АГАР BAIRD PARKER: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В агар Baird Parker е твърда среда селективен и диференциална култура. Той е създаден през 1962 г. за откриване и преброяване на коагулазни положителни стафилококи (Staphylococcus aureus).

Състои се от панкреатичен казеинов хидролизат, месен екстракт, екстракт от дрожди, литиев хлорид, глицин, натриев пируват, калиев телурит, агар и емулсия от яйчен жълтък.

Типични колонии за Staphylococcus aureus на агар Baird Parker. Източник: Дейзи Джон

Baird Parker Agar се основава на способността на S. aureus да намалява телурита и да произвежда лецитиназа. И двете свойства генерират колония със специфични характеристики за този вид. Следователно той е много ефективен при откриване на този микроорганизъм.

Типичните колонии на S. aureus са черни или тъмносиви, с безцветна граница и светъл ореол, който ги заобикаля, което ги отличава от другите микроорганизми. Този патоген може да се намери в клинични проби, води, козметика и сурови или варени храни.

Нейната диагноза или откриване е от изключително значение, поради разнообразието от патологии, които произвежда, като хранително отравяне, синдром на опарена кожа, синдром на токсичен шок, абсцеси, менингит, септицемия, ендокардит, и други.

основа

Подхранваща сила

Панкреатичният казеинов хидролизат, екстрактът от месо и екстрактът от дрожди са източниците на хранителни вещества, витамини и минерали, необходими за общото развитие на микробите, докато пируватът и глицинът са съединения, подпомагащи специфичния растеж на Staphylococcus aureus.

селективен

Агар Baird Parker е селективен, тъй като съдържа вещества, които потискат растежа на съпътстващата флора, като същевременно насърчават развитието на S. aureus. Инхибиторните съединения са литиев хлорид и калиев телурит.

диференциал

Тази среда позволява да се разграничи S. aureus от останалите коагулазни отрицателни стафилококи. S. aureus има способността да редуцира телурита до свободен метален черен телур, образувайки черни или тъмносиви колонии.

По същия начин, яйченият жълтък осигурява субстратите, за да демонстрира наличието на ензима лецитиназа и липаза. S. aureus е положително лецитиназа и следователно около колонията ще се наблюдава ясно ореол, което показва, че лецитинът е хидролизиран.

В този смисъл появата върху този агар на лъскави черни или тъмносиви колонии със светъл ореол около тях показва наличието на S. aureus.

Ако се образува зона за валежи, това е показателно за активността на липазата. Някои щамове на S. aureus са положителни към липазата, а други - отрицателни.

В случай, че S. aureus е положителен към липазата, ще се наблюдава непрозрачна зона около черната или тъмносивата колония, а след това и светъл ореол поради действието на лецитиназата.

Колонии от бактерии, различни от S. aureus, способни да растат на тази среда, ще развият безцветни или кафяви колонии без ореол.

Нетипичните черни колонии също могат да се видят с или без безцветна граница, но без лек ореол. Тези колонии не трябва да се вземат под внимание, те не съответстват на S. aureus.

подготовка

Емулсия от яйчен жълтък

Вземете прясно пилешко яйце, измийте го добре и го поставете в 70% алкохол за 2 до 3 часа. След това яйцето се отваря асептично и бялото се отделя внимателно от жълтъка. След това се вземат 50 ml от жълтъка и се смесват с 50 ml стерилен физиологичен разтвор.

Калиев телурит 1% w / v

Някои търговски къщи продават 1% калиев телурит, готов за употреба. Добавя се към средата, преди средата да се втвърди.

За да се приготви този разтвор в лабораторията, 1,0 g калиев телурит се претегля и се разтваря в една част вода. Впоследствие количеството вода се допълва до достигане на 100 ml. Разтворът трябва да се стерилизира по метода на филтриране.

Подготовка на хранителна среда

Претеглят се 60 g от дехидратираната среда и се разтварят в 940 ml дестилирана вода. Оставете сместа да престои около 5-10 минути.

Прилагайте топлина, като разбърквате средата често, за да подобрите процеса на разтваряне. Оставете да заври за минута. Стерилизирайте в автоклава при 121 ° С за 15 минути.

Оставете да престои, докато достигне температура от 45 ° C и добавете 50 ml емулсия от яйчен жълтък и 10 ml 1% телурит. Разбъркайте добре и изсипете 15-20 мл върху стерилни петри.

