ПЕТНА ОТ GRÜNWALD-GIEMSA: ОБОСНОВКА, ТЕХНИКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В май Grünwald-Giemsa или Pappenheim петното е диференциален техника оцветяване че смеси Giemsa и май Grünwald реагенти. Използва се за диференциране на нормални и анормални кръвни клетки в периферните кръвни и костномозъчни мазки, както и за оцветяване на хистологични секции и цитологични проби.

И двата реагента - Giemsa и May Grünwald - са получени от оцветяване от тип Романовски, техника, която се основава на комбинацията от кисели и основни багрила.

Маз, показващ сегментиран неутрофил и милеоцит в случай на хронична миелоидна левкемия, оцветен с петно ​​от май Грюнвалд Гемса. Д-р Рамон Симон-Лопес (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) чрез Wikipedia.org.

Giemsa подобри техниката, като стабилизира сместа от еозин, метиленово синьо и техните производни с глицерол. Вместо това Мей Грюнвалд използва еозин и метиленово синьо, използвайки метанол като разтворител. Тази стратегическа комбинация даде отлични резултати.

Въпреки че по отношение на наблюдението на клетъчната морфология тя действа по подобен начин на петна от Гемса и Райт, тази техника подобрява предишните, като прецизира оцветяването на паразитите, които причиняват малария, болест на Шагас, лейшманиоза и трихомониаза.

Освен това се оказа много полезна техника за цитологично изследване на сперматична течност. Той се откроява не само като показва морфологичните характеристики на сперматозоидите, но и позволява да диференцира левкоцити, епителни клетки и клетки на сперматогенезата с голяма ефективност.

основа

Техниката следва основата на петна от Романовски, при които киселинните багрила имат селективен афинитет към основни клетъчни компоненти, а киселинните компоненти привличат основни петна.

Обяснено по друг начин, както клетъчните структури, така и багрилата имат положителни или отрицателни електрически заряди; като зарядите отблъскват и различни такси привличат.

Например, основните багрила като метиленово синьо са заредени положително и са привлечени от отрицателно заредени структури. Ето защо тази багрила оцветява ядрата, които са богати на ДНК и РНК, които имат отрицателно заредени фосфатни групи.

Гранулите на сегментирани базофили и цитоплазмите на моноядрени бели кръвни клетки, съдържащи РНК, също са оцветени.

По същия начин киселинното багрило носи отрицателен заряд, така че се свързва с положително заредени структури като еритроцити и гранули от сегментирани еозинофили. Що се отнася до гранулите на сегментирани неутрофили, те фиксират и двете багрила.

Разнообразие от оцветители

В тази техника съществува съчетание от реакции между ортохроматични и метахроматични багрила. Ортохроматиките (еозин и метиленово синьо) се свързват с клетъчната структура, с която са свързани и осигуряват стабилен цвят, който не варира.

От друга страна, метахроматите (производни на метиленово синьото лазурно вещество А и лазур В) варират първоначалния си цвят, веднъж прикрепен към специфичната структура и дори може да има различни нюанси.

И накрая, стъпката, която предприема разтворът на май Грюнвалд, изисква наличието на вода, тъй като без това багрилото ще проникне в структурите, но няма да се фиксира. За да се случи това, багрилото трябва да стане полярно или йонизиращо и по този начин да може да се утаи и да се свърже към свързани структури.

Техника

материали

- Плъзгащи се слайдове.

- Мостове на оцветяване.

- решение Май-Грюнвалд.

- петно ​​от Giemsa.

- Дестилирана вода.

Май Grünwald багрила концентриран разтвор

0,25 g еозин-метиленово синьо (петно ​​според May Grünwald) трябва да бъде претеглено и разтворено в 100 ml метанол. След това препаратът се смесва за 1 час и се оставя да почива за 24 часа. Когато времето изтече, се филтрира.

За да приложите техниката, багрилото May Grünwald трябва да се разрежда по следния начин: за 200 ml разредена багрила измерете 30 ml от концентрирания разтвор, добавете 20 ml буферен разтвор и 150 ml дестилирана вода, коригирана до pH 7.2-7.3, По-късно се смесва и филтрира.

Концентрат за петна от Giemsa

0,5 g лазурно-еозин-метиленово синьо (петно ​​според Giemsa) трябва да бъде претеглено, разтворено в 50 ml метанол и 50 ml глицерин, добавени към сместа.

За да изпълните техниката, разредете 1:10 с буферен разтвор и оставете да почива 10 минути. Може да се филтрира, ако е необходимо.

Приготвяне на буферния разтвор при рН 7.2

Те трябва да бъдат претеглени:

- 40 mg калиев ди-хидрогенфосфат (KH2PO4).

- 151 mg ди-натриев хидрогенфосфат 12-хидрат (Na2HPO4).

