ВОДА PEPTONE: ОБОСНОВКА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

На водата пептон е средно течен обогатяване, неселективен, използвани главно като разредител проби от храни или други материали. Тази среда от химическа гледна точка е много проста, съдържа месо пептон, натриев хлорид и вода.

Той има определена хранителна стойност, което позволява да се обогати пробата. Ако има злоупотреби с бактерии, този носител има силата да възстанови жизнеспособността. Особено полезен е за възстановяване на бактерии, принадлежащи към семейство Enterobacteriaceae.

Peptone вода в бутилки. Източник: MSc Мариелса гил

В случай на възстановяване на салмонели, се препоръчва използването на вариращ вариант на пептон вода; Това служи като средство за предварително обогатяване на пробата, в този случай съдържа други елементи като динатриев фосфат и дикалиев фосфат.

Обикновено пептоновата вода се приготвя при неутрално рН, но има и други варианти, при които е необходимо pH да бъде 8,5 ± 0,2 (алкално), тъй като бактериите, които трябва да бъдат изолирани, са алкалифилни, като напр. Вибрио холера.

Освен това тази среда може да се използва като основна среда за тестове за ферментация на въглехидрати.

основа

Пептоните осигуряват необходимите хранителни вещества за растежа на бактериите, особено азотните и късоверижните аминокиселини, докато натриевият хлорид поддържа осмотичния баланс.

Освен това, средата дава възможност за диспергиране, хомогенизиране и възстановяване на бактериални клетки, които са били повредени от промишлени процеси.

Като разредител е идеален, ефективно замествайки физиологичен разтвор (SSF) или разтвор на фосфатен буфер (PBS).

Бактериалният растеж се забелязва, като се наблюдава неговата мътност.

подготовка

Домашна подготовка (не търговска)

Претеглят се 1 g пептон и 8,5 g натриев хлорид, разтварят се в 1 литър дестилирана вода. PH трябва да се регулира на 7.0. За това може да се използва 1N натриев хлорид.

Приготвяне с търговска среда

Претеглят се 15 g дехидратирана среда и се разтварят в литър дестилирана вода. Хомогенизирайте сместа. Ако е необходимо, сместа се вари в продължение на 1 минута, за да помогне за пълното разтваряне. Сервирайте в 100 ml бутилки или 10 ml туби според нуждите. Автоклавирайте при 121 ° C за 15 минути.

Охладете и използвайте или съхранявайте в хладилник. Крайното pH на средата е 7,2 ± 0,2.

Цветът на дехидратираната среда е светло бежов, а подготвената среда е светло кехлибарена.

Подготовка за ферментационни тестове

Към предишния препарат - преди стерилизация - въглехидратът трябва да се добави до крайна концентрация от 1%, плюс индикатора на Andrade (киселинен фуксин) или фенол червен (0,018 g / L). Тръбите трябва да бъдат снабдени с камбана на Дърам, за да се наблюдава образуването на газ.

Други варианти на пептонова вода

Буферирана или буферирана пептонова вода

Съдържа ензимен хидролизат на казеин, натриев хлорид, дихидроген калиев фосфат и натриев хидрогенфосфат додекахидрат. Крайното рН е 7,0 ± 0,2.

За приготвянето му се претеглят 20 g дехидратирана среда и се разтварят в 1 литър дестилирана вода. Оставете да почине приблизително 5 минути. Загрейте за 1 минута, докато се разтвори напълно.

Изсипете в подходящи буркани според нуждите. Стерилизирайте с помощта на автоклава при 121 ° С за 15 минути.

-Алкална пептонова вода

Претеглят се 25 g от дехидратираната среда и се разтварят в 1 литър вода. Продължете както е описано по-горе. PH варира от 8,3 до 8,7.

употреба

Инокулумът се извършва чрез поставяне на пробата директно.

Използва се за разреждане на проби, особено когато се подозира, че може да има повредени бактерии. Обикновено разрежданията са 1:10 и 1: 100.

Инкубирайте за 24 часа при аеробиоза при 35-37 ° C.

Проби на изпражнения

За проби от изпражнения, търсещи салмонела, се препоръчва използването на буферирана или буферирана вода като средство за предварително обогатяване.

За да направите това, продължете както следва:

Ако се образува изпражненията, вземете 1 g проба. Ако са течни, вземете 1 ml фекалии и го суспендирайте в епруветка с 10 ml водна с пептон вода. В случай на ректални тампони, изхвърлете съдържащия се в тампона материал в епруветката с буферирана пептонова вода.

Във всички случаи пробата се смесва и хомогенизира много добре.

Инкубирайте при 37 ° C в продължение на 18 до 24 часа. Впоследствие субкултура в бульон за обогатяване, като селенитен цистинов бульон или тетратионатен бульон при 37 ° С в продължение на 18-24 часа повече. Накрая, култивирайте в селективни среди за салмонела, като SS агар, XLD агар, Hektoen агар, наред с други.

Проби от храна

Пептоновата вода се използва като среда за обогатяване или като обикновен разредител, но ако се търсят видове Salmonella, тя се използва като среда за предварително обогатяване, както вече беше описано.

В храната продължете както следва:

За твърдите храни тежи 25 g от пробата, а за течните храни измерете 25 ml от нея. Поставете споменатата порция в колби, съдържащи 225 ml пептонова вода. Смесете и хомогенизирайте пробата.

Ако се подозира, че натоварването на микробите е голямо, могат да се направят серийни или десетични разреждания, за да се улесни отчитането на единици, образуващи колонии (CFU).

Броят на разрежданията ще зависи от вида на пробата и опита на анализатора.

Ако, напротив, се подозира, че микробното натоварване е много ниско, не е необходимо да се извършват разреждания. Впоследствие субкултура на селективни носители.

В случай на храна от морето, като миди, риба, наред с други, в търсене на Vibrio cholerae или други видове Vibrio, трябва да се използва пептонова вода, регулирана до pH 8,5 (алкална пептонова вода).

QA

От всяка подготвена партида трябва да се инкубират една до две епруветки без инокулация за 24 часа в аеробиоза при 37 ° С. В края на времето не трябва да се наблюдава мътност или промяна на цвета.

Известни контролни щамове също могат да бъдат използвани за оценка на тяхната ефективност:

За това могат да се използват следните бактериални щамове: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Във всички случаи се очаква задоволително развитие на микробите, което се наблюдава от мътност на средата.

Ограничения

-Дехидратираната среда е много хигроскопична, така че трябва да се пази от влага.

-Средата не трябва да се използва, ако се наблюдава някакъв вид влошаване.

- Дехидратираната хранителна среда трябва да се съхранява между 10 - 35 ° C

-Приготвената среда трябва да се съхранява в хладилник (2-8 ° C).

Препратки

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B и Velázquez O. Техники за микробиологичен анализ на храните. 2009 г., 2-ро изд. Химически факултет, UNAM. Мексико. Версия за администратора на ръководства и документи (AMyD) на Химическия факултет, UNAM 1. Достъпно на:
2. Britannia Laboratories. Буфетирана пептонова вода. 2015.Наличен на: britanialab.com
3. Неогенни лаборатории. Пептонова вода. Достъпно на: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Пептонова вода. 2015.Наличен на: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Буферирана пептонова вода. Достъпно на: merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratories. Алкална пептонова вода. Достъпно на: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.