ШОКОЛАДОВ АГАР: ОСНОВА, УПОТРЕБА И ПРИГОТВЯНЕ - БИОЛОГИЯ - 2025

На агара шоколад е твърда хранителна среда, обогатена, без - селективни и не - диференциал. Използва се главно за изолиране на микроорганизми, изискващи от хранителна гледна точка, въпреки че в него могат да растат всякакъв вид бактерии.

Поради тази причина полезността му се увеличава особено при засяването на проби, които обикновено са стерилни, като CSF и ставна течност. Въпреки че той също е включен в избраните средства за сеитба на полимикробни проби, но в тези случаи е необходимо да се добавят антибиотици, които инхибират съпътстващата флора.

Шоколадов агар с бактериален растеж

Тази среда има характерен кафяв цвят, много подобен на шоколада, оттук и името му. Препаратът е много подобен на този на кръвен агар, само в този случай кръвта трябва да се нагрява, за да се разпаднат червените кръвни клетки.

Приготвянето му, подобно на кръвен агар, е много деликатно, тъй като лесно се замърсява. Поради тази причина много лаборатории предпочитат да придобият тази среда, вече подготвена от търговски компании, която гарантира нейното качество.

основа

Тази среда се състои от богата на хранителни вещества агарна основа и загрята кръв. Хемолизата на червените кръвни клетки осигурява фактор X (хемин) и фактор V (NAD), необходими за растежа на някои микроорганизми, като рода Haemophilus. Той е много полезен и за изолирането на Neisserias sp.

Подобно на кръвен агар, различни среди могат да се използват като основен агар в зависимост от необходимостта. Сред използваните медии са инфузия на сърцето на мозъка и соев агар с триптиказа, въпреки че най-препоръчителните са агар Columbia, Müeller Hinton, GC агар и Thayer Martin агар.

Някои варианти на шоколадов агар включват търговски достъпна обогатена добавка, наречена Isovitalex или Polivitex.

Тези добавки съдържат витамин В ₁₂, L-глутамин, аденин, гуанинов хидрохлорид, р-аминобензоена киселина, никотинамид аденин динуклеотид (NAD), тиамин пирофосфат, железен нитрат, тиамин хидрохлорид, цистеин хидрохлорид, L-цистин и глюкоза.

Важно е да се отбележи, че шоколадовият агар е по-обогатен от кръвния агар, но той не позволява да се наблюдават модели на хемолиза.

Приложения

Източник: pixnio.com. Автор:

Пийт Сейдел, Аманда Мур, МТ, Тод Паркър, доктор по медицина, Одра Марш, USCDCP

Шоколадов агар, приготвен с агар Columbia

Тази среда съдържа панкреатичен дайджест от казеин и сърце, пептичен смилаж на месо, натриев хлорид, агар, екстракт от дрожди и царевично нишесте. Освен това е богат на витамини, минерали и незаменими аминокиселини.

Тази загрята кръвна основа е идеална за изолиране на бактерии от рода Neisseria. От друга страна, ако добавка за Brucella се добави допълнително към средата, споменатият микроорганизъм може да бъде изолиран. Резултатите се подобряват с помощта на конска кръв.

Шоколадов агар, приготвен с GC основен агар (за гонококи)

Тази среда съдържа пептони, царевично нишесте, едноосновни и двуосновни буфери, натриев хлорид и агар.

Повечето комерсиално приготвени шоколадови агари се предлагат с тази основа и не съдържат нагрята кръв, а по-скоро синтетична смес от хемин и химическа добавка от растежни фактори, витамини, минерали, аминокиселини, фактор V и глюкоза.

Шоколадов агар, приготвен с агар Müeller Hinton

Използва се за тестване на антимикробната чувствителност на бързи микроорганизми, като Streptococcus pneumoniae, като се използва 5% загрята овча кръв.

Използва се и за първичната изолация на Neisserias и Haemophilus, но в конкретния случай на изолацията на Haemophilus се предпочита използването на конска кръв, тъй като тя е богат източник на фактор X и V.