И двете съединения се разтварят в 100 ml вода.

Процедура за оцветяване на намазка от кръв или костен мозък

Има два режима: класически и бърз.

Класически режим

1. Покрийте намазките за 2 до 3 минути с разредения разтвор май-Грюнвалд.
2. Измийте с буферирана дестилирана вода, за да отстраните предишния разтвор.
3. Покрийте със същия буфериран промивен разтвор и оставете за 1 минута. Идеята е, че предишното багрило е фиксирано към структурите и в същото време клетките са хидратирани.
4. Добавете 12 капки разредена тинктура Giemsa към буферната вода и раздуйте, за да се смеси и хомогенизира. Оставете го да почива 15 до 20 минути.
5. Измийте намазките с буферирана дестилирана вода и поставете на въздух да изсъхне.
6. Фокусирайте и прегледайте оцветените кръвни клетки под светлинен микроскоп, като използвате целта 40X. Ако е необходимо, 100X може да се използва.

Бърз режим

1. Покрийте намазката с разредено петно ​​от май Грюнвалд за 1 минута.
2. Измийте с буферирана дестилирана вода.
3. Покрийте с буферирана вода и оставете да почине за 1 минута.
4. Добавете разреденото петно ​​от Giemsa и оставете за 5 минути.
5. Измийте с буферирана дестилирана вода и оставете да изсъхне на въздух.

Описаните тук техники са насоки, но трябва да се има предвид, че процедурите и времето за оцветяване варират в зависимост от търговската компания, която разпространява реагентите. Препоръчително е да следвате стъпките, строго указани от всяка търговска къща.

Техника за оцветяване на намазки от сперматична течност

1- Покрийте намазката с тънък слой от разтвора на Грюнвалд за 4 минути.

2- Извадете оцветителя и измийте с дестилирана вода.

3- Поставете слой от разредена Giemsa (1:10) в дестилирана вода за 15 минути.

4- Извадете багрилото и измийте с дестилирана вода.

5- Оставете да изсъхне и наблюдавайте под микроскоп.

Очаквани цветове с петно ​​от май Грюнвалд Гемса

Важни спецификации

Техниката изисква реагентите и разтворите за промиване да имат рН, коригирано до 7,2 -7,3, така че афинитетът на багрилата към клетъчните структури да не се нарушава и очакваният краен цвят да не варира.

Приложения

Тази техника се използва от клиничните лаборатории за оцветяване на петна от периферна кръв и костен мозък, тъканни участъци и цитологии.

В областта на хематологията тази техника е от жизненоважно значение при изследването на аномалии на клетките по отношение на форма, размер и брой. Той е много ценен инструмент за диагностициране на определени заболявания, като левкемии и анемии.

В допълнение, той е от изключителна полза при търсене на паразити в хематологичните (Plasmodium sp и Trypanosoma cruzi) или хистологичните (Leishmanias sp) области.

Вагинална цитология

По отношение на вагиналната цитология, тази техника е особено благоприятна за наблюдението на Trichomonas vaginalis. Това е важна констатация, тъй като присъствието му симулира карцином in situ снимки, които по-късно изчезват при елиминиране на паразита.

Проба от сперма

Той е бил идеален инструмент за изследване на проби от сперма, тъй като предоставя ценна информация за качеството на спермата.

Данните, които предлага, са свързани основно с броя и морфологията, както и със съпътстващите клетки, които могат да присъстват и които са от жизненоважно значение, като зародишни клетки, левкоцити и епителни клетки.

С този анализ е възможно да се опишат аномалии, наблюдавани в спермата в главата, шията, акумулатора и основното парче.

В допълнение, те също могат да помогнат за показване на случаи на хемоспермия (наличие на червени кръвни клетки в спермата) и левкоспермия или пиоспермия (увеличен брой левкоцити в спермата).

Препратки

1. Costamagna S, Prado M. Валидиране на пресния тест, петна May Grünwald-Giemsa и Gram и културална среда за диагностициране на Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Предлага се в: scielo.
2. Merck KGaA Laboratory. Май Grünwald еозин метиленово синьо за микроскопия.
3. "Петно май-Грюнвалд-Гемса." Уикипедия, Свободната енциклопедия. 15 ноември 2018 г., 14:37 UTC. 8 януари 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Стъклени химикали Panreac Laboratory. Реактиви за хистологични техники, хематология и микробиология. Достъпно на: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Препоръка за оцветяване на кръвни мазки за отчитане на хемограмата. Национална и референтна биомедицинска лаборатория. Институт по обществено здраве на Чили.
6. Сарабия Л. Спермиограма според критериите на СЗО. Програма за анатомия и биология на развитието. Медицинско училище. Чилиски университет. Достъпно на: pp.centramerica.com