VOGEL-JOHNSON AGAR: ОБОСНОВКА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В агар Vogel-Джонсън е твърда среда селективен и диференциална култура, специално формулирани за изолиране на Staphylococcus Aureus. Тази среда е създадена от Вогел и Джонсън през 1960 г. от модификацията на телуритов глицинов агар, формулирана през 1955 г. от Zebovitz, Evans и Niven.

Модификацията се състои в повишаване на концентрацията на манитол, присъстващ в средата, и във включването на pH индикатор. Настоящата формула се състои от трипин, екстракт от дрожди, манитол, дикалиев фосфат, литиев хлорид, глицин, фенол червен, агар, 1% разтвор на калиев телурит и вода.

Източник: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Трябва да се отбележи, че има и други среди, които, подобно на агар Vogel-Johnson, са избирателни за изолирането на S. aureus, като солен манитолов агар и агар Baird Parker. В този смисъл би могло да се каже, че основата на агара Вогел-Джонсън е смес между солен манитолов агар и агар на Баирд Паркър.

Първо, колониите S. aureus се отличават чрез ферментиране на манитола и превръщане на pH индикатора в жълто. От друга страна, във втората, S. aureus се характеризира с редуциране на телурит до телур и образуване на сиви до черни колонии. И двете свойства се наблюдават в агар Vogel-Johnson.

Тази среда, подобно на аналозите, е полезна за откриване на Staphylococcus aureus в проби от храни, санитарен контрол на промишлени продукти и в клинични проби.

основа

Захранване с хранителни вещества

Средата Vogel-Johnson съдържа трипеин и екстракт от дрожди; И двете вещества осигуряват дълговерижни аминокиселини, които служат като източници на въглерод и азот, необходими за растежа на бактериите. Бактериите, способни да растат в тази среда, ще поемат хранителните вещества от тези вещества.

Избирателна сила

Агар Вогел-Джонсън е способен да инхибира растежа на Грам отрицателни бактерии и дори някои Грам положителни бактерии, благоприятствайки развитието на коагулаза положителни стафилококи. Инхибиращите вещества са калиев телурит, литиев хлорид и глицин.

Диференциална мощност

Веществата, които правят тази диференциална среда, са манитол и калиев телурит. Манитолът е въглехидрат и при него се получават ферментирали киселини, които правят средата да се превръща от червено в жълто, което се случва благодарение на наличието на индикатора за рН на червения фенол.

Като има предвид, че безцветният телурит, когато е редуциран до свободен метален телур, придобива тъмносив до черен цвят.

Staphylococcus aureus ферментира манитол и редуцира телурит до телур. Поради тази причина типичните колонии на S. aureus в тази среда са сиви или черни, заобиколени от жълта среда.

Бактериите, които растат в тази среда и не редуцират телурит или ферментиращ манитол, ще образуват прозрачни колонии, заобиколени от червено оцветена среда, още по-интензивна от първоначалния цвят, поради алкализирането на средата чрез използването на пептони.

От друга страна, бактериите, които намаляват телурита, но не ферментират манитол, ще растат като сиви или черни колонии, заобиколени от наситена червена среда.

Ако средата беше приготвена без добавяне на калиев телурит, колониите S. aureus биха се развили като жълти колонии, заобиколени от жълта среда, както в солен манитолов агар.

Осмотичен баланс и втвърдяващ агент

Дикалиевият фосфат поддържа осмотичния баланс на средата и настройва pH на неутралитет 7.2. Докато агарът придава твърдата консистенция на хранителната среда.

подготовка

Разтвор на калиев телурит 1% w / v

Този разтвор не е включен в дехидратираната среда, тъй като не може да бъде стерилизиран в автоклав. Поради тази причина той се приготвя отделно и се добавя към вече стерилизираната среда.

Някои търговски къщи продават готовия за употреба 1% разтвор на калиев телурит. Ако искате да се подготвите в лабораторията, продължете както следва:

Претегля се 1,0 g калиев телурит и се измерва 100 ml дестилирана вода. Разтворете калиевия телурит в част от водата и след това допълнете количеството вода до достигане на 100 ml. Стерилизирайте разтвора чрез метод на филтрация.

Вогъл-Джонсън агар база средно

Претеглят се 60 g дехидратирана среда и се разтварят в 1 литър дестилирана вода. Сместа се загрява до кипене, за да се подпомогне пълното разтваряне. По време на процеса на разтваряне средата се разбърква често.

Стерилизирайте в автоклав при 15 килограма налягане и 121 ° С за 15 минути. Извадете от автоклава и оставете да почине, докато средата достигне температура приблизително 45 до 50 ° C. Добавете 20 ml от предварително приготвения 1% разтвор на калиев телурит.

Смесете и изсипете в стерилни петри. Оставете да се втвърди и наредете обърнати върху държачите на чинии, за да се съхраняват по-късно в хладилника до употреба.

Крайното рН на подготвената среда трябва да бъде 7,2 ± 0,2.

Преди да посеете проба, изчакайте плаката да достигне стайна температура.

Цветът на подготвената среда е червен.

употреба

Въпреки че може да се използва за изолиране на S. aureus във всякакъв вид проби, той се използва главно за микробиологичен анализ на фармацевтични продукти, козметика и храни.

Препоръчва се инокулумът да бъде гъст. Засяването може да се извърши чрез точкуване с платинена дръжка или повърхност с шпатула Drigalski.

Плаките се инкубират при 35-37 ° С за 24 до 48 часа аеробиоза.

QA

Следните контролни щамове могат да бъдат използвани за извършване на контрол на качеството на среда Vogel-Johnson:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 или Proteus mirabilis ATCC 43071.

Очакваният резултат е следният: за растеж на щам S. aureus задоволителен с черни колонии, заобиколени от жълта среда. За S. epidermidis редовен растеж с полупрозрачни или черни колонии, заобиколени от червена среда.

По същия начин се очаква пълно инхибиране на E. coli и частично или пълно инхибиране на Proteus mirabilis; ако расте, ще направи това пестеливо и колониите ще бъдат черни, заобиколени от червен цвят.

Препратки

1. BD Laboratories. VJ (Vogel и Johnson Agar). 2006.На разположение на: bd.com
2. Britannia Laboratories. Вогел - Джонсън агар. 2015.Наличен на: britanialab.com
3. Britannia Laboratories. Калиев телурит. 2015. Наличен на: britania.com
4. Медийна лаборатория. Вогъл - Джонсън агар среден. 2018. Наличен на: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Вогар-Джонсън агар база. Ръководство за микробиология на Merck. 12-то издание, стр. 502-503. Достъпно на: Потребители / Екип / Изтегляния
6. Автори на Wikipédia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia без енциклопедия, достъпна на: wikipedia.org.
7. Венецуелски стандарт Covenin 1292-89. (1989). Храни. Изолация и изброяване на Staphylococcus aureus. Достъпно на: sencamer.gob.ve