ЯРКО ЗЕЛЕН АГАР: ОБОСНОВКА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В блестящ зелен агар е твърда хранителна среда с висока степен на селективност. Използва се изключително за изолиране на щамове от рода Salmonella, но има някои изключения, като тифите и паратифите, които не растат на тази среда.

Търсенето на род Salmonella е често в проби от изпражнения, вода или храна. В този смисъл този носител може да бъде много полезен. Този агар е създаден през 1925 г. от Кристенсен, Лестър и Юргенс, по-късно е модифициран от Кауфман.

Ярко зелен агар. Ферментиращи и неферментиращи колонии съответно. Източник: изложба MJ Richardson / Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Лиценз Creative Commons.

Съставен е от плурипептони от пептичен дайджест на животинска тъкан и панкреатичен дайджест от казеин, съдържа също екстракт от дрожди, натриев хлорид, лактоза, захароза, фенол червен, яркозелен и агар-агар.

Характеризира се с това, че е доста негостоприемна среда за повечето бактерии, благоприятстваща растежа на салмонела, но някои колиформи са способни да съществуват в нея, развивайки се слабо.

Важно е да се отбележи, че родът на Shigella не расте на тази среда, нито Salmonella typhimurium или Salmonella paratyphi. Следователно, ако искате да изолирате тези микроорганизми, трябва да се използват други среди, например XLD агар.

основа

Ярко зелен агар

Всеки от компонентите, които съставляват средата, изпълнява специфична функция, която определя характеристиките и свойствата на агара.

Плурипептоните и екстрактът от дрожди са източникът на хранителни вещества, от които микроорганизмите приемат необходимия за развитието им азот и минерали. Лактозата и захарозата са източници на енергия за микроорганизмите, които са способни да ги ферментират.

Ярко зеленото е инхибиращото вещество, което предотвратява растежа на грам положителни бактерии и голям брой грамотрицателни микроорганизми.

Натриевият хлорид осигурява осмотична стабилност на средата. Докато фенол червеният е показателят за рН, той оцветява при откриване на производство на киселина от въглехидратна ферментация.

Неферментиращите колонии от лактоза и захароза растат върху тази среда в розово или прозрачно бял цвят, на червен фон. Например бактерии от рода Salmonella.

Докато ферментиращите бактерии от лактоза или захароза, способни да растат върху тази среда, развиват жълто-зелени или жълто-зелени колонии на зеленикаво-жълт фон. Например Escherichia coli и Klebsiella pneumoniae.

Варианти на яркозелен агар (BGA)

Има и други варианти на ярко зелен агар; Новобиоцин Брилянтна зелена глюкоза (NBG) агар и Novobiocin Brilliant Green глицерол лактоза (NBGL) агар.

Новобиоцин ярко зелен глюкозен агар

Съдържа триптиказен соев агар, железен амониев цитрат, натриев тиосулфат пентахидрат, фенол червен, глюкоза, ярко зелено, новобиоцин и дестилирана вода.

Използва се за изолиране на колонии от салмонела от проби от изпражнения.

В този случай яркозеленият и новобиоцин са инхибиторните вещества, които предотвратяват растежа на Грам положителни бактерии и някои Грам-отрицателни микроорганизми.

Натриевият тиосулфат е източникът на сулфид, а железният цитрат е източникът на желязо, и двете необходими за разкриване на производството на сероводород чрез образуване на утайка от черен железен сулфид.

Глюкозата е ферментируемият въглехидрат, а фенол червеният е показателят за рН.

В тази среда колониите на салмонела се развиват големи с черен център, заобиколен от червеникав ореол и последван от ясно видима област. Някои щамове на Citrobacter freundii произвеждат колонии, идентични на тези на Salmonella.

Новобиоцин блестящ зелен глицерол лактозен агар (NBGL)

Тази среда съдържа триптиказен соев агар, железен амониев цитрат, натриев тиосулфат, лактоза, глицерол, яркозелен, новобиоцин и дестилирана вода.

Разликата между тази среда и предходната е, че глюкозата е заместена с лактоза и глицерол, а фенол червеният не се използва.

Средата се използва и за изолиране на видове Salmonella, колониите се развиват черно, поради производството на сероводород.

Само колонии, които не произвеждат киселина от глицерол или лактоза постигне достатъчно H ₂ S производство, защото ниската рН взаимодейства с H ₂ S формация. Това води до безцветни колонии за повечето видове Proteus и Citrobacter.

подготовка

-Тежат 58 грама от търговската получена дехидратирана среда. Добавете го към литър вода. Разбъркайте, оставете да престои няколко минути и поставете сместа върху източник на топлина до пълното й разтваряне.

-Автоклав при 121 ° С за 15 минути, не превишавайте времето за стерилизация.

-Оставете го да си почине и сервирайте докато е горещ в стерилни петри. Крайното рН трябва да бъде 6,9 ± 0,2.

-Да се ​​втвърди и да се съхранява в хладилника до употреба. Преди засяване на чиниите трябва да вземете стайна температура.

-Проходната среда е зелена на цвят и приготвената придобива оранжево-кафяв или червеникаво-зелен цвят, в зависимост от pH и търговската компания. Много кафяв цвят е показателен, че агарът е бил прегрял.

-След като агарът се втвърди, не се препоръчва преработка, тъй като средата се влошава.

Употреби / приложения

Тази среда се използва за търсене на щамове от рода Salmonella от проби от изпражнения и млечни храни.

Тъй като това е доста негостоприемна среда, препоръчително е да се сее обилен инокулум, ако се използва директната проба. В противен случай преди сеитбата в тази среда трябва да се извърши предварително обогатяване и обогатяване на екземплярите.

Тъй като някои щамове на Salmonella се инхибират или нарастват с трудност, препоръчително е тази среда да се придружава с друг селективен агар за Salmonella.

Всяка колония с типична характеристика на салмонелата трябва да бъде подложена на биохимични тестове за нейното окончателно идентифициране.

QA

За да се тества доброто представяне на яркозелената агарна среда, ATCC щамовете могат да бъдат използвани за наблюдение на тяхното развитие върху него.

Най-честите щамове, използвани за контрол на качеството, са: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 12022.

Първите 3 трябва да дадат розови или прозрачни бели колонии на червен фон. Салмонела с добро развитие и протеус с малък или редовен растеж.

За Klebsiella и Escherichia се очакват жълто-зелени колонии с жълт фон, а в случай на Shigella и Staphylococcus те трябва да бъдат инхибирани.

Дехидратираната среда трябва да се съхранява на стайна температура, на сухо място, тъй като средата е много хигроскопична.

Препратки

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Brilliant Green Agar. 2009
2. Британска лаборатория. Ярко зелен агар. 2015.
3. BD лаборатория. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. (5-то изд.). Аржентина, редакция Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Аржентина. Редакция Panamericana SA