На агара TCBS е средство за високо селективен и диференциална твърдо вещество култура, използвани за изолиране и култивиране на бактерии от рода Vibrio, особено Vibrio холерният, V. parahaemolyticus и V. вулнификус като основни патогени от този вид.
TCBS за съкращение означава Thiosulfate Citrate Bile Sucrose. Този агар е известен също като селективна среда за Vibrios. Оригиналната формула е създадена от Наканиши и по-късно модифицирана от Кобаяши.
Търговска среда TCBS и плоча TCBS агар, засята с холери от Vibrio. Източник: снимка 1: взета от автора MSc. Marielsa Gil / Снимка 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, Индия
Състои се от екстракт от дрожди, месен пептон, триптеин, натриев цитрат, натриев тиосулфат, волна жлъчка, захароза, натриев хлорид, железен цитрат, бромотимол син, тимол син и агар.
Този състав позволява адекватно развитие на видовете Vibrio от проби от вода, храна и фекалии; с изключение на Vibrio hollisae, който не расте на тази среда. Освен това, TCBS средата е способна да инхибира растежа на други съпътстващи бактерии, особено колиформи.
Поради сериозните стомашно-чревни и извън чревни проблеми, произвеждани от някои видове от рода Vibrio, диагнозата му е много важна. Хората се заразяват главно чрез консумация на сурови или подготвени храни от морето или замърсени води, но също и чрез инфекция с рани.
Поради това клиничните лаборатории трябва да включват TCBS агар в изследването на културата на изпражненията на проби от течни изпражнения, особено с появата на оризова вода. Особено, ако пациентът съобщава, че е бил в контакт с морска вода или е консумирал миди или риба.
основа
Екстрактът от дрожди, месните пептони и триптеинът са хранителният източник на тази среда. Въпреки това, TCBS агар е негостоприемна среда за повечето бактерии.
Високата му селективност се дава чрез добавяне на натриев цитрат и вол жлъчка; и двете са инхибиторни агенти, които също осигуряват алкално рН на средата, ограничавайки растежа на придружаващата флора и благоприятствайки растежа на V. cholerae, сред другите видове. Трябва да се отбележи, че Vibrio холерите са много чувствителни към киселинност.
От своя страна, натриевият хлорид осмотично балансира средата. Освен това, тъй като концентрацията му е висока, тя действа и като инхибиращо средство, благоприятствайки растежа на халофилни бактерии.
Захарозата е ферментируемата захар, която заедно с бромотимоловите сини и тимоловите сини pH показатели придават на средата диференциалния си характер. Поради тази причина с тази среда е възможно да се разграничат захарозни ферментиращи щамове от неферментиращи.
Колониите от ферментиращи щамове на захароза развиват жълт цвят и ще превърнат средата от зелена в жълта поради производството на киселина. Неферментиращите стават полупрозрачни и средата остава оригиналния цвят (зелен).
По същия начин тази среда съдържа натриев тиосулфат като източник на сяра и железен цитрат като развиващо средство. И двете показват бактерии, способни да произвеждат сероводород (безцветен газ). H 2 S е образуван от тиосулфат и след това при взаимодействие с железен цитрат видима черни образува утайка.
И накрая, агарът е това, което осигурява твърдата консистенция на средата.
подготовка
Претеглят се 89 g от дехидратираната среда и се разтварят в един литър дестилирана вода. Помогнете на разтварянето чрез загряване и често разбъркване. Сместа може да се вари до 2 минути.
Този носител не е автоклавиран. След разтваряне се сервира директно върху стерилни чинии. Когато се втвърдят, те се подреждат по обърнат начин върху тромбоцитите и се съхраняват в хладилник (2-8 ° C) до употреба.
Средата след приготвяне трябва да остане при рН 8,6 ± 0,2.
Цветът на дехидратираната среда е светло бежов или зеленикаво-бежов, а цветът на средата е горско зелен или синкавозелен.
Важно е да оставите плочите да се затоплят преди да се засяват пробите.
употреба
Най-често срещаният образец за изолация на Vibrios е диариална изпражнения.
Пробите на изпражненията, ако те не могат да бъдат незабавно посяти върху селективната среда, трябва да се транспортират върху носителя на Cary Blair.
За да се повиши чувствителността на културата, изпражненията могат да се пропускат през пептонова вода при рН 8.4 като среда за обогатяване за максимум 8 часа, от там тя се субкултивира до средата на TCBS.
Трябва също да се има предвид, че някои щамове на Vibrios могат да причинят септицемия при имуносупресирани пациенти, следователно те могат да бъдат изолирани от кръвни култури. По същия начин пробите от вода и храна от морето могат да бъдат анализирани, когато има епидемични огнища на холерна болест.
засети
Инокулумът на изследваната проба трябва да е изпъкнал, сеитбата да се извърши по метода на отстраняване чрез изтощение. Плаките се инкубират при 37 ° С в продължение на 24 часа при аеробиоза.
Предполагаемите колонии на Vibrio cholerae са със средни размери, гладки, непрозрачни, с тънки граници и жълт цвят, поради ферментацията на захарозата.
Видовете V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii и някои V. vulnificus растат по подобен начин. Други клинично важни видове Vibrios като V. parahaemolyticus не ферментират захароза, развивайки се като маслинено зелени колонии.
TCBS агарова плоча, засята с Vibrio parahaemolyticus. Източник: isis325 Flickr
От друга страна, трябва да се има предвид, че някои щамове Aeromonas и Plesiomonas, които са оксидаза (+), могат да растат в тази среда, развивайки жълти колонии, които могат да объркат клинициста. Докато някои щамове на Pseudomonas също оксидаза (+) растат като зелени колонии като V. parahaemolyticus.
ограничаване
Положителният за рода Vibrio оксидаза никога не трябва да се провежда от колонии, получени от TCBS агар, тъй като полученият резултат ще бъде фалшиво отрицателен. Съединенията в средата силно пречат на този тест. Следователно, тя трябва да бъде направена от субкултури на кръвен агар.
QA
За да се докаже, че средата е в добро състояние, препоръчително е да посеете известни или сертифицирани контролни щамове и да наблюдавате дали растежът отговаря на очакваните характеристики.
За това можете да използвате щамове от:
-Vibrio cholerae - задоволителен растеж (жълти колонии, полупрозрачна граница).
-Vibrio parahaemolyticus - - задоволителен растеж (колония със зелен център и полупрозрачна граница).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - задоволителен растеж (жълти колонии с ореоли от същия цвят около колонията).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - пълно или частично инхибиране (малки жълти или полупрозрачни колонии).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- - частично или пълно инхибиране (сини колонии).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Напълно инхибиран.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– пълно или частично инхибиране. (Малки колонии зелено център полупрозрачна граница).
Инкубацията на неинокулирана среда трябва да бъде непроменена.
Препратки
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS агар. 2009.Достъпна на: f-soria.es
- BD лаборатория. BD. TCBS Agar 2003. Достъпно на адрес: bd.com
- Britannia Laboratories. TCBS Среден. 2015.Наличен на: britanialab.com
- Акумедия Лаборатории. TCBS агар. 2016.Наличен на адрес: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.