BHI АГАР: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В ВШ агар или Brain Heart инфузионен агар среда е хранителна солидна култура. На испански го наричаме агар за инфузия на мозъка. Това е неселективна културална среда, което означава, че могат да се развият всички видове грамположителни и грамотрицателни бактерии, както и някои дрожди и нишковидни гъбички.

Състои се от инфузия на телешки мозък и сърце, пептичен хидролизат от животински тъкани, панкреатичен хидролизат на казеин, натриев хлорид, глюкоза, динатриев фосфат и агар.

BHI плочи. Източник: Снимка, направена от автора MSc. Мариелса Гил.

Трябва да се отбележи, че BHI агар е един от най-често използваните културни среди в бактериологичните лаборатории. Може да се използва без добавки като първична култура, субкултура на колонии, получени на други селективни среди или за поддържане на щамове в лабораторията.

От друга страна, тя е идеална среда, която да се използва като основа при получаването на обогатена среда, като кръвен агар и шоколадов агар. И двете са идеални за изолиране на взискателни микроорганизми от хранителна гледна точка. Трябва да се отбележи обаче, че тъй като съдържа глюкоза, тя не е подходяща за наблюдение на модели на хемолиза.

По същия начин BHI агар може да се използва за приготвяне на специална среда за изолиране на трудно растящи патогенни микроорганизми в обща среда, сред които: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae и Histoplasma capsulatum.

С антибиотичната добавка BHI агар се превръща в селективна среда за изолиране на гъбички.

основа

Това е хранителна среда за култура, която изолира умерено взискателните микроорганизми и обогатяването му може да се увеличи с добавянето на кръв и други хранителни добавки.

Това е неселективна културна среда, поради което позволява растежа на повечето грам положителни и грамо отрицателни бактерии, както и някои гъбички. Въпреки това може да се направи избирателно с добавяне на антибиотици.

Средата съдържа инфузия на телешки мозък и сърце, пептичен хидролизат на животински тъкани и панкреатичен хидролизат на казеин; Всички тези съединения действат като източници на витамини, аминокиселини, азот и въглерод.

Глюкозата е въглехидрат, който осигурява енергия на микроорганизмите, след като те я ферментират. Междувременно натриевият хлорид и динатриевият фосфат поддържат осмотичния баланс и осигуряват pH, близко до неутралитета. Накрая, агарът придава средна твърда консистенция.

подготовка

Претеглят се 52 грама дехидратирана среда и се разтварят в един литър дестилирана вода. Довеждайте сместа до източник на топлина до кипене, като бъркате често по време на процеса на разтваряне.

BHI агар плочи или клинове могат да бъдат приготвени без добавки.

Клиновете

За приготвяне на клинове, сервирайте препарата, докато половината от всяка епруветка се напълни, покрийте и стерилизирайте в автоклав при 121 ° С в продължение на 15 минути, когато излизате, легнете върху основа, докато се втвърдят. По-късно съхранявайте в хладилника до употреба.

BHI клинове за бактериотека. Източник: Снимка, направена от автора MSc. Мариелса Гил.

Плочи

Разтворената смес се автоклавира при 121 ° С в продължение на 15 минути, оставя се да се охлади до 50 ° С и 20 мл от средата се сервират в стерилни чаши на Петри. Оставят се да се втвърдят, обръщат се и се съхраняват в хладилник до употреба. Оставете плочите да достигнат стайна температура преди засяването.

PH на средата трябва да остане 7,4 ± 0,2.

Суровата среда е бежова на цвят, а подготвената среда е светло кехлибарена.

Приготвяне на кръвен агар

След стерилизиране на средата, охладете до температура от около 45 до 50 ° C, след това добавете кръвта (50 ml), разбъркайте внимателно до хомогенизиране и сервирайте асептично по 20 ml във всяка чаша на Петри. Ако на чинията се образуват мехурчета, по-лекият пламък трябва бързо да се прехвърли върху мехурчетата, за да ги елиминира.

По същия начин, специална среда може да се приготви чрез добавяне на съответните добавки, когато сместа достигне температура от 45 до 50 ° С.

Средата остава вишнево червена.

Приложения

Използвайте без добавки

BHI агарът без добавки е полезен като първична култура и за сеитба на чисти щамове от ниско или средно взискателни микроорганизми за тяхното последващо идентифициране.

