КАРТОФЕН ДЕКСТРОЗЕН АГАР: ОБОСНОВКА, ПРИГОТВЯНЕ И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В картофено декстрозен агар е средно, стабилно без - селективна хранителна култура. В него могат да растат бактериални и гъбични видове, но употребата му е особено показана за изолиране на нишковидни гъби и дрожди. Известен е също като PDA среда за английския израз Potato Dextrose Agar.

Той е особено полезен за изолирането на фитопатогенни гъби, тоест тези, които засягат растенията. За засяване на пробите от заразени зеленчуци могат да се използват други средства като Sabouraud агар или малта-агар, но за рутинна употреба, картофен декстрозен агар се предпочита, тъй като се получава по-голямо спорообразуване.

Aspergillus niger и Sinemas съответно върху картофен декстрозен агар. Източник: Alextrevelian 006 в английската Wikipedia / Joselrojas

Използва се и за преброяване на гъбични колонии в проби от козметика, фармацевтични продукти и някои млечни храни. По същия начин той е подходящ за засяване на проби от скрап от кожата в търсене на дерматофити, които растат много добре в тази среда, развивайки характерните си пигменти.

Картофената декстрозна среда е много проста и лесна среда за приготвяне в лабораторията. Съдържа, както подсказва името му, инфузия на картофи, декстроза и агар-агар. Освен това могат да се добавят инхибиторни вещества, за да се предотврати растежът на бактерии и да се увеличи селективността за гъбични видове.

основа

Картофеният декстрозен агар е културална среда, която осигурява хранителните елементи, необходими за развитието на нишковидни гъби и дрожди.

Комбинацията от инфузия на картофи с глюкоза осигурява перфектния източник на енергия за задоволителен растеж на гъбичките. Докато агарът е този, който осигурява консистенцията на средата.

Самата среда не инхибира растежа на бактериите, следователно е неселективна среда. За да стане избирателен, се нуждае от добавяне на инхибиращи вещества като винена киселина или антибиотици.

подготовка

-Домашна (нетърговска) подготовка на картофен декстрозен агар

Петри чинии

Приготвя се както следва:

На първо място картофите се измиват много добре, премахвайки почвата, която притежават. Нарязват се на тънки филийки с всичко и черупка. 200 грама картофи се претеглят и се варят в литър дестилирана вода за половин час.

В края на времето филтрирайте или прецедете целия препарат през тензух.

Получената течност се допълва с дестилирана вода до един литър. Добавете 20 g агар-агар и 20 g декстроза към инфузията, разбъркайте добре и автоклавирайте при 121 ° С, при 15 килограма налягане за 15 минути.

Оставете да се охлади до 50 ° C и сервирайте в стерилни петри. Приготвените чинии се съхраняват в хладилник.

Клиновете

Могат да се приготвят и клинове от картофен декстрозен агар.

В този случай, преди стерилизиране в автоклава, 12 до 15 ml от средата се поставят в епруветки, по-късно те се автоклавират и при оставяне лежат на специални опори, докато се втвърди. Да се ​​съхранява в хладилник.

Средата остава при рН 5,6 ± 0,2, но някои лаборатории добавят 10% винена киселина, за да понижат pH до 3,1 ± 0,1, за да инхибират растежа на бактериите.

В същия смисъл другите лаборатории предпочитат да добавят антибиотици, за да го направят селективен за отглеждането на гъбичките и да предотвратят растежа на бактериите.

-Търговска подготовка на картофен декстрозен агар

Претеглят се 39 g от наличната в търговската мрежа дехидратирана среда и се разтварят в един литър дестилирана вода. Оставете го да почине 5 минути.

Сместа се загрява при често разбъркване до пълното й разтваряне. Впоследствие се стерилизира в автоклав при 121 ° С в продължение на 15 минути.

Може да се приготвят плочи или клинове. Продължете както е описано по-горе.

PH остава 5,6 ± 0,2. Ако се желае pH от 3,1, трябва да се добавят 14 ml стерилна 20% винена киселина, преди да се сервират в чиниите.

Суровата среда е бежова, а подготвената среда е светло кехлибарена с леко мътна или опалесцираща външност.

Приложения

Процес за засяване на растителни проби върху картофен декстрозен агар

-За оцветени листа

Листата се нарязват на парчета.

В 50-кубикова чаша с 50% алкохол поставете парчетата листа (оцветени и здрави парчета), за да дезинфекцирате повърхността за 20 до 30 секунди. Изхвърлете алкохола и добавете 20% натриев хипохлорит за 40 до 50 секунди, ако те са тънки листа и увеличете времето до 80 секунди, ако е кора и трупи.

Изхвърлете натриевия хипохлорит и вземете дезинфекцираните парчета със стерилни щипци и ги поставете върху повърхността на средата (максимум 10 броя). Задайте датата и инкубирайте на 20-30 ° C.

-За плодове и грудки

Ако плодът е месест, отворете засегнатите от гъбата плодове и вземете парчета със стерилен скалпел както от болните, така и от здравите части и ги поставете върху повърхността на агара.

Ако плодът е цитрусов, като лимон или портокал, той трябва да бъде отворен и семената му да бъдат засети.

