КРЪВЕН АГАР: ОБОСНОВКА, УПОТРЕБА И ПОДГОТОВКА - БИОЛОГИЯ - 2025

На кръвен агар е твърда хранителна среда, обогатена диференциална но неселективен. Използва се за възстановяване и растеж на голямо разнообразие от микроорганизми от клинични проби или за субкултури.

Класическият кръвен агар трябва да бъде включен за засяване на повечето клинични проби, получени в лабораторията; с изключение на проби от изпражнения, когато не е полезно, освен ако не са подготвени с определени модификации.

Плоча с кръвен агар

Тази културна среда основно се състои от обогатен основен агар и 5% кръв. Агарната основа може да варира в зависимост от нуждите, но основно ще се състои от пептони, аминокиселини, витамини, месен екстракт, натриев хлорид, агар, между другото.

Що се отнася до кръвта, обикновено се изисква контакт с вивариум за получаване на кръв от животни, като овце, заек или кон. Това обаче не винаги е възможно и понякога се използва човешка кръв.

Средството за кръвен агар може да се приготви в лабораторията или да се закупи готово от специализирани компании. Приготвянето на тази среда е една от най-деликатните, всяка небрежност при приготвянето й ще доведе до замърсена партида.

Ето защо трябва да се вземат всички възможни предпазни мерки и накрая трябва да се извърши контрол на качеството чрез инкубиране при 37 ° C 1 плоча за всеки 100 подготвени.

основа

Staphylococcus aureus култивиран на кръвен агар. Nathan Reading на Flickr Nathan R. в Twitter, чрез Wikimedia Commons Вече беше споменато, че кръвният агар има характеристиката да бъде обогатена, диференцирана и неселективна среда. Основата за всеки от тези свойства е обяснена по-долу.

Кръвният агар е обогатена среда, тъй като съдържа 5-10% кръв на агарова основа като основна добавка. И двете съединения съдържат много хранителни вещества и това свойство позволява на повечето култивирани бактерии да растат в него.

Този растеж става без ограничения; поради тази причина тя е неселективна. Ако обаче към тази среда се добавят съединения, които възпрепятстват растежа на някои микроорганизми и благоприятстват този на други, той става избирателен. Такъв е случаят, ако се добавят определени видове антибиотици или противогъбични.

По същия начин, кръвният агар е диференциална среда, тъй като позволява да се разграничат 3 вида бактерии: бета-хемолитични, алфа-хемолитични и гама-хемолитични.

Бета-хемолитиците са тези, които имат способността напълно да лизират или разграждат червените кръвни клетки, образувайки ясен ореол около колониите, поради което те произвеждат ß или β-хемолиза и микроорганизмите се наричат ​​ß-хемолитични.

Примери за ß-хемолитични бактерии са Streptococcus pyogenes и Streptococcus agalactiae.

Алфа-хемолитиците са тези, които извършват частична хемолиза, при която хемоглобинът се окислява до метхемоглобин, генерира зеленикаво оцветяване около колониите. Това явление е известно като α или α -хемолиза и бактериите са класифицирани като α - хемолитични.

Примери за α-хемолитични бактерии са Streptococcus pneumoniae и Streptococcus от групата на viridans.

И накрая, има така наречените гама-хемолитични или нехемолитични бактерии. Те растат върху агара, без да генерират промени върху него, ефект известен като γ-хемолиза, а микроорганизмите са γ-хемолитични.

Пример за γ-хемолитични бактерии: някои щамове от група D Streptococcus (Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis).

Приложения

Средата за култивиране на кръвен агар е една от най-често използваните в микробиологичната лаборатория.

Сред микроорганизмите, способни да растат в средата на кръвния агар, са: строга аеробна, факултативна, микроаерофилна, анаеробна, грамположителна или грам отрицателна бактерия, бързорастящи или бавнорастящи бактерии.

Растат и някои хранителни или взискателни бактерии, както и гъбички и дрожди. По същия начин е полезно за субкултивиране или реактивиране на щамове, които са метаболитно много слаби.

Изборът на кръвна група и основен агар ще варира в зависимост от вероятния микроорганизъм, за който се подозира, че се възстановява, и от приложението, за което трябва да се използва плочата (култура или антибиограма).

