АГАР ОТ ЦАРЕВИЧНО БРАШНО: ФОН, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

Агарът от царевично брашно е твърда културална среда, ниска хранителна сила, полезна за субкултивиране на някои гъбички и за демонстриране на хламидоспори в щамовете на комплекс Candida albicans. На английски е известен като царевично ястие агар.

Конвенционалната среда за царевична каша има много прост състав, съдържа царевична каша, агар-агар и вода. Поради ниското си хранително ниво, той е идеален за използване при поддържане на гъбични щамове за умерени периоди от време, особено черни гъби.

А. Графично представяне на комплекс Candida albicans върху агар от царевично брашно. Б. Хламидоспори на Candida albicans Complex, наблюдавани под микроскоп, образувани върху агар от царевична каша. Източник: A. GrahamColm / B. От: CDC / Dr. Уилям Каплан, любезното съдействие: Библиотека с изображения на общественото здраве.

Спорообразуването на комплекса Candida albicans се предпочита в тази среда, ако по време на приготвянето на агара се добави 1% от Tween 80. Образуването на хламидоспори е характерно за този вид и практически единственото, което засяга хората.

Има и други видове, които образуват хламидоспори, но е малко вероятно да засегнат хора, като Candida australis, присъстващ в изхвърляния на пингвин, или C. clausenii, който е рядко срещан сапрофит. Също така по изключение видовете C. stellatoidea и C. tropicalis биха могли да ги формират.

От друга страна, добавянето на глюкоза към средата на царевичната каша благоприятства образуването на пигменти в щамове Trichophytom rubrum.

Важно е да се подчертае, че има гъби, които не образуват хифи или псевдохифи в агар от царевична каша, като Cryptococcus neoformans, различаващи се от другите родове.

Царевичният агар може да се направи у дома в лаборатория или да се използва и търговска среда.

основа

Царевичното брашно е субстратът, агарът е втвърдяващото средство, а водата е разтворителят.

Царевичният агар може да бъде допълнен с tween 80 (сорбитан моноолеат или полисорбатен полиестер 80). Това съединение намалява повърхностното напрежение на средата поради своята емулгираща сила.

Освен това създава враждебна среда, която инхибира преувеличеното размножаване на клетките и стимулира растежа на хифи, като също благоприятства производството на хламидоспори; последните разглеждат структури на съпротива. Тази структура помага при идентифицирането на вида Candida albicans.

От своя страна, глюкозата в тази среда повишава способността за образуване на пигменти на някои гъбички.

Трябва да се отбележи, че средата на царевичното брашно с глюкоза не е полезна за демонстриране на хламидоспори в комплекс Candida albicans.

подготовка

Приготвяне на домашен царевичен агар

Претеглят се 47 г жълто царевично брашно и се разтварят в 500 мл дестилирана вода. Загрейте до 60 ° С, като разтворът се разбърква за период от приблизително 1 час. След това се филтрира през парче марля и памук, по желание може да се филтрира отново, като премине препарата през филтърна хартия Whatman No. 2.

Допълнете обема до 1000 ml с дестилирана вода. Добавете 17 g агар-агар, загрявайте, докато се разтвори. Автоклавирайте за 15 минути при 121 ºC.

Сервирайте в стерилни петри. Да се ​​съхранява в хладилник.

Цветът на приготвената среда е белезникав с бучка вид.

Ако искате да приготвите царевично брашно с глюкоза към описания по-горе препарат, добавете 10 g глюкоза.

Търговски агар от царевично брашно

Претеглят се 17 g дехидратирана среда и се разтварят в 1 литър дестилирана вода. Сместа може да се нагрява, като се разклаща леко, за да се разтвори напълно. Стерилизирайте в автоклав при 121 ºC, при 15 lb, в продължение на 15 минути.

Изсипете в стерилни петри. Оставете да се втвърди. Обърнете и съхранявайте в хладилника до употреба. Темпер преди употреба.

PH трябва да бъде 6,0 ± 0,2 при 25 ° C.

