ИЗВЛЕЧЕН АГАР: ОБОСНОВКА, УПОТРЕБА И ПОДГОТОВКА - БИОЛОГИЯ - 2025

В CLED агар (цистин-лактоза електролит-дефицитни) е твърда хранителна среда диференциал, използвани за диагностициране на инфекции на пикочните пътища. Съставът на културната среда е предназначен за добрия растеж на пикочните патогени и е идеален за количественото определяне на единиците, образуващи колонии (CFU).

CLED културната среда е неселективна, тъй като в нея могат да растат грамотрицателни и грамположителни микроорганизми. Но това не е проблем, тъй като повечето UTI са причинени от само един вид микроорганизми.

CLED агар

В случай на полимикробни инфекции могат да се получат 2 или 3 различни бактерии, но това е много рядко и през повечето време това са замърсени проби.

Сред грамотрицателните бактерии, които могат да растат в тази среда, са бацилите, принадлежащи към семейството на Enterobacteriaceae и други ентерични бацили, като уропатогените най-често се изолират в проби от урина, както следва: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, наред с други.

По същия начин, сред грам-положителните бактерии, които могат да растат в тази среда, са Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp и дори дрожди, като например Candida albicans комплекс, могат да растат.

Въпреки това, поради химичния състав на средата, тя не позволява растежа на някои взискателни пикочно-полови патогени, като Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, наред с други.

CLED Agar обосновка

Хранителната среда CLED има месен екстракт, панкреатичен хидролизат на казеин и хидролизат на желатин като енергиен източник. Те осигуряват хранителните вещества за развитието на непретенциозни бактерии.

Съдържа също цистин, аминокиселина, която позволява растежа на колиформи, различаващи се по малкия си размер.

По същия начин, съдържа лактоза като ферментируем въглехидрат, поради тази причина тази среда е диференциална; да може да различи ферментиращите бактерии от нелектозните ферментиращи.

Ферментиращите бактерии причиняват рН на средата да се променя при производството на киселини, развивайки жълти колонии, докато неферментиращите бактерии не генерират промени в средата, поради което те придобиват цвета на първоначалния агар, зелен.

Ферментационната реакция се разкрива благодарение на наличието на pH индикатора, който в тази среда е бромотимолово син.

От друга страна, ниската концентрация на електролит в средата инхибира типичния инвазивен растеж на рода Proteus, наречен рояков ефект. Това генерира предимство пред други носители, тъй като позволява броене на CFU, включително ако присъства родът на Proteus.

Ниската концентрация на електролити обаче инхибира растежа на някои видове от рода Shigella, което е недостатък в сравнение с други среди.

Обосновка за CLAR агар (Bevis)

Има вариант или модификация на този носител, направен от Бевис, който включи киселия фуксин (индикатор на Андраде) в оригиналния състав. Той работи съвместно с бромотимолово синьо, за да разграничи ферментацията от неферментиращите бактерии.

Разликата между конвенционалната и модифицирана среда е цветът, който колониите придобиват. В случай на бактерии, ферментиращи лактоза, колониите стават червеникаво-оранжеви с розов или червен ореол, докато неферментиращите са синкаво-сиви.

Приложения

CLED агар се използва изключително за засяване на проби от урина. Използването на този носител е особено често в европейските лаборатории, докато в Америка се използва по-малко.

Събирането на проби трябва да отговаря на определени параметри, за да се получат надеждни резултати, включително:

• Да не се вземат антибиотици преди вземане на проби.
• За предпочитане вземете урината от първия час сутрин, тъй като тя е по-концентрирана, когато не е възможно да се вземе пробата чрез инвазивни методи.
• Измийте гениталиите добре преди да вземете пробата.
• Изхвърлете първия поток на уриниране и след това поставете контейнера.
• Съберете 25 до 30 мл урина в добре етикетиран стерилен съд.
• Заведете веднага в лабораторията, обградена в лед.
• Той трябва да бъде обработен в рамките на 2 часа след издаване или хладилник при 4 ° C за максимум 24 часа.

Засяване на проби от урина

Пробата на урината трябва да се разрежда 1:50.

За разреждане се поставят 0,5 ml от урината на пациента и се разрежда с 24,5 ml стерилен физиологичен разтвор.

Измерва се 0,1 ml от разредена урина и повърхностно разпространение с дригалска шпатула върху CLED среда. Това е най-добрият метод за семе за преброяване на колонии. Поради тази причина се използва в проби от урина, тъй като резултатите трябва да се изразят в CFU / ml

За да определите количествата получените колонии, продължете както следва: пребройте колониите в плаката и умножете по 10 и след това по 50. Това ви дава количеството CFU / ml урина.

Интерпретация

Брой над 100 000 CFU / ml -– Указва инфекция на урината

Брой под 1000 CFU / ml- Без инфекция

Брои между 1000-10 000 CFU / ml - Съмнително, възможно замърсяване, повторно вземане на проби.

документ за самоличност

Колониите, отглеждани на CLED агар, трябва да имат грам и в зависимост от морфотинториалните характеристики на микроорганизма се извършва определена субкултура.

Например, ако става въпрос за грам отрицателен бацил, той ще се засява на агар MacConkey, където ферментацията или не лактозата се потвърждава. Освен това е прикрепен хранителен агар за извършване на теста за оксидаза.

В случай, че Грам разкрие грам положителни коки, той може да бъде субкултивиран на солен манитолов агар и на хранителен агар. В последния се провежда каталазният тест. Накрая, ако се наблюдават дрожди, тя ще бъде засета върху агар Sabouraud.

Много лаборатории избягват използването на CLED среда и предпочитат да използват само кръвен агар, MacConkey и хранителен агар за проби от семена на урина.

подготовка

В колба с един литър дестилирана вода се разтварят 36,2 g CLED агар на прах. След 5 минути престой, нагрявайте отново суспендирания агар, като бъркате постоянно до кипене в продължение на 1 минута.

След това стерилизирайте при 121 ° С за 15 минути в автоклава. В края на времето се изважда от автоклава и се оставя да изстине до температура 45 ° С. Впоследствие се поднасят 15-20 мл във всяка стерилна чаша Петри.

Процедурата за сервиране на плочата трябва да се извърши вътре в ламиниран капак или пред горелката Bunsen, за да се избегне замърсяване.

Сервираните чинии се оставят да се втвърдят, подреждат се в обърнат стелаж и се съхраняват в хладилник (2-8 ° С) до употреба.

Крайното рН на подготвената среда трябва да бъде 7,3 ± 0,2.

Препратки

1. Препоръки за микробиологична диагностика на пикочна инфекция. Чил. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Достъпно на: scielo.org.
2. Panchi J. Идентифициране на микробния агент, причиняващ инфекции на пикочните пътища в болници, подложени на катетеризация на пикочния мехур. 2016. Бакалавърска работа, за да се квалифицира за степен на клинична лаборатория. Технически университет в Амбато. Еквадор.
3. Britannia Laboratories. CLED среда. Достъпно на: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Инструкции за употреба, CLED Agar. 2013 Достъпно на: es.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories. Основно ръководство по микробиология. Достъпно на: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, MD Díaz, Vicente T, Bouza E. Опцията CLAR агар в рутинната култура на урината. Проспективна и сравнителна оценка. Diagn Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Практическа клинична микробиология. Университет в Кадис, 2-ро издание. Служба за публикации на UCA.