Тъй като е светлооцветена среда, тя е идеална за наблюдение на пигменти и тъй като не съдържа смущаващи вещества, върху нея могат да се проведат някои биохимични тестове, като оксидаза и каталаза, или други биохимични изследвания могат да бъдат монтирани от колонии от това агар.

По същия начин клиновете BHI агар се използват широко за поддържане на щамове за определено време в лабораторията (бактериотека).

Плаки или клинове, засети по повърхността с бактериални щамове, се инкубират при 37 ° С в продължение на 24 до 48 часа. Междувременно при гъби температурата и времето на инкубация ще зависят от вида на гъбичките, които се търсят.

Като основен агар за получаване на други среди

С тази основа могат да се приготвят обогатени и селективни среди.

Обогатена

Основната му функция е да служи като основа за подготовка на кръвен агар за рутинна употреба в лаборатории за микробиология. По-специално, базата на BHI е благоприятна за изолирането на Streptococcus sp. Той обаче има недостатъка, че не е подходящ за наблюдение на модели на хемолиза, тъй като съдържа глюкоза.

Използва се и при приготвянето на агара от конски или конски кръв за изолиране на Haemophilus sp. За най-добри резултати може да се добави добавка за обогатяване (IsoVitaleX).

Ако пробите идват от дихателните пътища, може да се добави бацитрацин към агара, за да инхибира съпътстващата флора и да увеличи вероятността за възстановяване на Haemophilus sp.

Като алтернатива може да се приготви кръвен агар (агнешко или човешко) с цистин телурит за изолиране на Corynebacterium diphtheriae. По същия начин е полезно да се приготви агарски кръвен агар с добавяне на цистин и глюкоза за изолиране на Francisella tularensis.

Засяването на плочите с кръвен агар се извършва чрез изтощение и те се инкубират при 35-37 ° С в продължение на 24-48 часа при микроаерофилност (5-10% CO ₂).

селективен

Тази среда с добавяне на антибиотици може да замести агар Sabouraud за изолиране на гъбички.

Комбинацията на BHI агар с хлорамфеникол - гентамицин или пеницилин - стрептомицин и конска кръв е идеална за изолиране на хистоплазма капсулатум.

В зависимост от микроорганизма, който трябва да бъде изолиран, се препоръчва инкубация при 35-37 ° С или при стайна температура при аеробиоза. Понякога инкубацията е необходима и в двата температурни диапазона, като за това се използват 2 плочи.

Някои гъбички като Trichophyton mentagrophytes трябва да се инкубират при стайна температура до 7 дни.

QA

От всяка подготвена партида се препоръчва да се инкубира 1 чиния или клин при 37 ° C в продължение на 24 часа и да се провери дали няма растеж; Това е особено важно при приготвянето на кръвен агар, тъй като е лесно замърсена среда.

От друга страна, качеството на средата може да бъде оценено чрез инокулиране на известни или сертифицирани стандартни щамове и наблюдаване на тяхното развитие.

В този смисъл, за да се оцени BHI агар без добавки, могат да се използват щамове на Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 или Candida albicans ATCC 10231. Те ​​се инкубират при 37 ° С в аеробиоза за 24 до 48 часа. Във всички случаи се очаква задоволителен растеж.

Щамовете на Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 или Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 могат да бъдат засяти за оценка на плочите с кръвен агар.

Бактериалните щамове се инкубират при 37 ° С в микроаерофилност за 24 часа, докато гъбичките се инкубират при стайна температура във влажна камера до 7 дни. Задоволителен растеж се очаква във всички случаи.

Препратки

1. Britannia Laboratories. Мозъчна инфузия на сърце Агар. 2015. Достъпно на: britanialab.com.
2. BD Laboratories. Мозъчна инфузия на сърце (BHI) агар. 2013.Наличен на адрес: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Мозъчна инфузия на сърце Агар. 2009.
4. Неогенна лаборатория. Мозъчна инфузия на сърце Агар. Достъпно на: foodsafety.neogen.com
5. Джил М. Кръвен агар: основа, употреба и подготовка. 2018. Наличен на: lifeder.com.
6. Сътрудници на Уикипедия Мозъчна инфузия на сърцето. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 19 септември 2018 г., 03:58 UTC. Достъпно на: wikipedia.org. Достъп до 2 март 2019 г.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.