THAYER MARTIN AGAR: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В агар Тейър Martin е силно питателна и твърд селективна среда за изолиране на Neisseria meningitidis и Neisseria гонорея; и двата известни като патогенни или клинично важни Neisserias.

Една от най-важните специални характеристики на Thayer Martin Agar е високото му съдържание на хранителни добавки. Това свойство е от съществено значение, тъй като Neisserias са много взискателни микроорганизми от хранителна гледна точка и поради това не растат в обикновена среда.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin бизнес среда. Изходно изображение 1: Създадено от автора MSc. Marielsa Gil, изображение 2. Pixinio.com бактериализирани, модифицирани, Thayer, Martin, агар.

От друга страна, тъй като тези микроорганизми обикновено се намират в нестерилни зони, добавянето на инхибитори е необходимо, за да се предотврати растежа на съпътстващата флора, без това да влияе върху развитието на рода Neisseria.

Този агар се състои от основен агар на GC, хемоглобин, допълнителни хранителни добавки и комплекс от инхибиторни вещества (антибиотици и противогъбични). Търговските къщи продават всяка добавка отделно.

Пробата, която ще бъде засета в тази среда, ще зависи от микроорганизма, който се търси. За Neisseria gonorrhoeae идеалните екземпляри са вагинален и уретрален секрет. Докато за Neisseria meningitidis най-използваните проби са CSF, фарингеален и назофарингеален ексудат.

основа

Нейсериите са микроорганизми, класифицирани като досадни и следователно тяхното изолиране е трудно. Следователно Thayer Martín е сложен носител и всеки от неговите компоненти изпълнява функция, която е обяснена по-долу:

GC основен агар

GC агар съдържа протеозен пептон, царевично нишесте, натриев хлорид, дикалиев фосфат, монокалиев фосфат и агар-агар. Компонентите му осигуряват основните хранителни вещества за развитието на микробите, неутрализират токсичните мастни киселини, спомагат за поддържане на осмотичния баланс, определят pH и осигуряват твърда консистенция на средата.

хемоглобин

Хемоглобинът осигурява фактори V и X (никотинамид аденинов динуклеотид NAD и хемин съответно). По тази причина видовете Haemophilus също растат в тази среда. Хемоглобинът може да се получи търговски в дехидратирана форма или към средата може да се добави прясна дефибринирана говежди кръв.

Добавка за обогатяване

От друга страна, добавката за обогатяване трябва да се добави и към средата на Thayer-Martin, тъй като хранителните вещества, съдържащи се в базовия агар, не са достатъчни за изискванията на рода Neisseria.

Най-често използваната добавка за обогатяване се нарича isovitalex. Съдържа глутамин, аденин, НАД, кокарбоксилаза, гуанин, железен нитрат, р-амино бензоена киселина, витамин В12, тиамин и глюкоза. Всички тези съединения са необходими за правилното развитие на патогенните Neisserias.

Инхибиторите

Тъй като е силно хранителна среда, трябва да се използват инхибитори, които предотвратяват растежа на микроорганизми от обичайната флора на района и по този начин благоприятстват изолацията на рода Neisseria.

Инхибиторният комплекс се състои от ванкомицин, колистин и нистатин. Ванкомицинът инхибира растежа на грам-положителни бактерии, колистинът предотвратява растежа на Грам-отрицателни бактерии като Pseudomonas и някои сапрофитни Neisserias, а нистатинът действа върху дрожди като Candida albicans.

По-късно обаче Тайер Мартин Агар е модифициран; промените се състоят от добавяне на триметоприм, увеличаване на количеството агар и добавяне на допълнителна глюкоза. Тези промени значително подобриха възстановяването на видовете Neisseria gonorrhoeae.

Трябва да се отбележи, че триметоприм инхибира растежа на рода Proteus и последващото му образуване на рояци. В този смисъл именно антибиотиците осигуряват селективния характер на средата на Thayer Martin.

подготовка

Оригинален агар на Thayer Martin

-GC агар

Претеглят се 8,2 g дехидратирана GC среда и се суспендират в 100 ml. Смесете и варете 1 минута при често разбъркване, за да се разтвори напълно. Стерилизирайте сместа в автоклав при 121 ° С за 15 минути.

