АГАР SABOURAUD: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В агар Sabouraud, известен също като Sabouraud декстроза агар, е твърд носител, особено обогатен за изолиране и развитие на гъбички, като например дрожди, плесени и дерматофити.

Следователно тази среда не може да липсва в лаборатория за микробиология, която да изследва наличието на патогенни или опортюнистични гъби, било от клинични или неклинични проби. По същия начин той е идеален и за растежа на нишковидни бактерии като Streptomyces и Nocardias. Използването му е много широко, тъй като може да се използва в човешката, животинската, растителната и индустриалната микология.

А. Несемен агар Sabouraud. Б. агар Sabouraud, посят с мая. Източник: Снимки, направени от автора MSc. Мариелса гил

Тази среда е създадена през 1896 г. от видния дерматолог Раймонд Сабуро, който става световно известен специалист по нарушения на скалпа, причинени главно от дерматофити.

Създаването му беше толкова важно, че се използва оттогава и остава до днес, макар и с някои модификации.

Въпреки че е специално за гъбичките, бактериите могат да растат в тази среда, следователно за проби със смесена флора е необходимо включването на антибиотици в тяхното получаване, за да се инхибира растежа на бактериалната флора, която може да присъства.

Изборът на антибиотика трябва да бъде направен внимателно и като се вземе предвид видът на гъбичките, които трябва да бъдат възстановени, тъй като някои от тях се инхибират в присъствието на определени вещества.

основа

Декстрозният агар Sabouraud е среда, която в първоначалния си състав е слабо селективен, поради киселинното си рН от 5,6 ± 0,2, обаче, бактериите все още могат да се развият, главно в продължителни инкубации.

Средата съдържа казеинов пептон и панкреатичен дайджест от животинска тъкан, които осигуряват източника на въглерод и азот за растежа на микроорганизмите.

Съдържа и висока концентрация на глюкоза, която действа като енергиен източник, насърчавайки растежа на гъбичките над бактериите. Всичко това се смесва с агар-агар, компонент, който му придава правилната консистенция.

От друга страна, декстрозаният агар Sabouraud може да бъде избирателен, ако се добавят антибиотици.

С антибиотиците е особено полезно при проби от рани, открити язви или всяка проба, при която се подозира голямо бактериално замърсяване.

Най-често използваните комбинации от декстрозен агар Sabouraud с антибиотици

-Saburaud агар с хлорамфеникол: идеален за възстановяване на дрожди и нишковидни гъбички.

- агар Sabouraud с гентамицин и хлорамфеникол: почти всички нишковидни гъби и дрожди растат в тази среда и той инхибира голям брой бактерии, включително Enterobacteriaceae, Pseudomonas и Staphylococcus.

- Агар Sabouraud с циклохексимид: той е особено полезен за проби от кожата или дихателните пътища, стига подозрението да е диморфни гъбички.

Циклохексимид трябва да се използва с повишено внимание; Въпреки че се използва за инхибиране на растежа на непатогенни или екологични гъби и дрожди, които могат да присъстват като замърсители в пробата, той също така инхибира растежа на някои гъбички като Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp и други опортюнистични гъби.

- Агар Sabouraud с хлорамфеникол плюс циклохексимид: използва се главно за изолиране на дерматофити и диморфни гъби. Недостатъкът е, че инхибира някои видове опортюнистични гъбички като Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes или C. neoformans.

- Агар Sabouraud с хлорамфеникол, стрептомицин, пеницилин G и циклохексимид: той е идеален за проби, силно замърсени с бактерии и сапрофитни гъби, но има недостатъка, че инхибира растежа на Actinomyces и Nocardias, в допълнение към споменатите по-горе опортюнистични гъби.

подготовка

Ако разполагате със съставките отделно, може да се приготви по следния начин:

Декстрозен агар Sabouraud

За да се претегля:

- 40 гр декстроза

- 10 г пептон

- 15 гр. Агар-агар

- Измерете 1000 ml дестилирана вода

Всички съставки се смесват, рН се регулира на 5,6. Разтворените вещества се разтварят чрез кипене, 20 ml от средата се разпределят в епруветки с размери 25 х 150 mm, без ръб и за предпочитане с памучна капачка.

Тръби с памучна капачка. Източник: Снимка, направена от автора MSc. Мариелса гил

Могат да се използват и други размери на тръбите, в зависимост от наличността.

Автоклавират се в продължение на 10 минути при атмосфера на налягане (121 ° С). Времето за автоклавиране не трябва да се надвишава. Когато излизат от автоклава, тръбите се наклоняват с помощта на опора, докато не се втвърдят във флейта.

