ЦИМРАТЕН АГАР НА SIMMONS: ОБОСНОВКА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В агар Simmons цитрат е твърда среда се използва като биохимични тестови идентификация микроорганизми, особено грам - отрицателни бактерии. Оригиналният носител е създаден от Косер през 1923г.

Цитратната среда на Koser се състои от бульон, съдържащ натриев фосфат, амониев фосфат, монокалиев фосфат, магнезиев сулфат и натриев цитрат.

А. Дехидратирана търговска среда за цитратен агар на Simmons B. Приготвена цитратна захар на Simmons. Източник: А. Снимка, направена от MSc. Marielsa Gil B. Roto2esdios, от Wikimedia Commons

Както може да се види, единственият източник на въглерод в средата е цитратът, а на азота е амониевият фосфат, пропускащи протеини и въглехидрати като източник на тези елементи, те обикновено присъстват в други среди.

Следователно бактериите, инокулирани в тази среда, могат да се размножават само ако са способни да поемат въглерода от цитрат. Тестът беше положителен, ако има мътност в средата, но имаше недостатъка, че може да се появи неспецифична мътност.

Този проблем беше решен от Simmons чрез добавяне на бромотимол синьо и агар към оригиналната формула на Koser. Въпреки че принципът е един и същ, той се тълкува различно.

основа

Някои бактерии имат способността да оцеляват при липса на ферментация или производство на млечна киселина, като се нуждаят от получаване на енергия чрез използването на други субстрати. В този тест единственият предлаган източник на въглерод е цитрат.

Бактериите, които са в състояние да оцелеят при тези условия, бързо метаболизират цитрата по алтернативен на традиционния начин начин, използвайки цикъла на трикарбоксилната киселина или цитратния цикъл на ферментация.

Катаболизмът на цитрат от бактерии включва ензимен механизъм без намесата на коензим А. Този ензим е известен с името цитриказа (цитратна оксалоацетатна лиаза) или цитратна десмолаза. Реакцията изисква присъствието на двувалентен катион, който в този случай се доставя от магнезий.

Реакцията генерира оксалоацетат и пируват, които след това пораждат органични киселини в средата на алкално рН, образувано при използването на източника на азот. Тези органични киселини се използват като източник на въглерод, генериращи карбонати и бикарбонати, допълнително алкализирайки околната среда.

Режим на сеитба

Средата на Симонов цитрат трябва леко да се инокулира в рибен хвост с помощта на прав контур или игла и да се инкубира в продължение на 24 часа при 35-37 ° С. След времето се наблюдават резултатите.

Засяването се извършва само на повърхността на агара. Не пробивайте.

Интерпретация

Ако средата остане първоначалния цвят (зелен) и няма видим растеж, тестът е отрицателен, но ако средата стане синя, това показва наличието на алкални продукти, което се открива от показателя за рН. В този случай тестът е положителен.

Цитрат (+) и (-). Източник: MSc Мариелса гил

Това се случва, защото ако бактерията използва въглеродния цитрат, тя също е способна да приема азота на амониевия фосфат, с който отделя амоняк, алкализирайки средата.

От друга страна, ако растежът на бактериите се наблюдава в средата, но няма промяна в цвета, тестът също трябва да се счита за положителен, тъй като ако има растеж, това означава, че бактериите са били в състояние да използват цитрат като източник на въглерод, т.е. въпреки че в момента няма промяна в pH (понякога може да отнеме време).

Ако има някакво съмнение в интерпретацията на крайния цвят, той може да бъде сравнен с неинокулирана цитратна тръба.

подготовка

Претеглят се 24,2 g от дехидратираната среда за един литър вода. Смесете и оставете да почине за около 5 минути. Завършете разтварянето на средата чрез загряване в продължение на 1 или две минути, като разклащате често.

Изсипете 4 ml в епруветки и автоклавирайте при 121 ° C за 15 минути. Когато излизате от автоклава, наклонете с помощта на опора по такъв начин, че агарът да се втвърди във формата на флейта с клюн с малко блокче или дъно и повече скосяване.

Крайното рН на цитратната среда е 6,9 (зелен цвят). Тази среда е много чувствителна към промените в pH.

При pH 6 или по-ниско, средата става жълта. Този цвят не се наблюдава при теста за бактерии.

А при pH 7,6 или по-високо, средата превръща дълбоко пруско синьо.

употреба

Цимратният агар Simmons се използва за идентифициране на някои микроорганизми, по-специално на бацили, принадлежащи към семейство Enterobacteriaceae и други неглюкозни ферментиращи бацили.

Източник: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.

Заключителни мисли

Симмоновата цитратна среда е много деликатен тест, тъй като може да се получат фалшиви положителни резултати, ако се направят определени грешки.

Вниманието, което трябва да се внимава, е следното:

Инокулума

Не трябва да се прави много дебел или натоварен бактериален инокулум, тъй като това може да причини медно жълт цвят в сеитбата, без това да засегне останалата част от средата, но може да доведе до вярване, че има растеж. Това не означава положителен тест.

Също така, гъстият инокулум може да генерира фалшив положителен резултат, тъй като органичните съединения, образувани в клетъчните стени на умиращи бактерии, могат да отделят достатъчно въглерод и азот, за да превърнат показателя за рН.

Следователно идеалът е да сеете с помощта на иглата вместо дръжката от платина, за да избегнете поемането на излишен материал.

засети

От друга страна, когато батерията от биохимични тестове за идентифициране на въпросния микроорганизъм се посява, важно е цитратният тест да бъде първият инокулиран, за да се избегне пренасянето на протеини или въглехидрати от друга среда.

При това обстоятелство е възможно да се получи фалшив положителен резултат, тъй като всяко от тези вещества, които се въвеждат по погрешка, ще се метаболизират и ще предизвикат промяна в pH.

Друг начин да се избегне пренасянето на вещества е да изгорите добре примката и да вземете нов инокулум между един и друг тест.

Трябва да се внимава и при докосване на колонията, за да се извърши инокулумът, тъй като трябва да се избягва влаченето на част от агара от културата, от която идват бактериите, поради обясненото по-горе.

В този смисъл Матсен, Шерис и Брансън препоръчват да се разрежда инокулумът във физиологичен разтвор, преди да се инокулира цитратният тест, за да се избегне прехвърлянето на други източници на въглерод.

Интензивност на цвета

Трябва да се вземе предвид, че интензивността на цвета, произведен, когато тестът е положителен, може да варира в зависимост от търговската къща.

Освен това има микроорганизми, които тестват положително след 24 часа, но има и други щамове, които изискват 48 часа или повече, за да произведат промяна в pH.

Препратки

1. Mac Faddin J. (2003). Биохимични тестове за идентифициране на бактерии с клинично значение. 3-то изд. Редакция Panamericana. Буенос Айрес. Аржентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
4. BD Laboratories. BBL Simmons цитрат агар наклони. 2015.Наличен на адрес: bd.com
5. Britannia Laboratories. Симонс цитрат агар. 2015.Наличен на: britanialab.com
6. Диагностични лаборатории Valtek. Симонс цитрат агар. 2016.Наличен на: andinamedica.com.