Оставете да се втвърди, наредете обърнати в плаки и съхранявайте в хладилник до употреба.

Крайното рН на подготвената среда трябва да бъде 6,8 ± 0,2.

Преди да засяете проба, изчакайте плаката да достигне стайна температура. Посейте плочите чрез набраздяване или повърхностно засяване с шпатула Drigalski.

Цветът на дехидратираната среда е светъл тен, а цветът на подготвената среда - светло кехлибарен.

употреба

Клинични проби

Клиничните проби се засяват директно, като се отделя част от материала в единия край на плаката и оттам тя се преплита от изтощение. Инкубирайте за 24 до 48 часа при 35-37 ° C.

Проби от храна

Претеглят се 10 g от хранителната проба и се хомогенизират в 90 ml 0,1% пептон вода, от там се приготвят разреждания, ако е необходимо. Плаките се инокулират в три екземпляра с 0,3 ml от приготвените разтвори и се засяват по повърхността с шпатула Drigalski. Инкубирайте за 24 до 48 часа при 35-37 ° C.

Тази методология позволява да се преброят получените типични колонии и е идеално, когато се подозира наличието на S. aureus над 10 CFU на g / ml от пробата.

Ако се подозира, че количеството на S. aureus е малко или има много съпътстваща флора, се предлага пробата да се обогати в соев бульон с триптиказа с 10% NaCl и 1% натриев пируват. Това ще насърчи растежа на S. aureus и ще инхибира развитието на съпътстващата флора. Мътните тръби се засяват върху агар Baird Parker.

Водни проби

В стерилизирана вакуумна филтрираща система се филтрира 100 ml изследвана вода и впоследствие 0,4 микрона микропореста мембрана се отстранява със стерилни щипци и се поставя върху плоча на Baird Parker. Инкубирайте за 24 до 48 часа при 35-37 ° C. Тази техника позволява да се броят типичните колонии S. aureus.

QA

Известни щамове като Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 или Proteus mirabilis ATCC 43071 могат да бъдат използвани за оценка на качеството на агар Baird Parker.

В случай на щамове S. aureus ATCC е известно, че намаляват телурита и те са положителни на липазата и лецитиназата. Следователно трябва да има задоволително развитие и да растат изпъкнали колонии с черен център и безцветна граница, с непрозрачен ореол и лек външен ореол.

От своя страна се очаква S. epidermidis да се развие слабо на тази среда, с кафеникаво-сиви до черни колонии, без лек ореол.

За E. coli и P. mirabilis се очаква то да бъде напълно или частично инхибирано. В случай на растеж ще се развият кафяви колонии без непрозрачна зона или лек ореол.

препоръки

-Средата не трябва да се нагрява след добавяне на телурита и яйчния жълтък.

-Приготвянето на емулсията от яйчен жълтък и добавянето му в средата е много уязвима стъпка за замърсяване. Трябва да се внимава изключително.

-Ако има наличие на типични колонии на S. aureus, това трябва да бъде потвърдено чрез монтиране на коагулазен тест върху споменатия щам.

-Ако има съмнителни резултати с коагулаза, трябва да се монтират други потвърдителни тестове.

-Внимавайте да не объркате присъствието на типични колонии S. aureus с нетипични черни колонии.

Препратки

1. Сътрудници на Уикипедия Агар на Беърд-Паркър Уикипедия, Свободната енциклопедия. 15 март 2017 г., 19:36 UTC. Достъпно на: wikipedia.org/ Достъп до 18 февруари 2019 г.
2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006.На разположение на: bd.com
3. Britannia Laboratories. Агар база Baird Parker. 2015.Наличен на: britanialab.com
4. Франсиско Сория Мелгуизо Лаборатории. 2009. Беърд Паркър Агар. Достъпно на:
5. Britannia Laboratories. Калиев телурит. 2015.Наличен на: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Превоз на ентеротоксигенна Staphylococcus aureus тип A, в назофарингеални намазки в хранителните препарати. Rev Med Чили 2017; 145: 1559-1564
7. Венецуелски стандарт Covenin 1292-89. (1989). Храни. Изолация и изброяване на Staphylococcus aureus. Достъпно на: sencamer.gob.ve