MEDIO MIO: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2024

Средата MIO е биохимичен тест, използван за подпомагане на идентифицирането на видове бактерии, принадлежащи към семейство Enterobacteriaceae. Той е доста питателен и се състои от глюкоза, екстракт от дрожди, пептон, триптеин, L-орнитин хидрохлорид, бромокрезол лилаво и агар.

Значението на нейния акроним (MIO) описва всеки от параметрите, които могат да се наблюдават в тази среда; подвижност, индол и орнитин. Подвижността е способността на микроорганизма да се движи поради наличието на жлези. За да се наблюдава това свойство, консистенцията на средата трябва да е полутвърда, така че препаратът да съдържа по-малко агар.

План на интерпретация на резултатите в MIO среда. Източник: Подготвено от автора MSc. Мариелса гил

Получаването на индол показва наличието на ензима триптофаназа, който действа върху аминокиселината триптофан, което изисква използването на разкриващ реагент, за да се направи производството на индол видим.

И накрая, орнитинът определя дали бактерията е в състояние да декарбоксилира аминокиселината, тоест дали притежава ензима орнитин декарбоксилаза.

основа

Пептон, екстракт от дрожди и трипин

Тези елементи допринасят за хранителната сила на тази среда. Те служат като източник на хранителни вещества и незаменими аминокиселини за развитието на бактериите.

В допълнение, триптеинът е източник на триптофан, който показва наличието на ензима триптофаназа, който разгражда триптофана чрез редуктивно дезаминиране, освобождавайки индол, пировинова киселина, амоняк и енергия.

Индолът е безцветен, поради което неговото присъствие се разкрива чрез добавяне на пет капки реагент на Ерлих или Ковакс, и двете с р-диметиламинобензалдехид.

Алдехидната група на това съединение реагира с индола, като генерира пръстен във форма на червен фуксия на повърхността на агара.

Всяка следа от цвят трябва да се счита за положителен тест. Доказателството трябва да се прочете веднага, тъй като с течение на времето цветът се влошава.

Освен това, този тест трябва да бъде разкрит, след като са били отбелязани резултатите от подвижността и декарбоксилирането на орнитин.

Интерпретация

Положителен тест: образуване на фуксия червен пръстен при добавяне на капки реактив на Kovacs.

Отрицателен тест: няма образуване на пръстен.

подвижността

Способността на бактериите да се движат ще бъде очевидна, ако се наблюдава мътна среда или ако има дебела линия на растеж, разширяваща се около първоначалната инокулация.

Тестът за отрицателна подвижност ще бъде доказан чрез наблюдение на тънка линия на растеж и всичко около него ще бъде без растеж.

Важно е подвижността да бъде разчетена преди разкриването на индола, тъй като добавянето на реагента замъглява цялата среда.

При мобилните, но бавнорастящи бактерии е трудно да се демонстрира подвижността им с тази среда. В този случай се препоръчва да се използват други тестове или методи, като например средната подвижност или метода на отпадане.

гликоза

Глюкозата е ферментируемият въглехидрат, който освен че осигурява енергия, подкислява околната среда, необходимо условие за настъпване на декарбоксилиране на аминокиселината орнитин.

Ферментацията на глюкозата трябва винаги да се извършва, като се започне от принципа, че всички бактерии, принадлежащи към семейството на Enterobacteriaceae, ферментират глюкоза.

L-Орнитин

В случай, че бактериите произвеждат ензима орнитин декарбоксилаза, това може да действа, след като средата е подкиселена чрез ферментацията на глюкозата.

Ензимът орнитин декарбоксилаза действа върху карбоксилната група на аминокиселината, като произвежда амин, наречен путрезин, който алкализира средата отново.

Този тест трябва да се прочете след 24 часа инкубация, защото ако се опитате да четете, преди да можете да изтълкувате погрешно теста с фалшив отрицателен.

Трябва да се помни, че първата реакция, която се проявява, е ферментацията на глюкозата, така че средата пожълтява в начална фаза (първо от 10 до 12 часа). Ако впоследствие се случи декарбоксилиране на орнитин, средата ще стане лилава.

Важно е да се интерпретира тестът за декарбоксилиране на орнитин, преди да се разкрие индол, тъй като добавянето на реактива на Kovacs променя цвета на средата.

Интерпретация

Отрицателен тест: среда с жълт цвят или с жълт фон.

