AGAR MRS: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В агар ПСС е селективна културална среда твърдо вещество се използва за изолиране и изброяване на млечнокисели бактерии, особено от рода Lactobacillus. Този агар е създаден през 1960 г. от Man, Rogosa и Sharpe, носещ същото име, но поради своята сложност често се използва съкращението MRS.

Състои се от протеозен пептон, месен екстракт, екстракт от дрожди, глюкоза, сорбитан монолеат, дикалиев фосфат, натриев ацетат, амониев цитрат, магнезиев сулфат, манганов сулфат и агар.

Man Rogosa и Sharpe Agar (MRS), засети с Lactobacillus sp. Източник: Снимка, дарена за тази статия от авторите: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Снимка, направена по време на разследването, озаглавена: Оценка на млечнокисели бактерии и бифидобактерии с пробиотичен потенциал в кърмата и детските изпражнения, Този състав позволява правилното развитие на млечнокисели бактерии от клинични проби, като изпражнения, вагинален секрет, орални проби и кърма, както и млечни и месни храни.

Не се използва рутинно в клинични лаборатории, тъй като млечнокиселите бактерии рядко участват в болестни процеси. В областта на хранителната микробиология обаче употребата на MRS агар е по-честа.

От друга страна, тази среда се използва от някои изследователски центрове, чиято цел е изследване на млечнокисели бактерии.

основа

Man, Rogosa и Sharpe агар има доста сложен състав. Чрез разбиването на функцията на всеки от неговите компоненти може да се обясни основата му.

Протеиновият пептон, месният екстракт, екстрактът от дрожди и глюкозата са хранителни вещества, които осигуряват източника на въглерод, азот, витамини и минерали, необходими за растежа на бактериите. Освен това, глюкозата е универсалният източник на енергия, използван в повечето културни среди.

От друга страна, за да се благоприятства растежа на млечнокисели бактерии, е необходимо наличието на кофактори (катиони), които са от съществено значение за метаболизма на лактобацилите и свързаните с тях бактерии; Тези съединения са натриевите, магнезиевите и мангановите соли.

По същия начин сорбитан монолеатът или полисорбат 80 са важен източник на мастни киселини, тъй като се абсорбират като хранителни вещества.

Освен това сорбитан монолеатът и амониевият цитрат действат, като инхибират развитието на съпътстващата флора, по-специално грамотрицателни бактерии, осигурявайки селективен характер на този агар.

И накрая, агар-агарът е този, който осигурява твърдата консистенция на средата.

Има и други варианти на агар на Man Rogosa Sharpe; един от тях е допълнен с цистеин (MRSc), много полезен за изолирането на бифидобактерии, сред другите микроорганизми. От друга страна, има MRS средата, допълнена с неомицин, паромомицин, налидиксинова киселина и литиев хлорид, специална за селективното броене на бифидобактериите в млечните продукти.

подготовка

Претеглят се 68,25 грама дехидратирана среда и се разтварят в един литър дестилирана вода. Оставете да престои 5 минути. За да се разтвори напълно, обърнете се към източник на топлина, като бъркате често и кипнете от 1 до 2 минути. Стерилизирайте в автоклав при 121 ° С за 15 минути.

Когато напускате автоклава, оставете да престои няколко минути и разпределете, докато е още горещ, в стерилни чаши Петри.

Оставете да се втвърди и обърне плочи, наредете в стелажни стелажи и хладилник до употреба. Оставете чиниите да се затоплят до стайна температура преди употреба.

РН на средата трябва да бъде 6,4 ± 0,2. Някои търговски къщи препоръчват pH между 5,5 и 5,9.

Дехидратираната среда е бежова на цвят, а приготвената е тъмно кехлибарена.

Както дехидратираната среда, така и подготвените плочи трябва да се съхраняват при 2-8 ° C.

Приложения

MRS агаровите плочи могат да бъдат засяти на повърхността (изтощение или шпатула Drigalski). Може да се сее и на дълбочина. Плаките трябва да се инкубират при 37 ° С в microaerophilicity (4% О ₂ и 5-10% СО ₂) в продължение на 24 до 72 часа.

Методът на сеитба се избира според преследваната цел (изолиране или преброяване).

Характеристики на колониите

Предполагаемите колонии на Lactobacillus придобиват белезникав цвят и имат мукоиден или кремав вид на този агар. Впоследствие те трябва да бъдат идентифицирани.

Изолиране на млечнокисели бактерии

За това се използва повърхностно засяване. Пробите, които ще бъдат засети, изискват предходна процедура.