Избор на кръвна група

Кръвта може да бъде агнешко, заешко, конно или човешко.

Най-препоръчителната е кръвта на агнешко, с някои изключения. Например, за изолиране на видове Haemophilus, където препоръчителната кръв е кръв от кон или зайци, тъй като в агнешката кръв има ензими, които инхибират фактор V.

Най-малко се препоръчва човек, но той е най-използваният, може би защото е най-лесният за получаване.

Кръвта трябва да бъде дефибринирана, получена без всякакъв вид добавки и от здрави животни. За употребата на човешка кръв трябва да се вземат предвид няколко фактора:

Ако кръвта идва от индивиди, които са имали бактериални инфекции, те ще имат специфични антитела. При тези условия растежът на някои бактерии вероятно ще бъде инхибиран.

Ако се получава от банката на кръвта, той съдържа цитрат и някои бактерии може да не растат в негово присъствие. От друга страна, ако кръвта идва от пациенти, които приемат антибиотици, растежът на чувствителните бактерии може да бъде инхибиран.

И ако кръвта е от човек с диабет, излишната глюкоза пречи на правилното развитие на модели на хемолиза.

Избор на основен тип агар

Базовият агар, използван за приготвянето на кръвен агар, може да бъде много широк. Сред тях са: хранителен агар, мозъчен инфузионен агар, соев агар с триптиказа, агар на Мюлер Хинтон, агар на Тайер Мартин, агар Колумбия, агар Бруцела, агар Кампилобактер и др.

Използва кръвен агар според основната среда, използвана за неговото получаване

Хранителен агар

Тази основа е най-малко използвана, тъй като в нея ще се развиват главно неизискващи бактерии, като ентерични бацили, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp. Не се препоръчва да се изолира стрептокок.

Мозъчен инфузия на сърце Agar (BHI)

Той е един от най-широко използваните като основа за кръвен агар, тъй като съдържа необходимите хранителни вещества за растежа на повечето бактерии, включително Streptococcus sp и други взискателни бактерии. Въпреки че не е подходящо да се наблюдават модели на хемолиза.

Обикновено с тази основа се използва агнешка кръв.

Могат да се приготвят също варианти на кръвен агар, където се добавят други съединения за изолиране на определени микроорганизми. Например, мозъчен инфузия на сърцето агар, допълнен с заешка кръв, цистин и глюкоза, може да се използва за изолиране на Francisella tularensis.

Докато при цистин телурит е полезно за изолирането на Corynebacterium diphteriae. Може да се използва човешка или агнешка кръв.

С първата бета-хемолиза ще се разглежда като тесен ореол, докато с втората ореолът ще бъде много по-широк.

По същия начин тази основа, заедно с бацитрацин, царевично нишесте, конска кръв и други добавки за обогатяване (IsoVitaleX), се използва за изолиране на рода Haemophilus sp от дихателни проби.

Освен това, ако се добави комбинацията от антибиотици хлорамфеникол - гентамицин или пеницилин - стрептомицин с конска кръв, той е идеален за изолиране на взискателни патогенни гъбички, дори с по-висок добив от глюкозен агар Sabouraud. Той е особено полезен при изолирането на Histoplasma capsulatum.

Триптиказен соев агар

Тази база е най-препоръчителна за по-добро наблюдение на схемата на хемолиза и за извършване на диагностични тестове като оптохин таксони и бацитрацин. Това е класическият кръвен агар, който се използва рутинно.

С тази основа можете да приготвите и специалния кръвен агар за Corynebacterium diphteriae, с цистинов телурит и агнешка кръв .

По същия начин комбинацията от този агар с агнешка кръв плюс канамицин-ванкомицин е идеална за растежа на анаероби, особено Bacteroides sp.

Мюлер Hinton агар

Тази основа, допълнена с кръв, се използва за извършване на антибиограмата на бързи микроорганизми, като Streptococcus sp.

Полезен е и за изолирането на бактерии като Legionella pneumophila.

Thayer Мартин Агар

Тази среда е идеална като основа за кръвен агар, когато се подозира родът на Neisseria, особено Neisseria meningitidis, тъй като N. gonorrhoeae не расте върху кръвен агар.

