ЦИ АГАР: ОБОСНОВКА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В TSI агар или тройна захар железен агар е твърд носител, който служи като един биохимичен тест за насочване на първоначалната идентификация на Грам отрицателни бактерии. Той се основава на показване на ферментацията на наличните захари и производството на сероводород и газ.

Съставът и основата му са много подобни на теста за желязо на Kligler, с разликата, че последният съдържа само глюкоза и лактоза. Вместо това, както подсказва името му, тройният захарен агар съдържа три ферментируеми въглехидрати: глюкоза, лактоза и захароза.

Изображения на TSI теста с различни микроорганизми A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa. Източник: Witmadrid, от Wikimedia Commons

В допълнение, TSI средата има четири протеинови производни, които я правят много хранителен агар: екстракт от дрожди, месен екстракт, пептон и протеозен пептон. Съдържа също железен амониев сулфат, натриев тиосулфат, натриев хлорид, фенол червен и агар.

Неспособността на микроорганизъм да ферментира глюкозата, присъстваща в средата, веднага го изключва от принадлежността към семейството на Enterobacteriaceae. Следователно този тест е от съществено значение при вземането на решение за идентифициране на пътя за определяне на род и вид.

Всяка лаборатория решава дали да работи с TSI агар или с железен агар Kligler.

основа

Всяко от съединенията изпълнява функция в средата.

Натриев хлорид и агар

Натриевият хлорид е необходим за поддържане на осмотичния баланс на средата. Докато агарът придава твърдата консистенция.

PH индикатор (фенол червен)

РН на подготвената среда се балансира при 7,3 и рН индикаторът (фенол червено) пожълтява под 6,8. Това означава, че малки количества киселини, получени при ферментацията на захарите, ще превърнат средата от червено-оранжева в жълта.

Ако не се извърши ферментация, ще се алкализира средата чрез използване на пептони, превръщайки се от червено-оранжево в силно червено.

Протеинови производни (екстракт от дрожди, месен екстракт, пептон и протеозен пептон)

Когато бактериите метаболизират протеините, присъстващи в TSI агар, се получават амини, които алкализират средата (главно на нивото на скосяване), тъй като реакцията изисква кислород. Амините превръщат рамката в яркочервено.

Но това ще зависи от способността на бактериите да ферментират въглехидрати или не.

Ферментация на въглехидрати (глюкоза, лактоза и захароза)

Изследването на ферментацията на захарите може да даде няколко изображения и всяка от тях се интерпретира по различен начин. Тестовата интерпретация разделя микроорганизмите на 3 категории: глюкозни неферменти, лактозни неферментери и лактоза / захароза.

Трябва да се отбележи, че количеството глюкоза в средата е ограничено, докато концентрацията на лактоза и захароза е 10 пъти по-висока.

Бактериите от семейство Enterobacteriaceae и други глюкозо-ферментиращи микроорганизми ще започнат да ферментират тази захар, тъй като тя е най-простият въглехидрат за енергия.

От друга страна, лактозата и захарозата са сложни въглехидрати, които трябва да бъдат разградени и превърнати в глюкоза, за да влязат в цикъла на Embden-Meyerhof.

-Микроорганизми, които не ферментират глюкоза

Когато инокулираният микроорганизъм не е в състояние да ферментира глюкоза, много по-малко ще може да ферментира други въглехидрати. Следователно тук не се образуват киселини, но има образуване на амини в скосяването чрез използването на пептони.

В този случай рамката се превръща в по-силно червено и дъното на тръбата може да остане непроменено или може също да се алкализира, оставяйки цялата тръба червена.

Тълкуване: K / K означава алкално скосяване / алкално или неутрално дъно

В изображението в началото на статията вижте изображението на тръба D.

Този резултат показва, че микроорганизмът не принадлежи към семейството на Enterobacteriaceae.

-Микроорганизми, които не ферментират лактоза / захароза

Ако бактериите са в състояние да ферментират глюкоза, но не лактоза или захароза, ще се случи следното:

Бактериите ще консумират цялата налична глюкоза след приблизително 6 до 8 часа, като могат да подкисляват както скосяването, така и блока; тоест, агарът ще е напълно пожълтял. Но когато глюкозата се изчерпи и лактозата и захарозата не могат да се използват, бактериите ще започнат метаболизма на протеините.

Тази реакция се нуждае от кислород, следователно разграждането на пептоните се случва на повърхността (скосяване). Получените амини алкализират панела, превръщайки се от жълто в червено. Тази реакция е доказана след 18 до 24 часа инкубация.

Тълкуване: K / A означава алкална скосяване и киселинна вата.

В изображението в началото на статията вижте изображението на тръба Б.

- микроорганизми, ферментиращи лактоза / захароза

Микроорганизмите, способни да ферментират лактоза и захароза, очевидно могат да ферментират глюкоза. След изчерпване на минималното количество глюкоза, налична в средата, образуваният пируват започва да се метаболизира, образувайки киселини през аеробния Кребсов цикъл, и в периода от 8 до 12 часа цялата среда ще пожълтява.

Ако бактерията е в състояние да разгради лактозата или захарозата, киселините ще продължат да се произвеждат и след 18 до 24 часа цялата епруветка - скосяване и запушалка - ще продължи да пожълтява.

Трябва да се отбележи, че използването на глюкоза се осъществява по два начина: единият аеробно на скосяването на тръбата, а другият анаеробно на дъното на епруветката.

Тълкуване: A / A означава кисело скосяване / кисело дъно. Може или не може да има газ.

В изображението в началото на статията вижте изображението на тръба А.

Добив на газ

Някои микроорганизми са способни да произвеждат газ по време на ферментацията на захарите. Газът се забелязва в тръбата от налягането, което упражнява в агара. Налягането предизвиква образуване на мехурчета или изместване на агара. Понякога образуването на газ може да разруши средата.

