СОЕВ АГАР НА ТРИПТИКАСЕИН: ОБОСНОВКА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В соев агар триптон или Trypticase Soy Agar е твърда хранителна среда, и хранителна неселективен. Той е обозначен с буквите TSA заради съкращението си на английски Trypticase Soy Agar. Състои се от триптеин, соев пептон, натриев хлорид и агар-агар.

Поради високата си хранителна сила, той е идеален за отглеждане на умерено взискателни и неизискващи микроорганизми. Средството без допълнителни добавки не се препоръчва за първични култури, но е много полезно за субкултивиране на чисти щамове и поддържане на жизнеспособността им, наред с други приложения.

Триптикасеин соев агар клинове в епруветки с бакелитови капачки. Източник: Снимка, направена от автора MSc. Мариелса Гил.

Също така, този агар служи като основа за получаване на обогатена среда като кръвен агар, особено когато се изисква да се спазват моделите на хемолизата и да се монтират таксоните на оптохин и бацитрацин, необходими при диагностицирането на Streptococcus pneumoniae и Streptococcus pyogenes съответно.

От друга страна, когато се комбинира с антибиотици, е полезно да се изолират клинично важни факултативни и строги анаеробни микроорганизми от проби със смесена флора.

И накрая, съставът на соев агар от триптикасеин и неговото изпълнение отговарят на изискванията, установени от различните фармакопеи (европейска, японска и северноамериканска).

основа

За правилното развитие на бактериите е необходимо наличието на енергийни запаси, като аминокиселини, витамини, пурикови и пиримидни основи.

В този смисъл триптеинът и соевият пептон осигуряват тези хранителни вещества на микроорганизмите, като по този начин позволяват тяхното пълно развитие. За бързи бактерии обаче е необходимо този агар да се допълни с дефибринирана кръв или затоплена кръв, за да се увеличи обогатяването му.

От друга страна, ако антибиотици се добавят към средата, тя се превръща в селективна среда. 0,6% екстракт от дрожди също може да се добави за благоприятно изолиране на видовете от рода Listeria, докато добавянето на цистин телурит и агнешка кръв е идеално за Corynebacterium diphteriae.

Накрая, натриевият хлорид осигурява осмотичния баланс на средата, а агарът осигурява твърдата консистенция.

подготовка

Плочи от соптичен агар с триптикасеин

За да се приготви триптикасеин соев агар, 40 g от дехидратираната търговска среда трябва да се претегля в цифров мащаб. Разтваря се в един литър дестилирана вода, съдържаща се в колба.

Сместа се оставя да почине 5 минути и след това се отвежда до източник на топлина, за да помогне за разтварянето на средата. Трябва да се разбърква често и да се вари 1 - 2 минути. Впоследствие средата се стерилизира в автоклава при 121 ° С за 15 минути.

Оставете да изстине до 50 ° C и разпределете в стерилни петри. Оставете да се втвърди, обърнете, наредете в плаки и съхранявайте в хладилника.

Крайното рН на средата трябва да бъде 7,3 ± 0,2.

Трябва да се отбележи, че цветът на обезводнената културална среда е светло бежов и трябва да се съхранява между 10 и 35 ° C, на сухо място.

От своя страна, подготвеният агар е светло кехлибарен на цвят. Подготвените чинии трябва да се съхраняват в хладилник (2-8 ° C) до употреба.

Плаките трябва да достигнат стайна температура преди употреба.

Триптикасеин плочи от соев агар, допълнени с кръв

Кръвният агар се приготвя чрез добавяне на 5% дефибринирана кръв по време на охлаждане на соевия агар от триптикасеин до 50 ° С. Сместа се хомогенизира чрез въртене с нежни движения.

Сервирайте в стерилни петри. Средният цвят трябва да бъде вишнево червен.

