Твърдата среда на агар Hektoen или Hektoen enteric агар е селективна и диференциална култура. Той е създаден в института Хектоен от Кинг и Мецгер за изолиране на ентеропатогенни бактерии от родовете Shigella и Salmonella.
Средата се състои от протеозен пептон, екстракт от дрожди, жлъчни соли, лактоза, захароза, салицин, натриев тиосулфат, натриев хлорид, железен цитрат, амониев цитрат, бромотимол син, кисел фуксин и агар. Този състав дава възможност за разграничаване на родовете Shigella и Salmonella от останалите бактерии, способни да растат в тази среда.
A. Агар на Virgin Hektoen B. Агарен семенен Hektoen. Източник: Flickr.com/Оригиналният качител беше Philippinjl във френската Уикипедия.
Въпреки че има други среди със същата функция като агара Hektoen, той има по-голямо предимство в сравнение с други среди, особено когато искате да възстановите видовете Shigella.
Видовете и от двата пола причиняват тежки стомашно-чревни проблеми при хората поради консумацията на замърсена храна; следователно предаването е фекално - орално. Ето защо употребата на Hektoen агар е показана главно в микробиологичния анализ на проби от изпражнения и храни.
основа
Хектоен Агар съдържа пептони и екстракт от дрожди като източник на хранителни вещества, осигуряващи основните елементи за развитието на микробите.
Въпреки това, той също има жлъчни соли, които действат, като инхибират растежа на някои бактерии, особено грам положителни и някои грам отрицателни. Именно поради тази причина той се счита за избирателна среда.
От друга страна, агар Hektoen е диференциална среда. Това свойство се придава от наличието на ферментируеми въглехидрати, като лактоза, захароза и салицин, заедно с pH индикаторната система, представена от бромотимол син и кисел фуксин.
Всички бактерии, способни да растат на тази среда, които не принадлежат към род Salmonella и Shigella, ще развият колони от сьомга или оранжево с изключение на рода Proteus. Това се дължи на ферментацията на един или повече от присъстващите въглехидрати, което подкислява средата, което кара показателят за pH да се обърне.
От своя страна, родът Shigella и Salmonella не могат да ферментират нито един от присъстващите въглехидрати, като използват само пептони като енергиен източник, който алкализира средата и следователно техните колонии са синьо-зелени.
В тази среда могат да се разграничат и бактерии, способни да образуват сероводород (безцветен газ). Натриевият тиосулфат действа като източник на сяра, докато железният цитрат е разработчик. И двете съединения правят възможно образуването на черна утайка от железен сулфид, която показва реакцията.
Черната утайка в центъра на колонията с прозрачен ореол около нея придава вид на рибено око. Тази характеристика предполага наличието на рода Salmonella.
Накрая, натриевият хлорид поддържа осмотичния баланс и агарът осигурява твърдата консистенция на средата.
подготовка
Претеглят се 76 g от дехидратираната среда и се разтварят в литър дестилирана вода. Разклатете енергично сместа и след това я оставете да почива 10 до 15 минути. Може да се нагрява и вари, като дава въртеливи движения до пълното му разтваряне. Този носител не е автоклавиран.
Когато средата достигне температура приблизително 45 ° C, обем от 20 ml се излива директно в стерилни чаши на Петри.
Агарът се оставя да се втвърди. По това време те са готови за употреба. Препоръчва се да ги използвате незабавно. Ако това не е възможно, те се съхраняват в хладилника до употреба.
Плаките трябва да бъдат извадени предварително от хладилника, преди да се засадят, за да ги приведете до стайна температура.
PH на средата трябва да бъде 7,5 ± 0,2. Цветът на дехидратираната среда е лилав, а подготвената среда е кафеникаво-зелен.
употреба
Използването на агар Hektoen се препоръчва за търсене на бактерии от рода Shigella и Salmonella в изпражненията и хранителните проби.
Възможността за изолиране на тези бактерии значително се увеличава, ако пробата предварително се обогати в специални бульони, като бульон селенит, бульон от цистинов селенит, тетратионатен бульон и др.
Инокулумът трябва да е силен и сеитбата да се извърши чрез нанизване. Плаките се инкубират при 37 ° С в продължение на 24 до 48 часа при аеробиоза.
Инкубацията за 48 часа се препоръчва, тъй като характеристиките на колониите са по-ясни за тяхната интерпретация и диференциация по това време.
QA
За да се извърши контрол на качеството на тази среда, се използват сертифицирани бактериални щамове, като: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 и Shigella sonnei ATCC 25931.
Очакваните резултати са следните: Salmonella typhimurium и Salmonella enteritidis трябва да развият синьо-зелени колонии със или без черен център. Докато видовете Shigella ще растат като синьо-зелени колонии.
Могат да бъдат включени и щамове на Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 и Staphylococcus aureus ATCC 25923.
В тези случаи наблюдаваните характеристики са следните: E. coli и K. pneumoniae ще развият в тази среда сьомгово-оранжеви колонии с утайка от същия цвят около тях. Докато Proteus ще развие синьо-зелени колонии със или без черен център.
Докато S. aureus и E. faecalis трябва да бъдат инхибирани, E. faecalis от време на време успява да расте като много малки, жълти колонии.
От друга страна, тъй като тази среда не е автоклавирана, важно е да се оцени стерилността на средата. Следователно, от всяка подготвена партида трябва да се инкубират една до две неинокулирани плаки при 37 ° С в продължение на 24 часа при аеробиоза.
Очевидно не се очаква никакъв растеж в чинията.
Ограничения
-Видовете Proteus могат да се развият в тази среда и характеристиките на техните колонии могат да бъдат объркани с видовете Salmonella или Shigella. Поради тази причина всяка съмнителна колония трябва да бъде потвърдена с биохимични тестове.
-Необходимо е използването на тази среда с други по-малко селективни агари, тъй като ако търсеният микроорганизъм се намери в ниски концентрации, той може да не се развие в тази среда.
-Не прегрявайте по време на подготовката, тъй като прекомерната топлина променя състава на средата.
-Обикновено могат да се появят колонии от лактозна ферментираща салмонела, които могат да останат незабелязани.
Препратки
- Сътрудници на Уикипедия Хектоен ентеричен агар. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 13 март 2019 г., 23:38 UTC. Достъпно на:.wikipedia.org / Достъп на 16 март 2019 г.
- BD Laboratories. BD Hektoen ентеричен агар (HE Agar). 2013.Наличен на адрес: bd.com
- Britannia Laboratories. Хектоен Ентерик Агар. 2015.Наличен на: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Хектоен агар. Достъпно на: f-soria.es
- Difco & BBL Ръководство, Hektoen Enteric Agar. 2-ро издание. Достъпно в: bd.com/europe