-препоръчителната техника за наблюдение на клетъчната морфология, тъй като кръвта няма добавки.

За наблюдението на хемопаразитите, Солари и др. Заключиха в своята изследователска работа, че и двете техники (венепункция и капиляр) са еднакво ефективни.

Видове кръвни проби: А. Капилярна пункция. Б. Венозна пункция. Източник: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Техники за приготвяне на кръвта

Намазването на кръвта може да се извърши ръчно върху диапозитиви на микроскоп или върху капак или слайд. Възможно е и чрез автоматизирано оборудване.

-Плъзва мазки

Това е техниката, предпочитана от повечето лаборатории поради лесното й боравене.

Използвайки Пастерова пипета, поставете не много гъста или много фина капка кръв в центъра на единия край на чиста пързалка.

Размазването се прави с помощта на друг слайд със заземен край. Шлицът от смляно стъкло се поставя перпендикулярно на противоположния край на мястото, където се намира капката.

Накланя се до ъгъл между 30 - 45 ° и се плъзга към капка; Когато се докосне, тя се разширява линейно над ръба на земната пързалка и с постоянно и определено движение листът се връща; преди да стигне до края, плъзгачът се повдига.

По този начин, хомогенен слой се разпределя върху повърхността на приемния слайд.

Мазът се оставя да изсъхне. След това се фиксира и оцветява с предпочитаното петно. Оставете да изсъхне добре, преди да го видите под микроскоп. Капка масло се поставя върху лицето, което показва намазката и се наблюдава под лек микроскоп.

Намазване на кръв върху пързалка. Горно изображение: несъдържан намазка. Долно изображение: петно ​​намазано. Източник: Coinmac

Части от намазката, направена върху слайдове

При този тип намазване могат да се разграничат три определени области: главата, тялото и опашката. Главата съответства на зоната, от която започва намазването, тя е най-дебелата зона и не е добре да се наблюдава.

Тялото е централната или междинната част на намазката, това е най-добрата зона за наблюдение под микроскоп, тъй като там клетките са равномерно разпределени и тяхната морфология е запазена.

Опашката съответства на крайната част от намазката; тук разпределението вече не е равномерно и морфологията на еритроцитите има тенденция да се губи.

Контрол на качеството в техниката на слайд

В тази техника тя играе основна роля:

-Почистване и обезмасляване на слайда: гарантира добро плъзгане на пробата.

-Размер на капката: с много големи капки ще се получи по-гъста и по-дълга намазка, с много малък капка намазването ще бъде по-кратко и изключително фино.

-Скоростта, приложена в разширението: колкото по-малка е скоростта намазката ще бъде по-тънка, толкова по-висока е скоростта.

-Ъгълът на изпълнение: колкото по-малък е ъгълът, толкова по-фина е намазката, толкова по-голям е ъгълът.

-Стъпка на покривалото

Той не се използва широко, тъй като боравенето с крехки покривки е тромаво, но предлага големи предимства, тъй като се получава по-добро разпределение на клетките през целия маз.

В центъра на покривалото се поставя не много гъста, не много фина капка. Веднага друг капак се поставя отгоре по такъв начин, че върховете на двете покривки да стърчат, образувайки звезда.

Капката ще се разпространи спонтанно върху повърхността на двете покривки. В края на разширението всеки слайд се плъзга бързо до противоположната страна (един вдясно, а другият вляво).

Техниката осигурява два намазки вместо един.

Поставят се да изсъхнат с разнесената страна нагоре. След като изсъхне, той се фиксира и оцветява с избраната техника. Оставете да изсъхне. Капка масло за потапяне се поставя върху слайд, намазката се поставя с намазаната страна надолу и се гледа под микроскоп.

Контрол на качеството в техниката на покриване

За да се получи добър намаз на тази техника е важно да:

-Почистване на покривалото (помага на пробата да се плъзне гладко).

-Размерът на капката (влияе върху дебелината на намазката).

- Скоростта, с която капаците са разделени (влияе на хомогенността на намазването).

-С автоматизирано оборудване

Те могат да бъдат направени чрез всеки от тези екипи: Spinner и Autoslide.

