ХРАНИТЕЛЕН АГАР: ОБОСНОВКА, ПРИГОТВЯНЕ И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

На агара хранителен е неселективен среда и не диференциално твърдо вещество култура. Всички видове бактерии, които не са взискателни от хранителна гледна точка, растат в тази среда.

Това е проста среда и, въпреки името си, съдържа по-ниска хранителна стойност в сравнение с други подобни медии, като Brain Heart Infusion Agar или Trypticase Soy Agar.

Колонията разчита на хранителен агар

Полезността му в лабораторията е много разнообразна. Използва се главно за субкултивиране на видове, поддържане на щамове, преброяване на колонии като основа за приготвяне на кръвен агар, наред с други.

По същия начин, благодарение на светло бежовия си цвят, производството на пигменти, генерирани от някои бактериални щамове, може да се отличи по изключение, като зеленикавия пигмент на Pseudomonas aeruginosa, тухленочервеният пигмент, произведен от Serratia marcescens при стайна температура, златистожълтият пигмент на Staphylococcus ауреус, наред с други.

В допълнение, тя е една от най-евтините растящи медии, открити на пазара.

основа

Както вече беше споменато по-горе, това е много проста среда, която разчита на осигуряване на хранителни вещества за растеж на бактерии без ограничение и без сложни реакции за интерпретация.

Тъй като средата е полупрозрачна, тя е идеална за преброяване на колонии по метода на дълбоко засяване.

композиция

Състои се предимно от месен екстракт или екстракт от мая, пептони или желатин панкреатичен дайджест, агар-агар, натриев хлорид и дестилирана вода.

Екстрактът от месо или мая и пептоните представляват основните източници на въглерод и минерали (азот, фосфор и сяра), които ще бъдат използвани от бактериите като източник на енергия и растежни фактори.

По същия начин, агар-агар е основата на всички твърди културни среди, идващи да заменят желатина, което беше първото базово съединение, използвано от Робърт Кох, за да даде твърда консистенция на неговата среда.

Агар е полизахарид, съставен от галактоза, галактоманан, агароза и агаропектин. Задава се при 40 ° C и се топи близо до 100 ° C.

От своя страна, натриевият хлорид осигурява на средата осмоларността, необходима за развитието на бактериите.

Накрая, водата служи за хидратиране и разтваряне на лиофилизираните съединения. Трябва да се използва дестилирана вода, регулирана до неутрално pH. Водата от чешмата не трябва да се използва, тъй като съдържа калций и магнезий, които могат да реагират с фосфати в средата и да образуват неразтворими соли.

подготовка

За един литър хранителен агар трябва да се претегля 31 g от дехидратираната среда. Поставете го в колба и разтворете в литър дестилирана вода. След 5 минути стоене се нагрява над източник на топлина и се разбърква постоянно до кипене в продължение на 1 или 2 минути.

Подготовка на хранителна среда.

След това колбата се поставя в автоклав и се стерилизира при 121 ° С за 20 минути.

Стерилизация в автоклав

В края на времето той се изважда от автоклава и се сервира в стерилни чашки на Петри, като се използва ламинарен капак или горелката Bunsen.

Ако чиниите на Петри са за еднократна употреба (пластмасови), средата трябва да се разпредели, когато агарът има температура приблизително 50 ° С, за да не се деформира от прекомерна топлина.

Оставя се да се втвърди и се съхранява на обърнат държач на табела и се съхранява в хладилник при 2-8 ° C до употреба.

Плочите трябва да се темперират, преди да бъдат засети. Плочките с хранителен агар не трябва да се използват, ако са замърсени или дехидратирани.

PH на подготвената среда трябва да се регулира на 7,3 ± 0,2.

Приложения

Това е най-простата културална среда, използвана в лабораторията по микробиология. Формулировката му е отлична за растежа на неизискващите бактерии.

