XLD АГАР: ОБОСНОВКА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

На агара XLD или ксилоза лизин дезоксихолат агарна среда е селективен и диференциална твърдо вещество култура за изолиране на ентеропатогени. Тейлър проектира формулата на XL агар (Xylose, Lysine), за да подобри изолацията на рода Shigella.

Той наблюдава, че този род е инхибиран в повечето среди, предназначени за изолиране на ентеропатогени. Впоследствие се добавят натриев деоксихолат, натриев тиосулфат и железен амониев цитрат, за да се увеличи селективността му. Тази формула се оказа полезна както за изолацията на шигела, така и за салмонела.

Разлики в колониите на шигела, салмонела и колиформи на XLD агар. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Източници: А. От: CDC / Amanda Moore, MT; Тод Паркър, доктор; Audra Marsh, любезното съдействие: Библиотека с изображение на общественото здраве B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. От: CDC / Dr. JJ фермер, любезното съдействие: Библиотека с изображения на общественото здраве

XLD агар се състои от екстракт от дрожди, натриев деоксихолат, ксилоза, лизин, лактоза, захароза, натриев тиосулфат, железен амониев цитрат, натриев хлорид, фенол червен и агар. XLD Agar и SS Agar duo се използват в повечето бактериологични лаборатории за изследване на фекални проби за Shigella и Salmonella.

Други лаборатории предпочитат комбинацията от CHROMagar Salmonella и XLD агар, сред другите налични възможности. Тези дуети могат да се приготвят в двойни чинии на Петри. От едната страна те поставят XLD агар, а от противоположната страна другата избрана среда.

основа

-Хранителна мощност

XLD агар има екстракт от дрожди, който служи като източник на хранителни вещества за микроорганизмите, които растат върху този агар. В допълнение, наличието на въглехидрати (ксилоза, захароза и лактоза) осигурява енергия на бактериите, които могат да ги ферментират.

-Селективност на средата

Като инхибиращо вещество, той представя натриев деоксихолат; Това предотвратява растежа на Грам положителни бактерии, придава на средата селективен характер.

-Диференциална мощност

Типични колонии Shigella

Както вече споменахме, XLD агар съдържа ксилоза; Този въглехидрат се ферментира от всички бактерии, които растат в тази среда, с изключение на рода Shigella.

Това е една от характеристиките, които му придават диференциален характер, тъй като колониите на Шигела се отличават от останалите, като развиват червени колонии, докато другите бактерии произвеждат жълти колонии.

Типични колонии на салмонела

Родът Salmonella също ферментира ксилоза, като първоначално генерира жълти колонии. Въпреки това, след изчерпване на въглехидратната ксилоза, тя атакува лизин за своя ензим лизин декарбоксилаза. Декарбоксилирането на лизин генерира алкали, които превръщат цвета на колонията и заобикалящата среда в първоначално червено.

Това поведение се осъществява само от салмонела, тъй като колиформите, които декарбоксилират лизин, не могат да алкализират средата. Това е така, защото колиформите също ферментират наличната лактоза и захароза; следователно, производството на киселини е много високо, оставяйки жълтата колония в тези бактерии.

Трябва да се отбележи, че родът на Salmonella не ферментира захароза или лактоза.

Производство на Н

XLD агар позволява откриване на Н ₂ S- производство Salmonella видове; За това се разчита на източника на сяра, представен от натриев тиосулфат и разработчик на реакцията, който е железен амониев цитрат.

Последният реагира с Н ₂ S (безцветно газ) и образува видим неразтворим черна утайка от железен сулфат. В този смисъл характеристиките на колониите със салмонела ще бъдат червени с черен център.

Трябва да се отбележи, че за H ₂ S да настъпи реакция формация, е необходимо алкално рН. Ето защо други Enterobacteriaceae, че форма H ₂ S не могат или толкова зле в тази среда, тъй като високата киселинност, произведени чрез ферментация на въглехидратите настоящите инхибира или пречи на реакцията.

-Натриев хлорид, агар и фенол червено

И накрая, натриевият хлорид поддържа осмотичния баланс; агар е втвърдяващото средство и фенолово червеното открива промени в рН, превръща цвета на колониите и средата.