Триптикасеин плочи от соев агар, допълнени с затоплена кръв

За да приготвите кръвен агар на базата на TSA, процедирайте по същия начин като описаните вече процедури, но когато оставите автоклава, той се оставя да почива, докато температурата на средата е приблизително между 56 до 70 ° C. По това време кръвта се поставя и се смесва, докато средата стане кафява.

Сервирайте в стерилни петри. Цветът на средата е шоколадово кафяв.

Трипликасеин соеви агар клинове

Процедурата за приготвяне на агар е същата като тази, описана за чиниите, с разликата, че вместо да сервира средата върху чинии на Петри, тя се разпределя между 10 до 12 ml в епруветки с бакелитови капаци преди стерилизация.

Впоследствие епруветките се автоклавират при 121 ° С за 15 минути. Когато тръгнат, те са наклонени с помощта на опора и се оставят да се втвърдят.

Приготвените клинове се засяват по повърхност и служат за поддържане на определени неизискващи микроорганизми за жизнеспособни за определено време.

Приложения

Триптикасеин соев агар се използва в следните случаи:

- Като основа за приготвяне на класическия кръвен агар, който се използва рутинно в повечето лаборатории.

-Изолирането на взискателни бактерии.

-Наблюдение на схемата на хемолиза.

-Извършване на диагностични тестове.

- Като основа за приготвяне на специален кръвен агар за Corynebacterium diphteriae, с цистинов телурит и агнешка кръв.

- Като основа за приготвяне на агнешки кръвен агар, плюс канамицин-ванкомицин за растеж на анаероби, особено Bacteroides sp.

- За поддържане на неизискващите щамове (Bacterioteca).

- Брой аеробни микроби при изследване на микробната граница на проби от вода, околна среда, храни и козметика.

засети

Пробите могат да бъдат засети директно върху повърхността на триптикасеин соев агар, допълнен с кръв или други добавки. Засява се от изтощение.

Докато триптикасеиновите плочи от соев агар без добавки обикновено се използват за субкултурация на микробни щамове (бактерии или дрожди).

QA

Контрол на стерилитета

За да се провери стерилността на различните среди, приготвени с триптикасеин соев основен агар, се препоръчва следното: от всяка подготвена партида 1 или 2 неинокулирани плаки или епруветки трябва да се инкубират при 37 ° С в продължение на 24 часа, за да се демонстрира тяхната стерилност. Във всички случаи трябва да остане без растеж.

Ако се установи замърсяване, цялата партида трябва да се изхвърли.

Контрол на растежа

Следните бактериални щамове могат да бъдат използвани за изследване на правилното функциониране на соев агар от триптикасеин: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 и Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Щамовете се посяват и инкубират аеробно при 37 ° С в продължение на 24 часа.

Във всички случаи растежът трябва да е задоволителен.

Могат да се използват и гъби като Candida albicans Complex ATCC 10231 и Aspergillus niger ATCC 16404. Добър растеж се очаква и за двата щама.

Модел за контрол на растежа и хемолиза на соев агар от триптикасеин, допълнен с кръв

За да се провери правилното функциониране на кръвния агар, приготвен с тази основа, могат да се използват следните щамове: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 и Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Засяват се и се инкубират при 37 ° С в микроаерофилност за 24 часа.

Във всички случаи растежът трябва да е задоволителен, като се вземе предвид, че бета-хемолиза (лек ореол около колонията) трябва да се наблюдава при S. pyogenes, а алфа хемолизата (зеленикав ореол около колонията) трябва да се наблюдава и в двата щама на S. pneumoniae. колонии).

Препратки

1. Сътрудници на Уикипедия Триптиказа Аз съм агар. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 17 декември 2018 г., 15:47 UTC. Достъпно на:
2. Britannia Laboratories. Триестинов соев агар. 2015.Наличен на: britanialab.com
3. Неогенни лаборатории. Триптичен соев агар. Достъпно на: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Аржентина. Редакция Panamericana SA
5. BD Laboratories. Триптиказа Аз съм Агар. 2014.На разположение на:.bd.com