ЖЛЪЧЕН ЕСКУЛИНОВ АГАР: ОБОСНОВКА, ПРИГОТВЯНЕ И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В жлъчката ескулин агар е селективен и диференциална среда твърдо вещество култура. Той се използва като диагностичен тест за определяне на способността на определен микроорганизъм да расте в среда, която съдържа жлъчка, а също така да разгражда глюкозидния ескулин до ескулетин и глюкоза.

Този диагностичен тест се използва за разграничаване на видове от рода Streptococcus, принадлежащи към група D (жлъчен ескулин положителен), от други групи Streptococcus, които реагират отрицателно на този тест.

Плака с жлъчен ескулинов агар, засята със щам на Enterococcus (тест положителен). Източник: Не е предоставен машинно четим автор. Предполага се Philippinjl (въз основа на претенции за авторски права).

Трябва да се отбележи, че някои стрептококи от групата на вириданс могат да хидролизират ескулин, но не са в състояние да растат в присъствието на жлъчка в концентрация 40%, следователно, в тази среда реакцията за тази група е отрицателна.

От друга страна, жлъчната ескулинова среда е полезна и за диагностициране на видове Listeria monocytogenes или Aerococcus sp, тъй като тези микроорганизми са положителни за жлъчния ескулин.

Ескулинът жлъчен агар се състои от пептон, месен екстракт, волна жлъчка, ескулин, железен цитрат, агар и дестилирана вода. Някои търговски къщи включват натриев азид в състава на средата.

Средата може да се приготви в лабораторията, ако разполагате с всички съединения поотделно или може да се приготви от търговската дехидратирана среда.

основа

Жлъчната ескулинова среда съдържа пептони и месен екстракт, като двете съединения осигуряват необходимите хранителни вещества за растежа на микроорганизмите.

Съдържа и ескулин; Това съединение представлява гликозид, образуван от съединението на обикновен монозахарид (глюкоза) със съединение, наречено 6,7-дихидроксикумарин или ескулетин (аглукон), свързано с ацетална или глюкозидна връзка.

Тестът се основава на показване дали бактериите са способни да хидролизират ескулин. Ако това се случи, ескулинът се разгражда на ескулетин и глюкоза. Ескулетина реагира с желязото, присъстващо в средата, образувайки тъмнокафяво, почти черно съединение.

Това означава, че железният цитрат действа като проявител на реакцията. Тази характеристика прави Bile Esculin Agar диференциална среда.

От своя страна жлъчката е инхибитор, който предотвратява растежа на някои микроорганизми, следователно, бактерията, преди да раздели ескулина, трябва да може да расте в присъствието на жлъчка. Следователно тази среда се счита за избирателна.

Бактериите, които могат да се развият в тази среда, са главно тези, които живеят в чревната среда.

В този смисъл някои търговски компании добавят натриев азид към средата за по-нататъшно инхибиране на растежа на ентерично-грам отрицателни бацили, повишавайки селективността на средата за растеж на стрептококи.

Накрая, агарът придава твърдата консистенция на средата, а водата е разтворител на съединенията.

подготовка

Домашно приготвяне на жлъчен ескулинов агар

За да се претегля:

5 g пептони

3 г екстракт от месо

40 г телешка жлъчка

1 g ескулин

0,5 г железен цитрат

15 g агар

1000 мл дестилирана вода

В случай на добавяне на натриев азид се претегля 0,25 g / литър и се добавя към сместа.

Компонентите се разтварят в литър дестилирана вода, загрява се, докато съединенията се разтворят напълно. Разпределете 5 ml в епруветки с капачки с капачки 16 x 125 mm. Автоклавиране при 121 ° C, 15 килограма налягане за 15 минути.

Извадете от автоклава и наклонете тръбите върху опора, така че агарът да се втвърди в широк флейта.

Съхранявайте в хладилник до употреба. Донесете до стайна температура преди сеитбата.

Може да се приготвят и плочи от жлъчен ескулинов агар; в този случай цялата смес се автоклавира в колба и впоследствие се разпределя в стерилни петри. Оставете ги да се втвърдят и приберете в хладилника.

PH на средата трябва да бъде 6,6 ± 0,2.

Приготвяне на жлъчен ескулинов агар от търговска среда

Претеглете количеството, посочено от вложката. Това може да варира от една бизнес къща до друга. Впоследствие продължете същата процедура, както е обяснена по-горе.

PH на средата трябва да бъде 6,6 ± 0,2. Цветът на дехидратираната среда е светло бежов, а подготвената среда е тъмно кехлибарена.

Търговска жлъчна ескулинова среда. Източник: Снимка, направена от автора MSc. Мариелса Гил.

Приложения

Средата на жлъчния ескулин се използва главно за разграничаване на стрептокок от група D (жлъчен ескулин положителен), от останалите стрептококови групи (жлъчен ескулин отрицателен).

Комбинирането на теста за растеж на хиперсолиран бульон с жлъчния ескулинов тест може да идентифицира специална група от стрептококи от група D, наречена Enterococcus.

Тази специална група от стрептококи принадлежи към група D от гореспоменатия род и те са способни да хидролизират ескулин в присъствието на жлъчка, както и останалите членове на група D, но също така са способни да се развият в хиперсолирана среда (BHI с хлорид на 6.5% натрий), свойство, което прави разликата.

Следователно, стрептококите, които хидролизират ескулиновата жлъчка, но не растат в хиперсолиран бульон, се наричат ​​не ентерококи от група D стрептококи.

засети

Инокулирайте средата за предпочитане от чист Todd-Hewitt 24-часов бульон.

Добавете 2 капки към повърхността на средата с пастьорска пипета и разстелете в средата с платинен контур.

Инкубирайте при 35 ° С в продължение на 48 часа, докато времето за инкубация е изпълнено, може да бъде наблюдавано, за да се установи дали има положителна реакция. Ако в края на времето реакцията остане отрицателна, тя може да се инкубира до 72 часа.

Интерпретация

Положителна реакция: поява на тъмнокафяв, почти черен цвят в клюна на флейта (в случай на тест с тръбата) или почерняване на агара около колониите (в случай на тест с плоча).

Отрицателна реакция: не се появява почерняване на средата или има поява на черно в по-малко от половината от тръбата след 72 часа инкубация. От друга страна, растежът на бактериите в средата без появата на черния цвят трябва да се счита за отрицателен тест.

QA

За да се оцени качеството на средата, трябва да бъде на разположение щам Enterococcus faecalis ATCC 29212 като положителна контрола, а щамът Streptococcus, който не принадлежи към група D, като отрицателна контрола.

Ограничения

-Медии, които не съдържат натриев азид, позволяват растежа на ентерични грамо отрицателни бацили. Някои от тях могат да почернят средата.

- Някои търговски къщи добавят ниска концентрация на жлъчка (10%) и поради тази причина някои стрептококи, които не принадлежат към група D, могат да се развият в средата и да хидролизират ескулин, което може да генерира грешки в тълкуването.

Препратки

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
3. Mac Faddin J. (2003). Биохимични тестове за идентифициране на бактерии с клинично значение. 3-то изд. Редакция Panamericana. Буенос Айрес. Аржентина.
4. Лаборатория Британия. Ескулин жлъчка с азиден агар. 2015.Наличен на: britanialab.com
5. "Жлъчен ескулин агар." Уикипедия, Свободната енциклопедия. 22 август 2017, 17:30 UTC. 22 април 2019 г., 17:35 часа. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015.Наличен на адрес: bd.com
7. Неогенни лаборатории. Жлъчен ескулинов агар. Достъпно на: foodsafety.neogen.com