От друга страна, ако пробата за посев идва от нестерилна зона, се препоръчва добавянето на антибиотици за инхибиране на нормалната флора на района.

Пример за дихателни проби, при които се подозира наличието на бактерии от рода Haemophilus, бацитрацин се използва за инхибиране на растежа на Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus и сапрофитни Neisserias.

В случай на проби от генитален шанкър, при които се подозира Haemophilus ducreyi, успешно е използван шоколадов агар, приготвен по следния начин: Мюлер - Хинтонов агар с 5% шоколадова конска кръв, 1% обогатяване на Isovitalex и 3 µg / ml ванкомицин.

Шоколадов агар, приготвен с агар Thayer Martin

Тази среда е специална за изолирането на Neisseria gonorrhoeae. Той трябва да съдържа антибиотици, за да инхибира съпътстващата флора. Използва се агнешката кръв.

подготовка

Трябва да видите показанията за приготвянето на базовия агар, който ще се използва. Те се намират на гърба на контейнера с дехидратираната среда. Те обикновено описват колко трябва да тежите, за да приготвите литър хранителна среда.

Точното необходимо количество може да се приготви в лабораторията, може да бъде повече или по-малко от литър.

Изчисленията

Правило от три се използва за изчисляване на колко да се претегля, за да се подготви желания обем. Пример:

Ако за 1 литър е необходимо да се претеглят 40 гр, а лабораторията изисква 800 мл, се казва:

1000 мл ----------- 40 gr

800 мл -----------– X

Формулата ще бъде следната:

X = 32 gr (количество за претегляне за 800 ml).

Претеглят се и се разтварят

Необходимото количество се претегля и се поставя в колба с водата.

Загрейте на умерена топлина и разбъркайте внимателно с въртеливи движения, докато дехидратираната среда напълно се разтвори, оставяйки да кипне за 1 минута.

стерилизирам

Колбата се поставя в автоклава, за да се стерилизира средата при 121 ° С за 20 минути.

Кръвен агрегат

Когато напускате автоклава, се оставя да престои, докато температурата на средата е приблизително между 56 до 70 ° С, за да се постави кръвта и да се разбърка, докато средата стане кафява.

Ако добавяте добавки, това е моментът да го направите. Впоследствие разбъркайте и сервирайте по 20 мл във всяка стерилна чаша Петри.

Цялата процедура трябва да се извърши в качулка с ламинарен поток или около горелката Bunsen.

Оставете да престои, докато се втвърдят, и съхранявайте обърнат в хладилника.

Друг начин за приготвяне на шоколадов агар без използване на кръв

Базовата среда се приготвя, както е описано по-горе, полученият в търговската мрежа дехидратиран хемоглобин се разтваря и стерилизира в автоклава.

И двата разтвора се оставят да се охладят до 50 ° С, съединяват се и се добавя добавката. Смесете при асептични условия и след това сервирайте в стерилни петри.

QA

Важно е кръвта да бъде поставена при посочената температура, тъй като тя е идеалната за лизиране на червените кръвни клетки и в същото време да поддържа фактор V, който е чувствителен към температурата.

На повърхността на агара не трябва да остават мехурчета. От всяка партида от 100 плаки, една или две плочи трябва да се инкубират във фурната при 37 ° С в продължение на 24 часа, за да се провери тяхната стерилност.

За най-добри резултати шоколадовият агар трябва да се използва малко след приготвянето.

Контролните бактериални щамове трябва да се съхраняват в лабораторията, за да се оцени ефикасността на свежата среда за растежа на основните бързи микроорганизми с клинично значение.

Препратки

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Практическа клинична микробиология. Университет в Кадис, 2-ро издание. Служба за публикации на UCA.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Аржентина. Редакция Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. (5-то изд.). Аржентина, редакция Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Възможност за използване на GC-Biocen Agar базова културална среда в микробиологичната лаборатория. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Достъпно на: scielo.sld.
5. Сътрудници на Уикипедия Шоколадов агар. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 17 декември 2018 г., 19:54 UTC. Достъпно на: en.wikipedia.org.