Важно е, че в момента на засяване на TSI средата, пункцията се извършва чисто през центъра на агара, докато достигне дъното. Ако пункцията бъде отклонена към стените на тръбата, това може да доведе до фалшиви положителни резултати при производството на газа, тъй като тя ще избяга през неправилно образувания канал.

Производството на газ, както и реакциите, които се случват при скосяване на агар, се нуждаят от кислород, затова се препоръчва тръбата да бъде покрита с памучна тапа и ако се използва бакелитов капак, той не трябва да бъде напълно стегнат.

Производството на газ се отчита като положително (+) или отрицателно (-).

Модели на газообразуване. Източник: Схема, изработена от MSc. Мариелса Гил. Източник на изображения: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe, чрез Wikimedia Commons

Натриев тиосулфат и железен амониев сулфат

Бактериите, способни да произвеждат сероводород (безцветен газ), поемат сярата от натриев тиосулфат, присъстващ в средата. След Н ₂ се образува S, реагира с железен амониев сулфат, производство на железен сулфид (вижда ясно черна утайка).

Производството на H ₂ S се отчита като положително (+) или отрицателно (-).

В изображението в началото на статията вижте изображението на тръба С.

подготовка

Претеглят се 62,5 g от обезводнената тройна захарна агара (TSI) и се разтварят в един литър дестилирана вода.

Загрейте до пълното разтваряне на агара. Варете за минута, като бъркате често. Разпределете 4 ml от средата в 13/100 епруветки с памучни капачки.

Стерилизирайте в автоклав при 121 ° С за 15 минути. Извадете от автоклава и оставете да почива под ъгъл. Трябва да се внимава и основата, и подложката да имат еднакво разстояние.

Да се ​​съхранява в хладилник 2-8 ° C. Оставете го да загрее преди сеитбата на бактериалния щам.

Цветът на дехидратираната среда е светло бежов, а подготвената среда е червено-оранжева.

Крайното рН на подготвената среда е 7,3 ± 0,2.

Приложения

TSI тестът се използва широко на ниво лаборатория по микробиология. Този тест е от съществено значение за ръководството на типа тест, който трябва да се приложи, за да се идентифицират рода и вида. Неговото добро изпълнение и интерпретация може да спести материал и труд.

Ако резултатът е TSI K / K и тестът за цитохром оксидаза е положителен, известно е, че тестовете трябва да се използват за идентифициране на неферментиращи грамо отрицателни пръчки, като Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, сред другите родове. Ако е оксидаза отрицателна, се ориентира към родовете Acinetobacter, Stenotrophomonas и др.

От друга страна, ако се получи TSI A / A или K / A и тестът за цитохром оксидаза е отрицателен, колкото повече нитрати се свеждат до нитрити, ще сме сигурни, че става въпрос за микроорганизъм, принадлежащ към семейство Enterobacteriaceae. В този случай пътят за идентификация ще се фокусира върху специфични тестове за тази група бактерии.

От друга страна, ако се получи K / A или A / A изображение и тестът за цитохром оксидаза е положителен, допълнителните тестове, които трябва да бъдат събрани, ще бъдат насочени към идентифициране на ферментиращи щамове, които не принадлежат към семейството на Enterobacteriaceae, като: Aeromonas, Плесиомонас, Вибрио и Пастерела.

ТСОС със сероводород, отрицателна за оксидаза ще ръководи идентифицирането на следните родове от семейство Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella или Salmonella.

А TSI с малко или умерено сероводород в алкална скосяването с алкална основа и положително оксидаза ще насочва използването на тестове за определяне на не-ферментиращи Н ₂ S- производство на грам-отрицателни пръти, като Shewanella putrefaciens.

И накрая, ТСОС може да се използва за изследване на производството на сероводород в грам положителни бацили, особено при подозрение за Erysipelothrix rhusiopathiae.

засети

TSI средата трябва да се инокулира с чисти колонии, изолирани в първични или селективни култури. Ако колонията е взета от селективни среди, които са засети с проби със смесена флора, трябва да се внимава да се вземе само от повърхността, тъй като жизнеспособни щамове, инхибирани в тази среда, могат да съществуват в долната част на колонията.

Следователно контурът никога не трябва да се охлажда върху селективна среда и след това колонията се поема и инокулира с TSI среда.

Сеитбата ще се извърши с прав контур или игла. Ще бъде направена пункция, като се внимава тя да е през центъра на средата, докато достигне дъното, а след това сеитбата завършва чрез инокулиране на повърхността в зигзагообразна форма. Не правете две пункции.

Инкубирайте при 37 ° C в аеробиоза за 18-24 часа. Тълкувайте по това време, нито преди, нито след.

Ограничения

TSI тестът трябва да се прочете в рамките на 18 до 24 часа след инкубацията. Четенето преди това време може да даде фалшив положителен резултат за A / A ферментация. Като има предвид, че четенето след това време може да породи невярно отрицателно изображение на неферментатор, поради консумацията на пептони, които алкализират средата.

Препратки

1. Mac Faddin J. (2003). Биохимични тестове за идентифициране на бактерии с клинично значение. 3-то изд. Редакция Panamericana. Буенос Айрес. Аржентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
4. "Агар TSI." Уикипедия, Свободната енциклопедия. 10 юли 2018, 08:09 UTC. 10 февруари 2019 г., 03:33 Достъпно на: es.wikipedia.org
5. Britannia Laboratories. TSI агар (троен захарен агар). 2015.Наличен на: britanialab.com
6. BD Laboratories. Троен захарен агар (TSI Agar). 2003.Достъпна на: bd.com