Агар от царевично брашно с Tween 80

За да отговаря на ISO 18416, агарът от царевична каша трябва да бъде приготвен, както следва:

Претегляйте 65 грама на литър и добавете 10 ml Tween 80. Загрейте и варете няколко минути, докато се разтвори, като внимавате да не прегреете прекалено много. Стерилизирайте при 121 ° С за 15 минути.

Агар от царевично брашно с глюкоза

За подобряване на хромогенната сила на колониите Trichophyton rubrum и диференцирането им от T. mentagrophytes, към оригиналната формула може да се добави 0,2% глюкоза. Не е необходимо да имате Tween 80, тъй като глюкозата инхибира образуването на хламидоспори.

употреба

Основно използването на агар от царевично брашно е предназначено за изследване на щамовете Candida, като спомага за идентифицирането им чрез характерното наблюдение на хламидоспорите при видовете албиканс. Тоест, използването на този агар служи като спомагателен метод за идентификация на тези дрожди.

На този агар могат да се развият както сапрофитни, така и патогенни видове, но всеки образува характерни мицелни структури. Например видовете от рода Torulopsis не произвеждат мицел и се размножават само чрез бластоконидии.

По същия начин видовете Trichosporon и Geotrichum произвеждат артроконидии върху агар от царевична каша и понякога е трудно да се разграничат едни и други.

Артроконидиите от рода Geotrichum произвеждат удължаване на хифите, наподобяващо хокейна пръчка.

Също така производството на пигменти с помощта на агар от царевично брашно, допълнено с глюкоза, е полезно при идентифицирането на Trichophytom rubrum.

засети

Подозрителните колонии Candida, получени в първичната културна среда - агар Sabouraud - от клинични проби, козметика, почви, между другото, се субкултивират върху агар от царевично брашно. Средата се посява и инкубира при 22 ° С за 24 до 48 часа. Времето за инкубация може да бъде удължено, ако е необходимо.

Демонстрация на хламидоспора

За тази цел агарът от царевично брашно с Tween 80 трябва да бъде инокулиран с помощта на техниката Dalmau. Този метод се състои в отнемане на част от предполагаемата колония с платинената дръжка и правене на три успоредни разреза в средата, като дръжката се държи на 45 °. Разфасовките трябва да бъдат разделени на разстояние 1 см един от друг.

Впоследствие върху посетите ивици се поставя по-рано пламнал обект на покритие по такъв начин, че половината да е покрита, а другата да е непокрита.

Инкубирайте засятите плочи при 30 ° С в продължение на 48-72 часа и след това се изследват под микроскоп през капака.

Поддържане на гъбични щамове

За поддържане на щамовете семената и отглежданите плочи се съхраняват в хладилник (4 до 8 ºC). По този начин те могат да продължат няколко седмици и да бъдат използвани за преподаване или изследователски цели.

QA

За контрола на стерилността плака се инкубира без инокулация при стайна температура, очаква се да няма растеж или промяна на цвета.

За контрол на качеството могат да бъдат засети известни щамове като: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Очакваните резултати са частично инхибиране на S. aureus и E. coli. Докато в останалите щамове се очаква задоволителен растеж.

Aspergillus niger расте с черни и спорурани колонии за приблизително време от 5 дни инкубация.

Дрождови колонии Candida albicans с производство на хламидоспори.

Saccharomyces cerevisiae произвеждат големи клетки от дрожди.

Ограничения

На дъното на плочата се образува жълта утайка, която не трябва да се бърка с колонии.

Препратки

1. Неогенни лаборатории. Царевична храна Агар. Достъпно на: foodsafety.neogen.com.
2. Microkit Media Media. Царевична храна Агар. Достъпно на: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Ръководство за идентификация на дрождите на Solís F. Достъпно на: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Обществено здраве, 2002; 19 (4): 206-208. Достъпно на: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Обща микология. 1994. II издание на Централния университет на Венецуела, издания на библиотеката. Каракас Венецуела.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
8. Castillo E. Сравнително проучване на някои макро- и микроскопични методи за изолиране и разпознаване на рода Candida. Колумбийска рев. На фармацевтичните химически науки. 1970; 3 (1): 33-57. Достъпно на: Ciencias.unal.edu.co