Основните му приложения са обяснени по-долу:

Като основа за приготвяне на кръвен агар

Тази среда понякога се използва като основа за приготвяне на кръвен агар, но не е най-често използваната основа.

Стимулирайте спорообразуването на бактерии, образуващи спори

Тази културална среда е особено полезна за стимулиране на спорообразуването на спорообразуващи бактерии като Bacillus sp.

За това се засява щам от рода Bacillus и се инкубира за 24 часа при 37 ° C при аеробиоза. След като колониите нараснат, плочата се подлага на температурен стрес, тоест температурата на фурната се повишава до 44 ° C и се оставя за още 24 часа или се поставя в хладилник за 24 часа.

В края на времето се правят намазки от културата и се оцветяват с грам петно ​​или петно ​​от спори на Shaeffer-Fulton. В тях ще се наблюдават бацилите с ендоспори (спори вътре в бацила) и екзоспори (спори извън бацила).

Поддържане на напрежение

Някои изследователски лаборатории или университетски лаборатории за преподаване изискват поддържане на жизнеспособни бактерии с клинично значение колкото е възможно по-дълго, за да се използва банката бактерии (бактериотека) за изследователска работа или за подготовка на учебни практики, когато Студентите ще се научат да манипулират и идентифицират тези микроорганизми.

За тази цел може да се използва хранителен агар, както и мозъчен инфузионен агар. Агарът се приготвя, излива се в епруветки с бакелитен капак и се накланя върху основа по такъв начин, че агарът се втвърдява, образувайки блок отдолу и скосяване на повърхността (флейта човка).

Всяка епруветка е маркирана с името на бактериите, които ще бъдат засети, и датата. Всяка от бактериите ще бъде засета върху скосяването и ще се инкубира в продължение на 24 часа. След като колониите нараснат, епруветките се съхраняват при стайна температура.

Бактериотеката трябва да бъде подновена от 1 до 3 месеца, за да се избегне замърсяване и дехидратация на средата, както и смъртта на бактериите.

По този начин могат да се поддържат само непридирчиви бактерии.

Брой колонии

Въпреки че има специализирани средства за преброяване на колонии, като стандартен броячен агар, хранителният агар може да се използва за тази цел или чрез повърхностно засяване с дрогалска шпатула, или на дълбочина. Поради тази причина е много полезен при микробиологичния анализ на храната и водата.

Извършване на диагностични тестове

Тъй като това е среда, която не съдържа кръв или други добавки, тя е идеална за вземане на колонии, отглеждани на тази среда, за извършване на каталазния тест.

По същия начин, поради светлия си цвят, е показано да се извършват тестове за оксидаза директно върху площ от засетият агар, без смущения.

Възстановяване на мезофилни аероби от развлекателни солени води (Плажове)

Хранителният агар, приготвен с 10% морска вода, е полезен за оценка на мезофилните аероби в плажните води.

По този начин може да се оцени реалното ниво на замърсяване, което водите имат с тези микроорганизми, тъй като при този тип проби резултатите се припокриват, когато се използват културни среди, приготвени по конвенционалния начин.

Това е доказано от Cortez et al. през 2013 г. в изследователска работа.

Това може да се обясни поради рязката промяна, която бактериите претърпяват при преминаване от хиперсолирана среда в среда с ниско съдържание на сол, следователно микроорганизмите навлизат в състояние на летаргия, в която са жизнеспособни, но не могат да се култивират.

Препратки

1. "Хранителен агар." Уикипедия, Свободната енциклопедия. 13 септември 2016, 20:33 UTC. 29 декември 2018, 21:04 en.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Аржентина. Редакция Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. (5-то изд.). Аржентина, редакция Panamericana SA
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Ефект на културните среди, подготвени с морска вода, върху показателите за здравето в морските води на курортите в Чичиривиче, Фалкон, Венецуела. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M и Cardoso M. Микробиологично качество на водата за осеменяване на дози, за свине. Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Практическа клинична микробиология. Университет в Кадис, 2-ро издание. Служба за публикации на UCA.