В агар Ендо или ендо среда е твърда среда, диференциална и с известна степен на селективност култура. Оригиналната формула е създадена от Ендо през 1904 г. за разграничаване на лактозната ферментация от неферментиращите бактерии. Първоначално той е предназначен за изолиране на Salmonella typhi, но по-късно целта на средата се насочва към търсене на колиформи.
Принципът на Endo Agar е запазен, но формулировката му е претърпяла безброй промени през годините. Понастоящем средата е съставена от пептичен смилач от животинска тъкан, лактоза, дикалиев хидрогенфосфат, натриев сулфит, основен фуксин и агар.
A: Virgin Endo Agar B: семе ендо агар, в средата на агара можете да забележите металния блясък на щам на E. coli. Източник: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Основната употреба на средата е свързана с изолирането и диференцирането на грамотрицателни бацили, принадлежащи към семейството на Enterobacteriaceae и други близки семейства.
Дълго време се използва при откриване на колиформи във водни, млечни и хранителни проби, но днес употребата на тази среда е изместена от други с подобни функции. Някои микробиологични лаборатории обаче използват този агар за изолиране на Enterobacteriaceae от проби от клиничен произход.
основа
Ендо агарът съдържа пептони, които служат като източник на аминокиселини, азот, въглерод и енергия, необходими за растежа на неизискващите се микроорганизми.
От друга страна, леко селективният характер на агара се осигурява чрез добавяне на натриев сулфит и основен фуксин; и двата компонента частично или напълно инхибират растежа на повечето грамположителни бактерии.
Диференциалният характер се дава от наличието на ферментируемия въглехидрат, който в този случай е лактоза и основен фуксин, който също служи като показател за рН.
Грам-отрицателните бактерии, които растат върху този агар и са способни да ферментират лактоза, ще образуват силни розови колонии; като патогномонични на Ешерихия коли образуването на тъмночервени колонии с иридисцентно зеленикав метален блясък. Това се дължи на високото производство на киселини от въглехидратна ферментация.
Трябва да се отбележи, че средата около колониите също превръща силен розов цвят. Като има предвид, че ферментацията с не-лактозна грам отрицателна пръчка образува бледо розови колонии, подобни на средни или безцветни.
Дикалиев хидрогенфосфат балансира рН на средата, а агарът е компонентът, който осигурява твърдата консистенция.
подготовка
Ендо агар
Претеглят се 41,5 g от дехидратираната среда и се разтварят в 1 литър дестилирана вода. Загрейте сместа при често разбъркване, докато не се получи пълно разтваряне на средата. Стерилизирайте в автоклав при 121 ° С, при 15 lb налягане, в продължение на 15 минути.
Когато извадите от автоклава, оставете да се охлади до температура приблизително 45-50 ° С, разклатете сместа до хомогенизиране преди сервиране. Изсипете 20 ml в стерилни чаши на Петри.
Оставете чиниите да се втвърдят, обърнете и съхранявайте в табелка или завийте с тъмна хартия, преди да съхраните в хладилника. Много е важно да се предпази подготвената среда от пряка светлина. Най-добрата практика е да подготвите точното количество, което ще ви е необходимо.
Ако се съхраняват в хладилник, чиниите трябва да се оставят да се затоплят преди употреба.
PH на средата трябва да бъде между 7,2 до 7,6, а цветът на подготвената среда е бледо розов.
Вариант на M-Endo агар
Съществува друга версия на Endo агар (m-Endo), която следва формулата на McCarthy, Delaney и Grasso, която съдържа повече съединения и варира под формата на препарат.
Този вариант съдържа: лактоза, триптоза, ензимен усвояване на казеин, ензимен смилане на животинска тъкан, натриев хлорид, двуосновен калиев фосфат, натриев сулфит, екстракт от дрожди, моноосновен калиев фосфат, основен фуксин, натриев деоксихолат, лаурил сулфат натрий и агар.
В този случай 51 g от дехидратираната среда се претегля и се суспендира в 1 литър дестилирана вода, съдържаща 20 ml етанол.
Загрейте леко, като бъркате, докато средата се разтвори напълно. Не трябва да се прегрява и не трябва да се автоклавира. След като сместа е хомогенна, сервирайте в стерилни чашки на Петри и оставете да се втвърди.
употреба
В някои страни той все още се използва за преброяване на общи и фекални колиформи в проби от храна и вода, особено наличието на Escherichia coli като основен индикатор за фекално замърсяване.
M-Endo агар се препоръчва от Американската асоциация за обществено здраве (APHA) за мониторинг и контрол на програмите за дезинфекция и пречистване на отпадни води, както и за оценка на качеството на питейната вода.
Най-широко използваният метод е мембранната филтрация, след обогатяване на пробата с бульон от лаурил сулфат за 2 до 4 часа.
Той може да се използва и като заместител на EMB агар при микробиологичен анализ на храна и вода чрез най-вероятната техника на число (MPN), по-специално в пълната потвърдителна фаза за потвърждаване на присъствието на Е. coli от мътни EC бульони.
QA
Известни или сертифицирани контролни щамове се засяват за оценка на качеството на подготвената партида Endo агар.
Сред щамовете, които могат да се използват за тази цел, са: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 12022, Proteus miracalisterok ATCC 12022, Proteus miracalisterok ATCC 12022, Proteus miracalisterok ATCC 12022, Proteus miracalisterok ATCC 12022, Proteus miracalisterok ATCC 12022, Proteus miracalisterok ATCC 12022, Proteus miracalisterok ATCC 25222, Щамовете се посяват при изтощение и се инкубират при 37 ° С в продължение на 24 часа при аеробиоза.
Очакваните резултати са:
- За Escherichia coli: силни червени колонии, с метален блясък.
- При E. cloacae и K. pneumoniae колониите трябва да са розови мукоиди.
- При S. typhimurium, S. flexneri и P. mirabilis колониите обикновено са бледо розови или безцветни.
- Накрая се очаква E. faecalis да бъде частично инхибиран, следователно растежът му трябва да е слаб с много малки, силни розови колонии.
Ограничения
-Ендо средата има ниска селективна сила, следователно е възможно някои Грам положителни микроорганизми като Staphylococcus, Enterococcus и дори дрожди.
-Други бацили, които не принадлежат към семейство Enterobacteriaceae, могат да се развият в тази среда, като Pseudomonas sp и Aeromonas sp. Характеристиките на тези щамове са безцветни неправилни колонии.
-Този подготвен носител е много чувствителен към светлина, следователно продължителното излагане на него влошава индикаторната система, като необратимо уврежда средата.
-Съставките на средата се считат за канцерогенни, поради което трябва да се избягва директен контакт.
- Дехидратираната среда е много хигроскопична и трябва да се съхранява в оригиналния си контейнер при стайна температура, плътно затворен и в суха среда.
Препратки
- BD Laboratories. Ендо Агар 2013.Наличен на адрес: bd.com
- Неогенни лаборатории. М Ендо Агар. Достъпно на: foodsafety.neogen.com
- Ендо Агар Уикипедия, Свободната енциклопедия. 7 септември 2017, 08:27 UTC. 28 февруари 2019 г., 22:55 ч. Достъпно на: en.wikipedia.
- MercK Laboratory. Ендо агар. 2019.Достъпна на: merckmillipore.com
- Технически листови лаборатории. M –Ендо агар LES. 2015.Наличен на: liofilchem.net