Spinner се състои в поставяне на слайд с капка кръв върху специална плоча за центрофуга. Пробата се центрофугира при високи скорости; по този начин се образува хомогенна и фина намазка на пробата. Той има недостатъка от възможността за хемолиза на пробата.

Autoslide е инструмент, който механично извършва движенията за изпълнение на намазката върху слайдове. Можете също да фиксирате и оцветете намазката. Той дори може да бъде адаптиран към някои автоматични хематологични броячи.

Техника за гъсто намазване

За търсене на хемопаразити се препоръчват два намазки: един с фина капка и един с гъста капка.

Направете капилярна пункция, почистете първата капка. Поставете фина капка върху пързалка и намажете както е обяснено по-горе. За дебелото мънисто поставете голямо топче на друг слайд и разстелете в квадрат 1,55 мм. Оставете двете намазки да изсъхнат.

Оцветяване на намазка

Петната от Giemsa или Wright, наред с други, могат да се използват за фини капки. Петната от Giemsa или May-Grunwald Giemsa се препоръчват при гъсти намазки.

Петна от Giemsa

Мазът се фиксира за 3 минути с метанол, отцежда се и се оставя да изсъхне отново. След това намазката се покрива с петно ​​от Giemsa за 10-15 минути. Измива се с дестилирана вода и се оставя да изсъхне. За да наблюдавате под микроскоп се поставя капка масло за потапяне.

Райт петно

Мазът е покрит с петното на Райт за 5 минути. Изхвърлете и поставете буферния разтвор при рН 6,8 за 6 минути. Разбийте препарата до хомогенизиране. Измийте с дестилирана вода и оставете да изсъхне. Наблюдавайте под микроскоп.

Видове дефектни намазки

Появява се при стажантите в техниката на фини капки с диапозитиви.

Намазва се с области с различна дебелина (тънки и плътни пресичащи се)

Това е така, защото изпълненото движение не беше постоянно по време на разпространението, правейки спиране и рестартиране.

Много къс намаз

Те имат 2 причини: едната се дължи на факта, че основният слайд е повдигнат преди да стигне до другия край на слайда. В този случай той е изключително дебел и къс.

От друга страна, ако намазката е къса, но тънка, това е, защото размерът на капката беше много малък.

Намажете с набрашнена зона към края на намазката

Тя има няколко причини: едната е, че основният ръб е дефектен, че налягането, упражнявано върху приемащия слайд, се увеличава в момента на разнасяне или че е износен основният ръб на слайда.

Намажете с образуване на вакуола или ясни заоблени или елиптични области

Те се дължат на използването на мазни намазки (лошо измити и обезмаслени).

Много гъсти или много тънки намазки

Капките, които са твърде големи, ще произведат много гъсти намазки от началото до края и много малки капки ще произведат много фини намазки.

Хистология

Кръвните клетки могат да се видят в кръвен маз. Сред тях са:

-Еритроцити или червени кръвни клетки

Човешка кръв, еритроцити или червени кръвни клетки и две бели кръвни клетки. Взето и редактирано от: Viascos. Вашето наблюдение е от изключително значение. На това ниво могат да бъдат открити анемии, таласемия, заболявания на костния мозък и др.

Броят на еритроцитите или червените кръвни клетки е приблизително 5 x 10 ⁶ mm3 при мъжете и 4,5 x 10 ⁶ при жените. Червените кръвни клетки са оформени като биконкави дискове, с централна физиологична бледност. Те могат да се видят отделно (нормално) или да образуват рулонови купчини (ненормални).

В намазките се наблюдават също пойкилоцитоза (червени кръвни клетки с различна форма), анизоцитоза (червени кръвни клетки с различни размери), анизопоикилоцитоза (различни форми и размери), анизохромия (различни цветове), еритробласти (незрели червени кръвни клетки), микроцитоза (по-малки червени кръвни клетки)) и макроцити (по-големи еритроцити).

Когато те представят дефицит в количеството на хемоглобина и централната бледност се увеличава, се казва, че има хипохромия. Когато се наблюдава нормална червена серия, тя ще бъде отчетена като нормоцитна и нормохромна.

-Бели кръвни клетки или левкоцити

бели кръвни телца

Нормалното количество варира от 5000 до 10 000 mm ³. Те се променят при инфекциозни процеси, алергии и левкемия. В кръвния маз могат да бъдат разграничени няколко вида, които са обяснени по-долу.