- 2% хемоглобин

Суспендирайте 2 g дехидратиран хемоглобин в 2 или 3 ml гореща дестилирана вода, докато се образува равномерна смес. Добавете малко по малко вода, за да завършите обем от 100 мл. Суспензията трябва да бъде хомогенна преди стерилизация.

Стерилизирайте в автоклав за 15 минути.

-Добавка за обогатяване

Разтворете търговския флакон с разредителя, предоставен от същото търговско дружество. Смесете добре. Количеството разтворител, което ще използвате, ще бъде посочено в инструкциите за комплекта.

-VCN инхибиторна добавка (ванкомицин, колистин, нистатин)

Разтворете флакона с разредителя, предоставен от търговското дружество. Смесете добре. Количеството разтворител, което ще използвате, ще бъде посочено в инструкциите за комплекта.

-Продукти

За всеки 100 ml GC агар действайте както следва:

Когато GC агар излезе от автоклава, оставете го да се охлади до температура приблизително 50 ° C и добавете 2 ml от приготвения разтвор на хемоглобин, 2 ml добавка за обогатяване (изобиталекс или бриталекс) и 2 ml от добавката за инхибиране. Смесете и сервирайте в стерилни петри.

Оставете да се втвърди и приберете в хладилника до употреба.

Цветът на приготвената среда е вишнево червен. Крайното pH на средата е 7,2 ± 0,2

Модифициран агар на Thayer Martin

Претеглят се 8,2 g дехидратирана GC среда и се суспендират в 100 ml. Добавете 1 g агар-агар и добавете 0,3 g глюкоза. Смесете и варете 1 минута при често разбъркване, за да се разтвори напълно. Стерилизирайте сместа в автоклав при 121 ° С за 15 минути.

Пригответе добавката за хемоглобин и обогатяване, както е описано по-горе.

Използваната супресивна добавка е VCNT (ванкомицин, колистин, нистатин, триметоприм).

-Продукти

Продължете както е описано за оригиналния агар на Thayer Martin.

употреба

Thayer Martin Agar трябва да се остави да се затопли, преди да бъдат нанесени пробите. Най-често използваните проби са фарингеални тампони, назални тампони, вагинално, уретрално и / или ректално отделяне и CSF.

Използвайте пресни проби и направете силни инокули върху агара. Пробите се засяват директно чрез изпускане на материал и след това изтощението се нанася върху повърхността.

Плаките се инкубират при 35-37 ° С за 24 до 48 часа в микроаерофилен буркан (5% CO ₂). В края на инкубационното време плаките се изследват за малки, сиви и понякога мукоидни колонии.

Извършете грам и потвърдителни биохимични тестове върху съмнителни колонии.

QA

Следните микробни щамове могат да бъдат използвани за контрол на качеството на Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 и Neisseria meningitidis ATCC 13090; очаква се задоволително развитие и в двата щама.

Следните щамове също трябва да бъдат включени: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 и Candida albicans ATCC 10231. Във всички тях се очаква пълно или частично инхибиране в тази среда.

Ограничения

-Ние трябва да имаме предвид, че бактериите, които са устойчиви на използваните инхибитори, могат да растат в средата.

-Има щамове от Neisseria gonorrhoeae, които могат да бъдат чувствителни към използваната концентрация на ванкомицин. Поради тази причина се препоръчва използването на шоколадов агар, допълнен с изовиталекс, но без инхибитори.

-Има щамове на дрожди, устойчиви на нистатин, които могат да растат в тази среда и да пречат на изолацията на патогенни Neisserias, особено гонококи.

Препратки

1. Диагностични лаборатории Valtek. Thayer-Мартин Агар 2016. Достъпно на: com
2. Britannia Laboratories. Thayer Martin Medium модифициран. 2010.Достъпна на: britanialab.com
3. Сътрудници на Уикипедия Тайър-Мартин агар. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 26 октомври 2017 г., 16:33 UTC. Достъпно на: wikipedia.org 4. Достъпно на 28 февруари 2019 г.
4. Britannia Laboratories. GC агар. 2010.Достъпна на: britanialab.com.
5. Лаборатории BBL ™ средно обогатяване за модните микроорганизми. 1999. Предлага се в: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.