Друг начин е разтварянето на съставките чрез загряване, докато заври. Автоклавирайте за 10 минути в същия флакон и след това разпределете 20 ml в чаши на Петри.

Ако имате среда от агарен Sabouraud декстраза, която вече съдържа всички съставки, продължете да претегляте количеството, посочено от търговската компания за един литър вода. Останалите стъпки са същите като описаните по-горе.

Декстрозен агар Sabouroud (модификация на Емон)

За да се претегля:

- 20 гр декстроза

- 10 г пептон

- 17 гр. Агар-агар

- Измерете 1000 ml дестилирана вода

Всички съставки се смесват, рН се регулира на 6,9. Продължете по същия начин като предишния случай.

Има търговски къщи, които предлагат медиума с всички съставки. В този случай претеглете и пригответе, както е описано на вложката.

Декстрозен агар Sabouraud (модификация на Emmons) с хлорамфеникол

Хлорамфеникол Стоков разтвор

- Претеглят се 500 mg хлорамфеникол основа

- Измерете 100 ml 95% етанол

- Смесват

Средата от агаров Sabouraud декстроза (Emmons) се приготвя както е описано по-горе и допълнително към всеки литър среда се добавя 10 ml основен разтвор на хлорамфеникол преди автоклавиране.

Сабуро Емонс декстрозен агар с циклохексимид

Циклохексимид основен разтвор

- Претегля се 5 g циклохексимид

- Измерете 100 ml ацетон

- Смесват

Средата от агаров Sabouraud декстроза (Emmons) се приготвя както вече е описано и допълнително към всеки литър среда се добавят 10 ml основен разтвор на циклохексимид преди автоклавиране.

Декстрозен агар Sabouroud (Emmons) с хлорамфеникол и циклохексимид

Средата от агаров Sabouraud декстроза (Emmons) се приготвя както е описано по-горе и допълнително към всеки литър среда се добавят 10 ml основен разтвор на хлорамфеникол и 10 ml основен разтвор на циклохексимид преди автоклавиране.

Други антибиотици, които могат да се добавят

20 000 до 60 000 единици пеницилин на литър среда.

30 mg стрептомицин на литър среда.

И двете трябва да бъдат включени след като средата е автоклавирана, леко охладена (50-55 ° С).

0,04 g неомицин на литър среда.

0,04 g гентамицин на литър среда.

Специални съображения

За безопасност се предпочита да се сее декстроза агар Sabouraud в клиновидна тръба (наклонена в флейта клюн), а не в чаши на Петри, за да се избегне разпръскване и вдишване на спорите.

Важно е тръбите от агар Sabouraud да са покрити с памук, а не с винтова капачка, тъй като е показано, че полуанаеробните условия инхибират образуването на спори в някои щамове, например Coccidioides immitis. Също така повечето гъбички са аеробни.

В случай на използване на винтова капачка, не затваряйте херметически.

QA

Подготвената среда трябва да премине контрол на качеството, за да се провери нейното правилно функциониране. За това се засяват определени контролни щамове.

За декстрозен агар Sabouraud с хлорамфеникол могат да се използват щамове ATCC на Candida albicans, които трябва да имат отличен растеж. Друга плака се инокулира с щамове Escherichia coli, които трябва да бъдат напълно инхибирани.

Също така се инкубира неинокулирана плоча, в която не трябва да растат микроорганизми.

За декстрозен агар на Sabouraud с хлорамфеникол и циклохексимид могат да се използват щамове на Trichophyton mentagrophytes и те трябва да се развият добре. Друга плака се инокулира с щам на Aspergillus flavus, в който трябва да има малък или никакъв растеж. Освен това, неинокулирана плака се инкубира, за да демонстрира своята стерилност.

За декстрозен агар Sabouraud с циклохексимид се използват щамове Candida albicans, Trichophyton rubrum или Microsporum canis, които трябва да показват добър растеж.

По същия начин се включва щам на Aspergillus flavus, показващ малък или никакъв растеж. Накрая инкубирайте неинокулирана плака, за да контролирате стерилността.

Приложения

Първична култура

Класическият декстрозен агар Sabouraud съдържа 4 грама декстроза и е отличен като основна изолираща среда, тъй като показва характерната морфология на всяка гъба.

Освен това е отличен за демонстриране на производство на пигменти. Това обаче не е най-доброто средство за наблюдение на спорулацията.

Също така не се препоръчва за култивиране на Blastomyces dermatitidis, който се инхибира от наличната висока концентрация на глюкоза.