Положителен тест: средно напълно лилав.

PH индикатор

В този случай се използва бромокрезол лилав; този, който отговаря за разкриването, когато има промяна в pH в средата. При подкисляване индикаторът пожълтява, а при алкализиране става лилав.

Сеитба и разработване на техника

За засяване на MIO средата се използва прав контур или игла и с нея се събира част от колонията, която ще се изследва.

В средата на MIO се прави дълбока пункция по права линия. Не е препоръчително да се извършва двойна пункция, тъй като може да даде невярно изображение на подвижността, ако пробивите не се извършват на едно и също място.

Инкубирайте за 24 до 48 часа при 37 ° С при аеробиоза. Погледнете резултатите в този ред: подвижност, декарбоксилиране на орнитина и най-накрая разкрийте индола.

Препоръчително е асептично да се отстранят 2 ml от средата, да се прехвърлят в стерилна епруветка и да се извърши там индоловия тест, така че ако е отрицателен, останалата част от първоначалната епруветка може да се инкубира още 24 часа, за да се разкрие отново индолът.

Разработката на индола се осъществява по следния начин: 3 до 5 капки реактив на Kovacs се добавят към MIO средата и се разбъркват енергично. Наблюдава се дали се появява или не пръстен с червена фуксия.

подготовка

MIO среда

Претеглят се 31 g от MIO средата и се разтварят в един литър дестилирана вода.

Загрейте, докато сместа заври за една минута, като разклащате често, докато агарът се разтвори напълно. Разпределете 4 ml от средата в 13/100 епруветки с памучни капачки.

Стерилизирайте в автоклав при 121 ° С за 15 минути. Извадете от автоклава и оставете да престои право в стелаж, така че да се образува полутвърд блок.

Да се ​​съхранява в хладилник 2-8 ° C. Оставете го да загрее преди сеитбата на бактериалния щам.

Цветът на дехидратираната среда е бежов, а цветът на подготвената среда леко опалесциращ лилав.

Крайното рН на подготвената среда е 6,5 ± 0,2

Средата пожълтява при кисело рН и е лилава при алкално рН.

Kovacs Reagent (Indole Test Developer)

Този реагент се приготвя, както следва:

Измерват се 150 ml амилов, изоамилов или бутилов алкохол (който и да е от трите). В него се разтварят 10 g р-диметиламинобензалдехид. Впоследствие бавно се добавят 50 ml концентрирана солна киселина.

Приготвеният реагент е безцветен или светложълт. Трябва да се съхранява в кехлибарена бутилка и да се съхранява в хладилник. Тъмнокафявият цвят показва влошаването му.

Също така реагентът на Kovacs може да бъде заместен с реактива Ehrlich. Последният, бидейки по-чувствителен, се предпочита да разкрива индол в бактерии, които го произвеждат в минимални количества, като например в някои неферментиращи грамо отрицателни пръчки и някои анаероби.

употреба

Тази среда е тест, който допълва батерия от биохимични тестове за идентифициране на бактерии, принадлежащи към семейство Enterobacteriaceae.

Данните за декарбоксилиране на орнитин служат за разграничаване на Shigella sonnei, който тества положително, от Shigella boydii, Shigella flexneri и S. dysenterieae, които тестват отрицателно.

Той също така разграничава рода Klebsiella, който тества отрицателно, от рода Enterobacter, където повечето от неговите видове тестват положително.

Източник: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.

QA

Всеки път, когато се приготвя партида MIO среда, може да се направи контролен тест. За това се използват известни или сертифицирани щамове за наблюдение на поведението на средата.

Щамовете, които могат да се използват, са Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes и Proteus mirabilis.

Очакваните резултати са Е. coli и М. morganii. Дан М: +, I: + и O: +.

Klebsiella pneumoniae е всички отрицателни (M: -, I: -, O:-). Proteus mirabilis и Enterobacter aerogenes дават M: + I: - и O: +.

Препратки

1. Mac Faddin J. (2003). Биохимични тестове за идентифициране на бактерии с клинично значение. 3-то изд. Редакция Panamericana. Буенос Айрес. Аржентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015. Достъпно на адрес: britanialab.com
5. BD Laboratories. BBL Mobility Indole Ornithine (MIO) Среден. 2007. Достъпно на: bd.com
6. Valtek Laboratories. Средно MIO подвижност, индол, орнитин. 2010.На разположение на: andinamedica.com