ЧАПЕК АГАР: ОБОСНОВКА, ПОДГОТОВКА, УПОТРЕБА И ОГРАНИЧЕНИЯ - БИОЛОГИЯ - 2025

На Чапек (CZA) е селективен твърда среда, специално предназначени за отглеждане на сапрофитни бактерии и гъбички. Той е създаден от ботаника Фридрих Йохан Франц Чапек от полски произход и американския химик Артур Уейланд Докс; поради тази причина този агар е известен още като среда на Чапек-Докс.

Първоначалната среда е течна, но по-късно се добавя агар, за да се превърне в твърда среда. Czapek среда се състои от натриев нитрат, бипокалиев фосфат, магнезиев сулфат, калиев хлорид, железен сулфат, захароза, агар и дестилирана вода.

Чапек агар A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Източник: A. Medmyco / B. Снимка: д-р Дейвид Мидгли. Wikipedia.com

PH на агара на Чапек е 7,3, но има вариант, към който се добавя 10% млечна киселина, чието рН остава 3,5. Тази кисела среда се използва за култивиране на ацидофилни микроорганизми.

От друга страна, някои търговски къщи модифицираха състава на агара Чапек чрез промяна на магнезиев сулфат и бикалиев фосфат чрез глицерофосфат; тази модификация предотвратява образуването на утайка от магнезиев фосфат, наблюдавана с конвенционалната формула. По същия начин има и друг вариант, към който се добавя екстракт от дрожди.

И накрая, агарът Чапек се препоръчва от Американската асоциация за обществено здраве APHA за изследване на Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp и Penicillium sp. Тези видове се характеризират с това, че са микроорганизми в околната среда и опортюнистични патогени.

основа

Тази среда съдържа захароза; този въглехидрат служи като източник на въглерод, докато натриевият нитрат е източник на азот, но за разлика от други среди, предоставеният азот е неорганичен.

Поради тази причина средата на Чапек се счита за селективна, тъй като само микроорганизмите, способни да използват неорганични съединения като единствен източник на азот, могат да растат.

Като регулиращо вещество на осмоларността на средата е бипоталиев фосфат. От своя страна, магнезиевият сулфат, калиев хлорид и железен сулфат осигуряват основни минерали за растежа на сапрофитни (свободно живеещи) микроорганизми. Тази формула образува утайка от магнезиев фосфат.

И накрая, агар-агар е съединението, което осигурява твърдата консистенция на средата, а водата е разтворител за всички компоненти.

С модифицираната формула на агар Czapek не се образува утайка и тя подобрява ефективността на растежа на някои гъбички.

Изключителната киселинност на Киселия Чапек агар го прави по-селективна среда, позволявайки само растежа на ацидофилни микроорганизми, способни да използват неорганичен азот. Междувременно, агара Czapek-мая подобрява работата на някои гъби.

подготовка

Среден Чапек-Докс

Претеглят се 49 g от дехидратираната културална среда и се разтварят в дестилирана вода. Прилагайте топлина до кипене. Бъркайте сместа често до пълното й разтваряне.

-Czapek агар клинове

Разпределете разтворената смес в епруветки и автоклавирайте при 121 ° С за 15 минути. Когато изваждате от автоклава, хомогенизирайте преди полагането на епруветките и оставете да се втвърди.

-Capek плочи с агар

Автоклавирайте разтворената смес при 121 ° С в продължение на 15 минути и я оставете да се охлади до 50 ° С, хомогенизирайте и изсипете 20 ml в стерилни чаши на Петри. Оставете да се втвърди, обърнете и съхранявайте в хладилника до употреба.

PH трябва да остане 7,3 ± 0,2. Цветът на дехидратираната среда е бял, а подготвената среда е светло кехлибарена, леко мътна поради наличието на флокулираща утайка.

Czapek среда при кисело рН

Пригответе както вече беше описано, но добавете 10 ml стерилна 10% млечна киселина за всеки литър подготвена среда. Модифицираната среда на Чапек трябва да бъде с pH 3,5 ± 0,2.

Модифициран Чапек Среден

Претеглят се 45,4 g от дехидратираната среда и се разтварят в 1 литър вода. Останалата част от препарата е същата като описаната по-горе. Цветът на дехидратираната среда е бял, а подготвената среда е белезникава. Крайното pH на средата е 6,8 ± 0,2.

Чапек-мая среда

Нарича се още екстракт от дрожди Czapek (CYA). Съдържа елементите на класическия агар Czapek плюс екстракт от дрожди.

употреба

Средата Чапек се използва за търсене на сапрофитни микроорганизми в проби от почва, зеленчуци, зърнени храни, въздух, насекоми.

Capek агар при киселинно рН се използва за растеж на ацидофилни микроорганизми, докато модифицираният агар Czapek е особено полезен за образуването на хламидоспори при видове от комплекса Candida albicans.

И накрая, агаринът от Чапек е много полезен за изолирането на Aspergillus и Penicillium.

засети

-Чапек агар

За да търсите Actinomycetes в почвата, продължете както следва: пробата се обработва с фенолизирана вода в продължение на 30 минути и след това 1 ml от суспензията се засява върху агар Czapek. Инкубирайте при 28 ° C в продължение на 5 до 7 дни.

За зеленчукови, зърнени и проби от насекоми те се поставят директно върху агара. Можете също така да направите разреждания и да посяете 0,1 ml върху повърхността на агара.

-Модифициран агар на Чапек

За засяването се използва прав контур или игла, той се импрегнира с тампона и агарът се инокулира, като се направи пункция, докато докосне основата на плочата. Инкубирайте в продължение на 24 часа при 28 ° C и изследвайте под микроскоп над и под плочата, за да видите дали са се образували хламидоспори.

Температура и време на инкубация

Температурата и времето на инкубацията варират в зависимост от вида на микроорганизма, който трябва да бъде изолиран. Плочките обикновено се инкубират за една до две седмици в температурен диапазон от 20 до 25 ° C.

Съществуват обаче специфични условия за някои щамове. Например, повечето видове от рода Aspergillus растат оптимално при 30 ° C; обаче A. fumigatus расте при 50 ° C.

По отношение на времето на инкубация една или две седмици е нормално, обаче Candida albicans може да се развие за 24 до 48 часа при 25 ° C.

Характеристики на някои колонии на този носител

-Penicillium atrovenetum

Развива се през 12 дни инкубация при 27 ° C. Колониите им са малки (25 мм).

Колониите имат кадифен вид, с определена бяла рамка и синьо-зелен оттенък в центъра, който с течение на възрастта става сив. Обратната страна на колонията е оранжева, което прави средата същия цвят поради производството на пигмент.

-Aspergillus niger

Развива се с бял до жълт мицел и черни спори.

-Candida albicans

Развиват се кремаво-светло бежови колонии. В модифицирания агар на Чапек той образува хламидоспори.

-Aspergillus parasiticus

Тъмнозелен мицел се развива за 7 дни при 25 ° C.

QA

За да се оцени качеството на хранителната среда, могат да бъдат засадени сертифицирани контролни щамове, като: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger развива бял до жълт мицел и черни спори за около 5 дни, докато Candida albicans ще има задоволителен растеж за 24 часа инкубация при 25 ° C; колониите са кремаво оцветени.

Ограничения

Някои проучвания разкриват, че за възстановяването на актиномицетите, агарът с най-добър добив е картофен декстрозен агар, а агаринът Чапек е на второ място, но за възстановяването на Аспергилус и Пеницилий агарът Чапек е този, който осигурява най-високата степен на възстановяване.

Препратки

1. Dávila M, et al. Антагонистични актиномицети срещу фитопатогенни гъби от селскостопанско значение. Преподобни Мекс. Science. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Достъпно на: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Пшеници Á. Изолиране на щамовете на Aspergillus niger, произвеждащи охратоксин А, в съхранено зелено кафе (Coffea arabica). Преподобни Мекс. Mic. 2010; 32: 63-68. Достъпно на адрес.scielo.org.
3. Сътрудници на Уикипедия Чапек среден. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 13 януари 2019, 20:30 UTC. Достъпно на: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Модифициран Чапек-Докс агар. Достъпно на: condalab.com
5. Microkit Media Media. Чапек-Докс агар. Diosponible в: Medioscultivo.com