От друга страна, за отглеждането трябва да се вземат предвид някои съображения.

Някои гъбички растат най-добре при стайна температура, като плесени, други растат успешно при 37 ° C, като някои дрожди, а трети могат да растат и при двете температури (диморфни гъби).

Поради тази причина понякога е необходимо да се използват няколко плочи агар Sabouraud за една и съща проба, тъй като често се прави дублирано засяване за инкубиране на една плоча при стайна температура и друга при 37 ° C.

Например Sporothrix schenckii се засява в две плочи; единият се инкубира при стайна температура за получаване на плесенната фаза, а другият се инкубира при 37 ° С, за да се получи фазата на дрождите, но в последната е необходимо да се добави 5% кръв в средата.

В други случаи, като мицетомни проби, се засяват две плочи от агар Sabouraud, едната с хлорамфеникол, а другата с циклохексимид. Първият ще позволи растежа на микотомите причинители от гъбичен произход (Eumycetoma), а вторият причинители на мицетом от бактериален произход, като актиномицетоми.

Формирането на малки спори

Еммон модифициран Sabouraud декстрозен агар съдържа 2 грама декстроза и се използва не само за изолиране, но и за спорообразуване и консервиране на гъбички.

В тази среда щамовете на Blastomyces dermatitidis могат да бъдат възстановени.

Запазване

За да се запазят гъбните култури, те могат да се съхраняват в хладилник (2-8 ° C). Времето за запазване може да варира между 2 и 8 седмици. След това време те трябва да бъдат субкултивирани, за да повторят процеса.

Някои гъбички се поддържат най-добре при стайна температура, като Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum и Microsporum audounii.

Поддържането на щама може да се удължи, за да се избегне плеоморфизъм, ако декстрозата е напълно отстранена от агара и ако количеството агар в средата е намалено, за да се избегне сухота.

микрокултурите

За идентифициране на някои нишковидни гъбички е необходимо да се извършват микрокултури, като се използва агар Sabouraud или други специални средства, за да се наблюдават структурите на сексуално и асексуално възпроизвеждане.

В човешката микология

Използва се главно за диагностика на гъбични заболявания, особено на тези, които засягат кожата и нейните привързаности (коса и нокти).

Пробите могат да бъдат секрети, ексудати, кожа, коса, нокти, храчки, CSF или урина. Често изолирани патогени са дерматофитите, гъбичките, които причиняват подкожни и системни микози.

Микология на животните

Животните често са засегнати от гъбични инфекции, поради което агар Sabouraud е толкова полезен в микологията на животните, колкото и при хората.

Например, дерматофитите често могат да засегнат животни. Такъв е случаят с Microsporum canis var distortum, който често заразява кучета, котки, коне, прасета и маймуни. По същия начин Microsporum gypseum заразява кучета, котки и добитък.

Птици като пилета, петели и пилета са засегнати от Microsporum gallinae.

Други гъбички, като Zymonema farciminosum, също са причина за заболяване при животни, главно коне, мулета и магарета, предизвиквайки значително възпаление в лимфните съдове.

Sporothrix schenkii и Histoplasma capsulatum засягат домашните животни и хората.

Екологична микология

Много патогенни или опортюнистични гъбички могат да се концентрират във всеки даден момент в дадена среда, особено в операционни зали и отделения за интензивно лечение на клиники и болници. Затова е необходимо да се контролира.

Други уязвими пространства са библиотеки и стари сгради, които могат да бъдат засегнати от концентрацията на екологични гъбички.

В екологичните проучвания, Sabouraud декстрозен агар се използва за изолиране на гъбички.

Индустриална микология

Декстрозният агар Sabouraud не може да отсъства за изследване на замърсяващи гъбички в производството на козметика, храни, напитки, кожа, текстил и други.

Растителна микология

Растенията също страдат от заболявания, причинени от гъбички, засягащи различни части на растението, което дори може да сложи край на реколтата, причинявайки големи загуби в селското стопанство.

Препратки

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Микробиологична диагноза на микози и проучвания за противогъбична чувствителност. Препоръки на Испанското дружество по инфекциозни болести и клинична микробиология. Достъпно на адрес: coesant-seimc.org
2. ValteK Laboratory. (2009 г.). Декстрозен агар Sabouraud с циклохексимид. Достъпно на: andinamedica.com.
3. Наваро О. (2013). Ветеринарна микология. Национален аграрен университет. Никарагуа.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Аржентина. Редакция Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. Обща микология. 1994. II издание на Централния университет на Венецуела, издания на библиотеката. Каракас Венецуела.