На агара цетримид или цетримид е селективен твърда хранителна среда, предназначени за изолиране на Pseudomonas Aeruginosa. Тя се основава на показване на производството на характерни пигменти от този вид и е направена от модификацията на Tech agar, създадена от King, Ward и Raney.
Оригиналната формула съдържаше соли на магнезиев хлорид, калиев сулфат, панкреатично разграждане на желатин и агар-агар. Модификацията на формулата се състои в добавянето на цетримид (цетил триметил амониев бромид) и глицерол.
Цетримид агар засята с Pseudomonas aeruginosa Източник: BiotechMichael, от Wikimedia Commons
Цетримидният агар е полезен за микробиологично изследване на проби, при които се подозира наличието на Pseudomonas aeruginosa. Трябва да се отбележи, че тази бактерия е изключително важна, тъй като въпреки че е част от нормалната микробиота в околната среда, тя често се държи като опортюнистичен патоген.
Поради тази причина един от най-често срещаните проблеми, причинени от този зародиш, е нозокомиалните инфекции, тоест тези, които се появяват в болничната среда, атакувайки пациенти, които имат депресирана имунна система.
От друга страна, поради афинитета, който този микроорганизъм има с влажност, най-уязвимите цели на замърсяване са: подпомагано дихателно оборудване, лекарства, пулверизатори, водоизточници, климатици, дезинфектанти, сапунени разтвори, инжекционни разтвори, открити рани, катетри, пикочни тръби, наред с други.
В този смисъл, цетримидният агар е полезен за извършване на микробиологични контроли и култури към гореспоменатите елементи.
основа
Цетримидният агар се основава на способността на средата да насърчава растежа на P. aeruginosa, стимулира производството на нейните пигменти и от своя страна инхибира растежа на други микроорганизми.
Тези свойства се дължат на функцията на всеки от неговите компоненти. Присъстващият желатинов пептон служи като източник на азот, витамини и минерали. Глицеринът или глицеринът работят като източник на въглерод.
От своя страна цетримидът (цетил триметил амониев бромид) е веществото, което инхибира растежа на бактерии, различни от P. aeruginosa, включително други видове, принадлежащи към същия род.
Инхибирането се случва, защото цетрамидът действа като катионен детергент, като успява да дестабилизира плазмената мембрана на повечето бактерии, с изключение на P. aeruginosa и някои други, които успяват да оцелеят.
От друга страна, съдържа магнезиев хлорид и калиев сулфат. Тези съединения стимулират фенотипната експресия, свързана със способността на Pseudomonas aeruginosa да произвежда различни пигменти, включително: пиоцианин, пиовердин, пиорубин, пиомеланин и флуоресцеин. И накрая, той съдържа агар-агар, който му придава твърда консистенция.
Интерпретация
Интерпретацията на растежа, получен в този агар, се извършва, както следва:
Наблюдението на кръгли, гладки колонии с правилни ръбове, с производството на синьо-зеленикави, зелени, кафяви или червеникави пигменти, плюс излъчването на плодов мирис (аминоацетофенон), е предполагаем резултат от наличието на тази бактерия в споменатата проба.
От друга страна, наблюдението на ярко зеленикавожълт пигмент върху колониите е показателно за P. aeruginosa, когато плочата е изложена на ултравиолетова светлина.
Флуоресценция на колонии P. aeruginosa върху цетримиден агар под ултравиолетова светлина.
Трябва да се отбележи, че всеки наблюдаван цвят се дължи на производството на специфичен пигмент. Синьо-зеленият пигмент съответства на производството на пиоцианин, зеленият до пиовердин, червеникавият до пиорубин, кафявият до пиомеланин и ярко жълто-зеленият флуоресценция под ултравиолетова светлина до флуоресцеин.
подготовка
Претеглят се 43 g от дехидратираната среда и се разтварят в дестилирана вода. Добавете 10 ml глицерол. Отнесете сместа до източник на топлина. Оставете да ври няколко минути до пълно разтваряне.
Автоклавирайте при 121 ° C за 15 минути. Оставете да престои и сервирайте в стерилни петри, когато температурата е около 50 ° C.
Оставете да се втвърди, обърнете, наредете в плаки и съхранявайте в хладилник до употреба. Плочките от цетримид агар трябва да бъдат извадени предварително от хладилника до засяването и да се оставят да достигнат стайна температура.
Крайното pH на средата трябва да бъде 7,2 ± 0,2.
Цветът на дехидратираната среда е бежов, а препаратът - непрозрачен бял.
Приложения
Всички видове проби, при които се подозира наличието на Pseudomonas aeruginosa, могат да бъдат засети върху цетримиден агар. Следователно, той е полезен във всички области на микробиологията (екологична, промишлена, клинична, водна и хранителна).
От голямо значение е да се анализира болничната среда и по този начин да може да се прилагат коригиращи мерки, тъй като този микроорганизъм достига до пациентите чрез замърсено оборудване, лекарства, разтвори и консумативи, които се използват от пациента.
По този начин микроорганизмът може да зарази долните дихателни пътища, пикочните пътища и рани на имуносупресирани пациенти.
Броят на колониите на P. aeruginosa може да се извърши и при микробни гранични тестове.
засети
Цетримидният агар може да се използва като основна култура. Плаката се инокулира по един от нейните ръбове и оттам се разпределя чрез изтощение към останалата част от чинията. Течните проби могат да бъдат засяти на повърхността с шпатула дригалски.
Плаките се инкубират аеробно при 37 ° С за 24 часа инкубация.
Ограничения
-Малък процент от щамовете Pseudomonas aeruginosas не произвеждат пиоцианин, така че може да се тълкува фалшив отрицател.
-Някои видове Pseudomonas с клинично значение се инхибират в тази среда.
-Въпреки спазването на характеристиките, описани за Pseudomonas aeruginosa, те трябва да бъдат потвърдени с допълнителни тестове за идентификация. Тест, който не трябва да се пропуска, е оксидазният тест, той трябва да даде положителен резултат.
-Някои Enterobacteriaceae могат да растат в тази среда и да развият жълт пигмент, но той се различава от Pseudomonas aeruginosa по това, че когато плочата е подложена на ултравиолетова светлина, няма флуоресценция.
- Serratia marcescens успява да развие и произвежда розов пигмент.
-Ако плочите, засети с цетримиден агар, са изложени за известно време при стайна температура, щамовете P. aeruginosa могат да загубят флуоресценцията, наблюдавана при ултравиолетова светлина, въпреки това свойството се възстановява, ако се инкубират отново при 37 ° С.
QA
За да се анализира доброто представяне на цетримидния агар, могат да се използват контролни щамове, като: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 и Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Очакваните резултати са:
- Добър растеж за P. aeruginosa, със синьо-зелен пигмент и положителен флуоресцеин.
- S. maltophilia и S. aureus ще бъдат частично напълно инхибирани.
- Очаква се ешерихия коли да бъде напълно инхибирана.
Препратки
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Фенотипна и серологична характеристика на клиничните изолати на Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Conda Pronadisa Laboratories. Цетримид агар основа. 2014.Наличен на: condalab.com
- Britannia Laboratories. Цетримиден агар. 2015.Наличен на: britanialab.com
- BD Laboratories. BD Псевдосел агар (Cetrimide agar). 2013.Наличен на адрес: bd.com
- Франсиско Сория Мелгуизо Лаборатория, CA агарит за цетримид. 2009.Достъпна на: