На агара EMB е селективен и диференциална среда, използвана за изолиране твърдо вещество култура на Грам-отрицателни бактерии, особено на Enterobacteriaceae и други Грам-отрицателни бактерии неизискващ. Известен е и от съкращението EAM, което означава еозин-метиленово синьо.
Тази среда е създадена от Holt-Harris and Teague през 1916 г. Съдържа пептон, лактоза, захароза, дикалиев фосфат, агар, еозин, метиленово синьо и вода. Той е много подобен на MacConkey Agar, особено когато използвате модифицирания EMB агар на Levine, който не съдържа захароза.
Метален блясък на Escherichia coli върху агар EMB Източник: Кармен Морено Гонсалес, от Wikimedia Commons
Всъщност всяка лаборатория решава дали да работи с една или друга, тъй като те изпълняват една и съща функция, въпреки че биохимично те са различни.
Той дори има същия недостатък като класическия агар на MacConkey по отношение на роялното производство от рода Proteus. Следователно, за да се избегне това явление, концентрацията на агар може да се увеличи с до 5%.
основа
селективен
EMB агар е фино селективен, тъй като съдържа анилиновите багрила (еозин и метиленово синьо), които действат като инхибитори, предотвратявайки растежа на повечето Грам-положителни бактерии и някои бързи грамо-отрицателни пръчки.
Този агар обаче има недостатъка, че някои грамположителни бактерии могат да устоят на присъствието на инхибиторните вещества и да се развият като малки безцветни пунктатни колонии, като Enterococcus faecalis и някои Staphylococcus.
Някои дрожди също могат да растат, например комплексът Candida albicans, който ще даде много малки розови колонии. Хламидоспорите могат дори да се развият от тази мая, ако пробата е дълбоко засята.
диференциал
От друга страна, EMB агарът също е диференциална среда, тъй като тези багрила заедно (еозин и метиленово синьо) имат свойството да образуват утайка при кисело рН, следователно служат като индикатори за неговото производство.
По този начин слабо ферментиращите бактерии от лактоза или захароза произвеждат лилави колонии в рамките на 24 до 48 часа. Например родовете Klebsiella, Enterobacter и Serratia.
Тези бактерии, които силно ферментират лактоза, като Escherichia coli или захароза, като Yersinia enterocolitica или Proteus penneri, образуват зеленикаво-черна утайка, придаваща характерен метален блясък на тези видове.
Трябва да се отбележи, че ако се използва EMB левинна среда (без захароза), Yersinia enterocolitica и Proteus penneri ще създадат ясни колонии.
Бактериите, които не ферментират лактоза или захароза, се подхранват от присъствието на пептони, които осигуряват необходимите за растежа на бактериите аминокиселини и азот и произвеждат бистри колонии. Например родовете Salmonella и Shigella, наред с други.
По същия начин е важно да се отбележи, че родът Acinetobacter може да представи колонии от синьо лавандула, въпреки че не е лактозен ферментатор или захароза, но има свойството да фиксира метиленово синьо върху своята клетъчна стена. Това може да се случи и с други окислителни бактерии.
подготовка
Оригиналната дехидратирана среда е със светло бежов цвят.
За да се приготви тази културална среда, 36 грама дехидратирана среда трябва да се претегли и суспендира в колба, съдържаща един литър дестилирана вода.
След като оставите сместа да почине 5 минути, отнесете колбата до източник на топлина, като бъркате енергично и постоянно, докато заври и се разтвори напълно.
Впоследствие вече разтворената културална среда трябва да се стерилизира, като се използва автоклав при 121 ° С в продължение на 15 минути.
В края на времето се изважда от автоклава и се оставя да престои за кратко. След това, все още топло (45-50 ° С), се подава 15-20 мл агар във всяка стерилна чаша Петри. Средството трябва да е лакмусово синьо.
След сервиране чиниите се оставят леко непокрити, докато агарът леко се охлади. След това се покриват и се оставят да се втвърдят напълно. Впоследствие те се подреждат в обърнати държачи за чинии и се съхраняват в хладилник (8 ° C) до употреба.
Тази процедура за предпочитане се провежда в качулка с ламинарен поток или пред горелка Bunsen, за да се избегне замърсяване.
Важно е да се има предвид, че всяка търговска къща ще посочи количеството, което трябва да бъде претеглено, за да се подготви културната среда.
Крайното pH на средата трябва да бъде 7,2 ± 0,2
Приложения
Тази среда се използва за сеитба на урина и изпражнения или какъвто и да е вид клиничен образец, особено ако се подозира наличието на невзрачни грамотрицателни бацили, като например бацилите, принадлежащи към семейство Enterobacteriaceae, които растат много добре на тази среда.
Ентеропатогенните бактерии от родовете Shigella и Salmonella се отличават със своите безцветни или леко кехлибарени колонии.
Други не-лактозни ферментиращи бацили като Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, наред с други, също растат.
По същия начин, тази среда е много полезна при микробиологичния анализ на храната и водата, тъй като е идеална за пълната потвърдителна фаза на определянето на колиформи, тоест за потвърждаване на присъствието на Е. coli от мътни EC бульони, от на най-вероятната техника на число (MPN).
QA
За да се увери, че прясно приготвената културална среда работи добре, могат да бъдат засадени контролни щамове, за да се наблюдават характеристиките на колониите и да се провери дали те дават според очакванията.
За това могат да се използват щамове ATCC или добре идентифицирани щамове на E.coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa и някои грамположителни бактерии, като S. aureus.
Очаква се E. coli да генерира добре развити синьо-черни колонии със зелен метален блясък. Като има предвид, че Enterobacter aerogenes и Klebsiella sp трябва да дадат добре развити синкаво-черни лигавични колонии.
От друга страна, Salmonella typhimurium и Shigella flexneri трябва да развият големи колонии, безцветни или с лек кехлибарен цвят.
И накрая, родът Pseudomonas aeruginosa расте като безцветни колонии с неправилни размери, докато грамоположителните бактерии трябва да бъдат напълно инхибирани или да растат рядко с много малки колонии.
Заключителни мисли
Понякога стерилизацията води до намаляване на метиленовото синьо, което показва средно оранжев цвят. За да може метиленовото синьо да се окисли и да възстанови лилавия цвят, трябва внимателно да се смесва, докато цветът не се възстанови.
Също така, след стерилизация, багрилото може да се утаи, така че трябва да се смеси добре, преди да сервирате чиниите на Петри.
Препратки
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B и Velázquez O. 2009. Техники за микробиологичен анализ на храните. 2-ро изд. Химически факултет, UNAM. Мексико.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Характеристика и разпространение на потенциално патогенни щамове Escherichia coli, изолирани от пилета бройлери от птицеферми в Перу. Rev. investiga. ветеринар. Перу 2012 23 (2): 209-219. Достъпно на: scielo.org.
- Laboratorios Conda SA Eosin и метиленово син агар. 2010. Достъпно на: condalab.com
- Britannia Laboratories. Levine EMB (С Eosin и метиленово синьо) 2011. Достъпно на адрес: britanialab.com
- BD Laboratories. BD EMB агар (Eosin метилен син агар), модифициран. 2013.Наличен на адрес: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. (5-то изд.). Аржентина, редакция Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Аржентина. Редакция Panamericana SA