В случай на проби от кърма се препоръчва центрофугиране на 1 ml от пробата при 14 000 об / мин за 10 минути, за да се премахне мастният слой. 900 ul се изхвърлят, а в останалите 100 ul седиментът се суспендира и се излива върху повърхността на MRS агар, след което трябва да се разпредели равномерно с шпатула Drigalski.

В случай на проби от изпражнения, един (1) грам изпражнения се претегля и хомогенизира в 9 mL 0,1% стерилна пептонова вода, което съответства на разреждане 1/10. След това се правят серийни разреждания, докато се получи окончателно разреждане от 10 ^-4.

Накрая се вземат 100 ul от разрежданията 10 ^-2, 10 ^-3 и 10 ^-4 и всяко разреждане се посява върху MRS агар, разпределяйки равномерно с шпатула Drigalski.

Млечнокиселите бактерии се броят

В този случай сеитбата се извършва на дълбочина.

За проби от кърма се вземат 1 ml и се поставят в стерилна конична пластмасова епруветка. MRS агар се добавя при приблизителна температура от 40 ° С до краен обем от 25 ml, при което се получава хомогенна смес. Впоследствие се изсипва в стерилни чашки Петри по еднакъв начин и се оставя да престои до полимеризация.

За проби от изпражнения се правят разреждания, както е описано по-горе. Вземете 1 ml от всяко разреждане и го поставете в стерилни конусовидни пластмасови епруветки. Разтворен MRS агар се добавя към обем от 25 mL.

Сместа от всяко разреждане се излива равномерно в стерилни петри. Накрая се оставя да почива до полимеризация.

Колонията се разчита на агар Man Rogosa и Sharpe (MRS). Източник: Снимка, дарена за тази статия. Автори: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Снимка, направена по време на изследването, озаглавена: Оценка на млечнокисели бактерии и бифидобактерии с пробиотичен потенциал в кърмата и детските изпражнения.

Ниво на изследване

Всеки ден изследването на млечнокиселите бактерии набира все по-голям интерес; Изследователите по-специално се стремят да научат за новите щамове и техния потенциал като стартерни ферменти за стандартизация в производството на млечни продукти, наред с други приложения.

В този смисъл Alvarado et al. (2007) използва MRS агар за извършване на проучване, при което те изолират, идентифицират и характеризират млечнокисели бактерии, присъстващи в занаятчийско андско пушено венецуелско сирене.

В сиренето те откриха присъствието на бактерии от родовете Lactococcus и Lactobacillus и стигнаха до извода, че смесите на изолирани щамове са подходящи като стартови щамове при производството на сирена от пастьоризирано мляко.

От друга страна, Sánchez et al. (2017) използва MRS агар за изследване на наличието на млечнокисели бактерии в храносмилателния тракт на прасенца, за да се използват като местни пробиотици, които увеличават продуктивността на здрави прасенца.

С тази среда те успяха да изолират четири вида: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae и Pediococcus pentosaceus.

По същия начин, Báez et al. (2019) използва MRS агар за оценка на млечнокисели бактерии (LAB) и бифидобактерии с пробиотичен потенциал в кърмата и кърмачетата на бебето.

Те успяха да изолират 11 BAL и 3 Bifidobacteria sp в кърмата и 8 BAL и 2 Bifidobacteria sp. в изпражненията. Всички отговаряха на определени параметри, които ги доказват като бактерии с пробиотична активност.

Авторите заключават, че както кърмата, така и изпражненията от изключително кърмачета служат като естествени източници на пробиотични бактерии.

QA

За да се оцени качеството на MRS агар, контролни щамове като:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli и Bacillus cerei.

Очакваните резултати са задоволителен растеж за първите 6 бактерии, докато E. coli и Bacillus cereus трябва да бъдат напълно инхибирани.

Препратки

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Изолиране, идентификация и характеристика на млечнокисели бактерии от венецуелски пушен андски сирене Artisan. Използването му като начална култура. Са-. (Маракайбо) 2007; 17 (3): 301-308. Достъпно на: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Изолация на млечнокисели бактерии от храносмилателния тракт на прасенцето. Rev. investiga. ветеринар. Перу 2017; 28 (3): 730-736. Достъпно на: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Оценка на млечнокисели бактерии и бифидобактерии с пробиотичен потенциал в майчиното мляко и фекалиите на кърмачета в община Acevedo, Miranda 2017. Бакалавърска работа за придобиване на право на бакалавърска степен в биоанализ. Университет в Карабобо, Венецуела.
4. Британска лаборатория. MRS агар. 2015.Наличен на: britanialab.com
5. Сътрудници на Уикипедия MRS агар. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 10 януари 2018 г., 19:44 UTC. Достъпно на: wikipedia.org Достъпно на 17 февруари 2019 г.
6. Roy D. Media за изолиране и изброяване на бифидобактерии в млечните продукти. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.