LIA (ЛИЗИН ЖЕЛЯЗО) АГАР: ОСНОВА, ПРЕПАРАТ И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В агар LIA (лизин желязо) е биохимичен тест се използва за идентифициране на бактериите от семейство Enterobacteriaceae. Този носител е създаден от Edwards и Fife, въз основа на формулата на Falkow.

Първоначално този тест е бил бульон, съдържащ пептони, екстракт от дрожди, глюкоза, L-лизин, бромокрезол лилаво и дестилирана вода. Edwards и Fife добавят агар-агар, железен амониев цитрат и натриев тиосулфат.

Положителен и отрицателен тест за лизин декарбоксилиране. Източник: Свойство на снимки и диаграми на автора MSc. Мариелса гил

Тестът основно се състои в демонстриране на присъствието на ензима лизин декарбоксилаза, способна да реагира с карбоксилната група на аминокиселината L-лизин. Деаминиране на аминокиселината може също да възникне поради наличието на ензима лизин дезаминаза.

Освен това, съставът на средата показва способността на някои бактериални родове да произвеждат сероводород. И накрая, също така е възможно да се наблюдава генерирането или не на газ в средата.

основа

Пептони и екстракт от мая

Подобно на повечето културни среди, Lysine Iron Agar съдържа компоненти, които осигуряват източника на хранителни вещества, необходими за растежа на бактериите. Тези компоненти са представени от пептони и екстракт от дрожди.

гликоза

По същия начин този агар съдържа глюкоза като ферментируем въглехидрат. Известно е, че всички бактерии от семейството на Enterobacteriaceae ферментират глюкоза.

Тази стъпка е от решаващо значение, тъй като ще бъде отговорна за подкисляването на средата, което е съществено условие за ензима лизин декарбоксилаза - ако е налице - да действа върху субстрата си.

При някои бактериални родове може да се наблюдава производство на газ поради ферментация на глюкоза.

Газът е доказан, когато има изместване на агара в епруветката, оставяйки празно пространство в долната част на тръбата или чрез разрушаване на средата на две или повече части.

L-лизин

След като лизинът се декарбоксилира, се образуват диамин (кадаверин) и въглероден диоксид.

Декарбоксилирането се извършва в присъствието на коензим пиридоксал фосфат. Тази реакция е необратима.

PH индикатор (бромокрезол лилав)

Всички промени на pH, които настъпват в средата от различните реакции, се откриват от индикатора на pH на лилавия бромокрезол.

В този смисъл, когато има подкиселяване, средата става жълта, а когато има алкализация, средата се връща към първоначалния лилав или лилав цвят.

Когато дезаминирането на лизин се случи поради наличието на ензима лизин дезаминаза, на повърхността се образува червеникав цвят, типичен за родовете Proteus, Providencia и някои видове Morganella.

Това се дължи на факта, че по време на процеса на дезаминиране се образува алфа-кето-въглеродна киселина, която реагира с амониев цитрат в присъствието на кислород, което причинява гореспоменатия цвят.

Железен амониев цитрат и натриев тиосулфат

От друга страна, бактериите, които произвеждат сероводород, ще бъдат доказани от наличието на натриев тиосулфат (източник на сяра) и железен амониев цитрат, който е разработчик на H ₂ S.

Бактериите, които имат ензим тиосулфат редуктаза имат способността да действа чрез намаляване на натриев тиосулфат настоящото, образувайки сулфит и сероводород (H ₂ S).

Последният е безцветен газ, но при взаимодействие с желязната сол образува железен метален сулфид, който е неразтворимо съединение (видима черна утайка).

Въпреки това, способността да образуват H ₂ S с тази среда не е много надежден, защото някои лизин декарбоксилаза отрицателни бактерии в състояние да произвежда H ₂ S няма да се образува черна утайка, като киселинността на средни пречи на. Затова се препоръчва да се провери с други среди, които съдържат желязо.