Използва се и за тестване за чувствителност към Neisseria meningitidis.

Колумбийски агар

Тази основа е отлична за засяване на проби от стомашна биопсия за Helicobacter pylori.

Средата се приготвя чрез добавяне на 7% агнешка кръв, дефибринирана с антибиотици (ванкомицин, триметоприм, амфотерицин В и цефсулодин), за да се ограничи растежът на други видове бактерии, които могат да присъстват.

Същата основа, допълнена с човешка или агнешка кръв, налидиксинова киселина и колистин е полезна за изолиране на Gardnerella vaginalis. Той също така е идеален за оценка на антимикробната чувствителност към антибиотици от същия микроорганизъм.

В допълнение, той се използва за приготвяне на кръвен агар за култивиране на анаероби, добавяйки аминогликозиди и ванкомицин.

Тази база позволява правилно наблюдение на моделите на хемолизата.

Бруцела агар

Тази среда, използвана като основа за кръвен агар заедно с добавянето на витамин К, е идеална за отглеждането на анаеробни бактерии. В този случай се препоръчва употребата на агнешка кръв.

Campylobacter агар

Campylobacter агар, допълнен с 5% овча кръв и 5 антибиотици (цефалотин, амфотерицин В, триметоприм, полимиксин В и ванкомицин), е средата, използвана за изолиране на Campylobacter jejuni в проби от изпражнения.

подготовка

Всяка търговска къща носи инструкциите за приготвяне на литър културална среда на гърба на контейнера. Съответните изчисления могат да бъдат направени за приготвяне на желаното количество, в зависимост от избрания основен агар.

Претеглят се и се разтварят

Основният агар е дехидратиран (на прах), следователно той трябва да бъде разтворен в дестилирана вода, регулирана на рН 7,3.

Количеството, посочено от избрания основен агар, се претегля и се разтваря в съответното количество вода в колба, след това се загрява на умерена топлина и се смесва с въртеливи движения, докато целият прах се разтвори.

стерилизирам

След като се разтвори, стерилизирайте в автоклав при 121 ° С за 20 минути.

Кръвен агрегат

Когато напускате автоклава, колбата се оставя да се охлади, докато температурата се движи между 40 и 50 ° C; Това е температура, която човешката кожа поддържа и в същото време агарът още не се е втвърдил.

За целта колбата се пипа с ръка и ако топлината е поносима, е идеалната температура да се добави съответното количество дефибринирана кръв (50 ml за всеки литър агар). Разбъркайте внимателно до хомогенизиране.

Преминаването на кръвосъсирването е от решаващо значение, тъй като ако се направи, когато средата е много гореща, червените кръвни клетки ще се разпаднат и средата няма да се използва за наблюдение на хемолиза.

Ако се добави твърде студено, той ще се сгуши и повърхността на средата няма да е гладка, за да позволи правилното оценяване.

Изсипете в чинии на Петри

Сервирайте в стерилни чаши Петри веднага след хомогенизиране на кръвта. Приблизително 20 ml се наливат във всяка чаша на Петри. Тази процедура се извършва в качулка за ламинарен поток или в близост до горелката.

При сервиране на кръвния агар в чашките на Петри не трябва да остават въздушни мехурчета по повърхността на чинията. Ако това се случи, пламъкът на горелката Bunsen се предава бързо над плочата, за да ги елиминира.

Плаките се оставят да се втвърдят и съхраняват в хладилник (2-8 ° C), обърнат до употреба. Преди да използвате плочите с кръвен агар, те трябва да бъдат закалени (оставени да достигнат стайна температура), за да могат да бъдат засети.

Приготвените чинии траят приблизително 1 седмица.

Препратки

1. Bayona M. Микробиологични условия за културата на Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Практическа клинична микробиология. Университет в Кадис, 2-ро издание. Служба за публикации на UCA.
3. "Кръвен агар." Уикипедия, Свободната енциклопедия. 10 декември 2018 г., 14:55 UTC. 27 Дек 2018, 01:49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Аржентина. Редакция Panamericana SA
5. CEDIVET Лабораторен ветеринарно-диагностичен център. Гватемала. Достъпно на: trensa.com.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. (5-то изд.). Аржентина, редакция Panamericana SA