Когато повърхността на плода е засегната и се наблюдават спори, идеалът е да се използва методът на решетка върху плочата; Това се състои в докосване на спорите със стерилизирана и охладена шпатула с форма „L” и след това правене на зигзаг засяване 2 до 3 пъти върху агара.

-За зърна

Те се дезинфекцират, както е описано в листата и по-късно се поставят върху агара.

-За клони и стъбла

Кората се остъргва и по-късно се вземат парчета от здравата и болната част и се сеят директно върху агара.

Посетите плочи се инкубират аеробно при 20-30 ° С за 72 часа.

Процес за засяване на проби от кожата, косата или ноктите върху картофен декстрозен агар

Вземането на проби трябва да се извърши с помощта на скалапелен нож № 11, или за рязане на засегнатата коса, кожни люспи или нокти в търсене на дерматофити. Преди да вземете пробата, зоната трябва да се дезинфекцира със 70% алкохол.

-Пример за кожа

При люспести лезии ръбът на лезията трябва да бъде изстърган, тъй като гъбичките са по-склонни да бъдат открити там.

При ексудативни лезии пробата се взема със сух или мокър тампон. Посейте веднага върху картофен декстрозен агар или агар Sabouraud. Избягвайте транспортните средства.

Друг метод за вземане на проби е чрез техниката на квадратен килим на Mariat и Adan Campos. В този случай засегнатата зона се трие 5 пъти с парче стерилна вълна за последващо отглеждане.

Пробата може да бъде поставена директно в хранителната среда.

-Пример за косми

В зависимост от патологията засегнатата част може да бъде отрязана или изкоренена. Пробата се поставя в хранителната среда.

-Пример за нокти

Конкретна част от засегнатия нокът може да бъде остъргана или нарязана. Това ще зависи от вида на нараняването.

Нарежете пробата на 1 mm парчета преди сеитбата, за да увеличите вероятността от контакт на гъбата със средата за култивиране.

Процедура за идентификация

Получените в плаката колонии се изолират в епруветки, съдържащи картофен декстрозен агар за извършване на макроскопско изследване на колониите (външен вид, цвят, консистенция, степен на развитие.

Микроскопското изследване (наблюдение на структурите и техните образувания) може да се извърши чрез микрокултури или директно наблюдение под микроскоп между слайда и слайда.

Брой колонии

Тази среда също може да се използва за определяне на гъбичния и дрожджовия товар, присъстващ в растителни, хранителни, козметични или лекарствени проби. За тази цел се използва картофен декстрозен агар, допълнен с антибиотици, като например: (хлорамфеникол, хлоротетрациклин или и двете).

Изсипете 1 ml от пробата - за предпочитане разредена - в стерилна и празна чаша на Петри, след това разтопете тампон от картофен декстрозен агар и оставете да се охлади до 45 ° C. Изсипете върху купата на Петри и завъртете до хомогенизиране. Оставете да почине, докато се втвърди.

Инкубирайте аеробно при 20-25 ° C (плесени) или 30-32 ° C (дрожди) в продължение на 5 до 7 дни или повече, в зависимост от търсения гъбички и вида на пробата. Две плочи могат да се използват за инкубиране в двата температурни диапазона.

Преброяване на гъбични колонии в хранителна проба. Картофен декстрозен агар, допълнен с антибиотици. Източник: снимка Pxhere.com / 777267

Поддържане на гъбични щамове

Картофеният декстрозен агар може да се използва за поддържане на жизнеспособни гъбични щамове в продължение на няколко години.

За това гъбата се отглежда на клинове от агарен картофен декстроза и след като гъбата се разрасне, се покрива с минерално масло. Маслото трябва да се стерилизира в автоклав за 45 минути и да има вискозитет приблизително от 300 до 330 Сайболт. Маслото трябва да е на 1 до 2 см над върха на скосяването.

QA

От всяка подготвена партида вземете 1 или 2 плаки и ги инкубирайте при 25 ° С в продължение на 48 часа или при 20 ° С в продължение на 96 часа. Добър контрол на стерилността е този, при който не се наблюдава развитие на колонии.

Известни или сертифицирани контролни щамове също могат да бъдат използвани като:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Очаква се добър растеж във всички случаи.

Препратки

1. Britannia Laboratories. Глюкозен агар картоф. 2015.Наличен на: britanialab.com
2. Неогенни лаборатории. Картофен декстрозен агар. Достъпно на: foodsafety.neogen.com
3. Инсумолаб лаборатория. Картофен декстрозен агар. Достъпно на: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
5. Casas-Rincón G. Обща микология. 1994. II издание на Централния университет на Венецуела, издания на библиотеката. Каракас Венецуела.
6. Aceituno M. Оценка на микробиологичното качество в сенки, компактен прахообразен тип на национална производствена лаборатория, съгласно референтния метод Pharmacopea Usp 2005. Теза за квалификация за титлата фармацевтичен химик. Университет на Сан Карлос от Гватемала.
7. Cuétara M. Обработка на повърхностни проби. Iberoamerican Journal of Mycology. 2007; стр. 1-12