подготовка

Претеглят се 55 g дехидратирана среда XLD и се разтварят в 1 литър вода. Загрейте и разбъркайте сместа, докато достигне точката на кипене. Не прегрявайте, тъй като топлината уврежда средата и създава утайка, която променя морфологията на типичните колонии.

Този носител не трябва да бъде автоклавиран. При разтваряне трябва да се пренесе на водна баня при 50 ° C. При охлаждане трябва да се сервира директно върху стерилни петри. Те могат да се наливат в единични чинии или двойни чинии. Те се оставят да се втвърдят и се съхраняват в хладилник до употреба.

Темпер преди употреба. Тъй като това е нестерилна среда, се препоръчва да се приготвя близо до датата на употреба.

Крайното рН на средата трябва да бъде 7,4 ± 0,2. Цветът на приготвената среда е оранжево-червен, полупрозрачен, без утайка.

Ако имате основен агар на Xylose Lysine (XL), можете да добавите натриев деоксихолат, натриев тиосулфат и железен амониев цитрат. По този начин се получава формулата на XLD агар.

Приложения

XLD агар се използва за възстановяване на ентеропатогени, главно от род Shigella и вторично от род Salmonella. Полезно е за оценка на проби от изпражнения, вода и храна.

Видове проби

Изпражнения

Пробите от изпражненията могат да бъдат засяти директно върху XLD агар, което прави добро разпределение на материала за получаване на изолирани колонии.

За да се подобри възстановяването на салмонела, XLD агар може да бъде отстранен от среда за обогатяване на салмонела.

Храна

В случай на храна може да се използват обогатяващи бульони за салмонела и шигела. За салмонела можете да използвате селенит цистинов бульон, яркозелен тетратионатен бульон, наред с други.

В случай на Shigella, той може да бъде обогатен с бульон Shigella с 0,5 µ / ml новобиоцин, инкубиран при 42 ° ± 1 ° С в продължение на 16-20 часа.

вода

При анализа на водата се препоръчва техниката на филтриране на мембраната и използването на XLD агар, наред с други.

Условия за засаждане и идентификация

Посевената среда се инкубира аеробно при 35 ° С за 24 до 48 часа.

Наблюдават се типичните колонии за всеки род, подозрителните колонии трябва да бъдат подложени на биохимични тестове за идентифицирането им.

QA

За оценка на контрола на качеството на средата могат да се използват следните бактериални щамове: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis 4CC, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Родът Salmonella се характеризира с представяне на червени колонии с черен център или напълно черни колонии на тази среда. Като има предвид, че в рода Shigella колониите трябва да са червени, тоест цвета на средата.

В случай на ешерихия коли се очаква тя да бъде напълно или частично инхибирана; ако расте, колониите са жълти. При Proteus mirabilis се очаква лош растеж с розови колонии със или без черен център. В крайна сметка род Klebsiella ще расте като жълти колонии.

Заключителни мисли

XLD агар е широко използван в бактериологичните лаборатории за високата си ефективност за възстановяване на Shigella и също така има добро възстановяване на рода Salmonella.

Rall et al. (2005) в своята работа, озаглавена "Три обогатяващи бульони и пет твърди среди за откриване на салмонела в домашни птици", демонстрират тази на 3-те тествани класически среди (яркозелен агар, SS агар и XLD агар), XLD агар има най-добра степен на възстановяване.

Процентът на възстановяване е както следва: 13,8% за яркозелен агар, 27,6% за SS и 34,5% за XLD. Rambach агар с 48% възстановяване и CHROMagar с 79,3% беше надминат само от хромогенна среда.

Препратки

1. Болести, пренасяни с храна. Шигелоза. Достъпно на: anmat.gov.ar
2. „XLD агар.“ Уикипедия, Свободната енциклопедия. 9 февруари 2019 г., 11:46 UTC. 10 април 2019, 19:25 wikipedia.org
3. BBL Laboratories. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate). 2013 Достъпно на: bd.com
4. Лаборатория. XLD агар. Достъпно на: foodsafety.neogen
5. Лаборатория Франсиско Сория Мелгуизо. XLD агар. Достъпно на:
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Оценка на три обогатяващи бульони и пет среди за плънка за откриване на салмонела при домашни птици. Брас. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Достъпно от: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.