Сегментирани неутрофили

Те представляват 55-65% от общите левкоцити. Те измерват между 10-15 μm. Те имат сегментирано или лобово ядро, което възприема различни морфологии, поради което се нарича полиморфонуклеар.

Те имат изобилни неутрофилни гранули в цитоплазмата си и някои азурофили. Те се увеличават при бактериални инфекции (неутрофилия), намаляват вирусни инфекции (неутропения).

Могат да се наблюдават морфологични отклонения като плеокариоцитоза (хиперсегментирани ядра), арки (незрели клетки) или макрополиси (с овална форма и големи).

Други промени:

-Токсични гранули

-Псевдо Пелгер неутрофили (ядрото няма лобулации или те са билибед).

-Доле тела: тъмносини цитоплазмени включвания.

-Увеличена цитоплазмена базофилия.

-Интрацитоплазмени вакуоли.

-Целуларна пиноза (загуба на междуядрени мостове).

Сегментирани еозинофили

Те представляват 1-3% от общите бели кръвни клетки. Те измерват 9-10 µm. Те се характеризират с наличието на изобилни ацидофилни цитоплазмени гранули и малко азурофили. Ядрото му има две лобулации. Броят им се увеличава при алергии и заболявания от паразитен произход.

Сегментирани базофили

Те са изключително редки, представляващи 0-1% от левкоцитите. Те измерват 10-12µm. Ядрото обикновено е с неправилни краища и може да бъде двуцветно, но не се наблюдава поради големия брой базофилни груби гранулации в неговата цитоплазма. Много рядко може да се наблюдава базофилия.

Лимфоцитите

Те са малки клетки с базофилна цитоплазма, с ядро, добре дефинирано, кръгло, със кондензиран хроматин. Ядрото обхваща почти цялата клетка. Те представляват 26-40% от кръвните левкоцити. Те се увеличават при вирусни инфекции (лимфоцитоза). Могат да се видят реактивни лимфоцити.

моноцити

Клетки по-големи от лимфоцитите, с по-големи цитоплазми и по-свободни, овални хроматинови ядра. Те измерват 9-12µm. Цитоплазмата е изобилна и обикновено изглежда бледо сивкаво синя със стандартни техники за оцветяване. Сред промените могат да се наблюдават вакуолирани моноцити и моноцитоза.

-Platelets

Те измерват между 1,5-3 µm. Формата му е кръгла или овална. Нормалната стойност варира от 150 000 до 350 000 тромбоцити / mm3. Те могат да намалят при някои вирусни инфекции. Те нямат ядро ​​и са оцветени в лилаво. В тази серия могат да се наблюдават аномалии като макро или микро тромбоцити, тромбоцитоза или тромбоцитопения и фрагменти на тромбоцитите.

Патологични елементи

Кръвни паразити

Хемопаразити, като причинител на малария или малария (паразити от рода Plasmodium), могат да се видят в кръвни мазки. Поради тази причина е важно намазването да се анализира ръчно, тъй като автоматичното оборудване пропуска тази констатация.

Бактерии

При патологии като рецидивираща треска или лаймска болест може да се наблюдава причинителят му. В този случай тя съответства на спирохетите Borrelia recurrenti и Borrelia burgdorferi в кръвта.

Незрели клетки

Тежките случаи се наблюдават при левкемии, левкемоидни реакции и левкоеритробластична реакция. При бактериални инфекции може да има леки отклонения вляво (наличие на мошеници). Еритробластите могат да се наблюдават и при някои анемии.

Препратки

1. Кръв и хематопоетична тъкан. Достъпно на: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Ангел. Клинична лабораторна интерпретация. 8-мо издание. Редакция Médica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos сметки A. Сравнение на паразитни плътности в гъста капка на венозна кръв спрямо акупресура при диагнозата малария vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. Достъпно на: scielo.org.
4. Тери Леонард Нелсън, Мендоса Ернандес Карлос. Значение на изследването на намазването на периферната кръв при възрастни хора. Medisur 2017; 15 (3): 362-382. Достъпно на: scielo.sld
5. Grinspan S. Изследването на намазването на периферната кръв. Продължаващо медицинско образование. Достъпно на: bvs.hn/RMH