Тълкуване на теста

Лизин декарбоксилиране

Епруветките трябва да бъдат прочетени след 24 часа инкубация, в противен случай съществува риск от неправилно тълкуване на реакцията, съобщаване на фалшиви отрицания.

Трябва да се помни, че първата реакция, която ще се случи, ще бъде ферментацията на глюкозата, следователно всички епруветки след 10 до 12 часа ще пожълтяват.

Ако в края на инкубационното време (24 часа) се наблюдава жълт фон с лилава или лилава повърхност, реакцията е отрицателна. Лилавият цвят на повърхността съответства на алкализирането на средата чрез използването на пептони.

Положителна реакция е тази, при която дъното и повърхността на тръбата са напълно лилави, тоест тя се връща към първоначалния цвят.

Следователно, който определя положителността на теста, е основата или фона на средата. Ако се съмнявате в цвета, той може да бъде сравнен с неинокулирана тръба LIA.

Дезаминиране на лизин

Епруветка, която показва лизиново дезаминиране, ще има червеникаво-бордова повърхност и жълт (кисел) фон, или цялата тръба ще има червеникаво-борден цвят.

Тази реакция се интерпретира като отрицателна за лизин декарбоксилиране, но положителна за дезаминиране на лизин.

Тази реакция се дефинира и интерпретира на рамката.

Производство на сероводород (H

Положителна реакция се наблюдава от появата на черна утайка във всички или части от средата. Обикновено между ръба на скосяването и основата.

Ако утайката се появи в цялата тръба, тя няма да разкрие другите реакции, които се появяват в средата.

Записване на резултатите

При интерпретация на теста резултатите се записват, както следва:

Първо се чете скосяването, след това дъното или блокът, след това производството на H ₂ S и накрая производството на газ.

Пример: K / A + (-). Това означава:

• K: Алкална рамка (лилав цвят)
• О: Киселинен фон (жълт), т.е. отрицателна реакция на декарбоксилиране и отрицателно дезаминиране.
• +: Производство на сероводород
• (-): Без газ.

подготовка

Претеглят се 35 g дехидратирана среда от лизарен железен агар и се разтварят в литър дестилирана вода.

Загрейте, докато агарът се разтвори напълно, за целта оставете да ври за минута, като разбърквате често. Разпределете 4 ml от средата в 13/100 епруветки с памучни капачки.

Стерилизирайте в автоклав при 121 ° С за 15 минути. Извадете от автоклава и оставете да стои под ъгъл, така че да има дълбока основа и къс скос.

Да се ​​съхранява в хладилник 2-8 ° C. Оставете го да загрее преди сеитбата на бактериалния щам.

Цветът на дехидратираната среда е бежов, а подготвената среда е червеникаво лилава.

Крайното рН на подготвената среда е 6,7 ± 0,2

Средата пожълтява при pH 5,2 или по-малко и е лилава при pH 6,5 и по-високо.

Приложения

Този тест, заедно с други биохимични тестове, се използва за идентифициране на бацили от семейство Enterobacteriaceae.

Средата се засява с прав контур или игла, прави се една или две пробивки в долната част на тръбата и след това повърхността на средата се отбелязва в зигзаг.

Инкубирайте за 24 часа при 35-37 ° С при аеробиоза. Ако е необходимо, се оставя да се инкубира още 24 часа.

Полезно е да се диференцира лактозо-отрицателните видове Citrobacter от Salmonellas sp.

Източник: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.

Препратки

1. Mac Faddin J. (2003). Биохимични тестове за идентифициране на бактерии с клинично значение. 3-то изд. Редакция Panamericana. Буенос Айрес. Аржентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
4. Britannia Laboratories. Лизаров железен агар. 2015.Наличен на: britanialab.com
5. BD Laboratories. BBL Lysine Iron Agar наклон. 2007. Достъпно на: bd.com
6. Valtek Laboratories. Среден LIA 2009. Достъпно на: andinamedica.com