СРЕДЕН СИМ: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В средата на SIM е полутвърда и диференциал агар, специално проектиран, за да помогне за идентифицирането на някои бактерии, особено Enterobacteriaceae. Състои се от триптеин, пептон, железен сулфат, амониев сулфат, натриев тиосулфат и агар.

Тази среда позволява извършването на три важни теста: производството на сероводород (H ₂ S), образуването на индол и подвижността, оттук и съкращението SIM. Поради голямата си полезност, той не може да липсва в бактериологична лаборатория.

А. Търговска SIM среда B. SIM H2S (-), Indole (-) и Mobility (+) тест и SIM H2S (+), Indole (-), подвижност (+) тест. Източник: А. Снимка, направена от автора MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

За разлика от други среди, тя трябва да е полутвърда, за да може да се открие способността за движение на някои бактерии. В този смисъл този тест работи много добре за Enterobacteriaceae, но не и при неферментиращи грамо-отрицателни пръчици, където се предпочита да се използват други методи, като например висящата капка.

СИМ средата позволява да се разграничат определени специфични свойства, които характеризират някои бактерии спрямо други. Например, Ешерихия коли се отличава с е Н ₂ S (-), индол (+) и мотилитет (+), докато Proteus Mirabilis е Н ₂ S (+), индол (-), мотилитет (+).

основа

Това е културална среда, която се счита за диференцирана, тъй като нейната употреба разграничава микроорганизмите, способни да произвеждат сероводород от тези, които не го правят; той също така подчертава тези, които образуват индол от триптофан, от тези, които не го правят, и накрая разграничава подвижните бактерии от неподвижните.

Източник на захранване

Както всяка културна среда, тя има елементи, които осигуряват необходимите хранителни вещества, за да могат да се развият неизискващи микроорганизми. Тези елементи са представени от пептони и трипин.

Развитието на микроорганизма в средата е от съществено значение, за да може да се наблюдава наличието или отсъствието на характеристиките, които тази среда оценява.

Производство на сероводород

Буквата S на съкращението SIM се отнася до производството на сероводород (H ₂ S). Бактериите, способни да образуват сероводород, ще поемат сярата от натриев тиосулфат.

След Н ₂ се образува S -colourless газ, той реагира с настоящето желязната сол в средата, образуващ железен сулфид, ясно видима (черна утайка). Бактериите, които не образуват H ₂ S, оставят средата на първоначалния цвят (бежово).

Наличието на черна утайка може да попречи на тълкуването на подвижността. Въпреки това, най-Н ₂ S- производство Enterobacteriaceae са известни като положително подвижни, като Salmonella, Proteus, и Citrobacter. Освен това черната утайка, която покрива почти цялата среда, предполага положителна подвижност.

Индолова формация

Втората буква на съкращението SIM е „I“, което представлява образуването на индол.

В този смисъл триптеинът, освен че е източник на хранителни вещества, изпълнява и друга основна функция. Този пептон е богат на аминокиселина, наречена триптофан, следователно може да покаже бактерии, които произвеждат триптофаназа.

Този ензим е отговорен за разцепването на аминокиселината триптофан с последващото образуване на индол (безцветно вещество), пировинова киселина и амоний.

Ето защо, за да се покаже тази реакция, е необходимо да се добави разкриващо вещество (реагент на Ерлих или реактив на Ковач). Или реагира с индол, образувайки червено-фуксиеобразна пръстенна субстанция на повърхността на агара. Ако се появи пръстенът на фуксия, индоловият тест се интерпретира като положителен.

Бактериите, които не притежават този ензим, няма да образуват пръстена и той се интерпретира като отрицателен индолов тест.

Важно е да се отбележи, че индоловият тест трябва да бъде последният, който се интерпретира, тъй като след като реагентът се добави, средата става мътна, което затруднява визуализирането на подвижността.

подвижността

Накрая буквата "М" на думата SIM означава подвижност. За да се оцени подвижността, тази среда е стратегически полутвърда, тъй като тази характеристика е от съществено значение, за да можем да наблюдаваме дали има или не бактериално движение. Бактериите, които притежават жълтеници, са тези, които дават този положителен тест.

Положителен тест ще бъде очевиден, когато се наблюдава мътност, както в първоначалния инокулум, така и около него. Докато немотилните бактерии се развиват само по пътя на първоначалния инокулум.

подготовка

Средна SIM карта

Претеглят се 30 g дехидратирана среда и се разтварят в литър дестилирана вода. Сместа се оставя да престои 5 минути и след това се загрява до кипене, като се разбърква често до пълното й разтваряне.

Разпределете сместа в епруветки с памучни капачки и автоклавирайте при 121 ° С в продължение на 15 минути. Извадете багажника на тръбата от автоклава и го оставете да се втвърди във вертикално положение, така че средата да е във формата на блок.

За консервирането му се съхранява в хладилника до употреба. Приготвената среда трябва да има крайно pH от 7,3 ± 0,2.

По време на инокулирането на средата, тя трябва да бъде на стайна температура. Средният цвят е бежов.

Реактив на Ковач

Измерете 150 ml амилов или изоамилов или бутилов алкохол. (Използвайте едно от трите споменати).

Разтворете 10 g р-диметиламинобензалдехид. След това бавно добавете 50 ml концентрирана солна киселина.

Готовият за употреба реагент е безцветен или светложълт. Трябва да се съхранява в кехлибарена бутилка и да се съхранява в хладилник. Не използвайте, ако стане тъмнокафяв; което показва, че тя е повредена. Този реагент е предпочитан, когато става дума за Enterobacteriaceae.

Реагент на Ерлих

Претеглят се 2 g р-диметиламинобензалдехид и се разтварят в 190 ml абсолютен етилов алкохол и се смесват бавно с 40 ml концентрирана солна киселина. Съхранявайте по същия начин реактива на Ковач. Реагентът на Ерлих се използва най-вече за неферментиращи и анаеробни бактерии.

Приложения

SIM средата е много използвана в бактериологичните лаборатории. Предимството му е, че в една и съща тръба могат да се наблюдават три основни характеристики при идентифицирането на Enterobacteriaceae.

засети

Правилният начин за засяване на тази среда е използването на иглата, с която част от чистата колония, която ще се изследва, се взема и се поставя вертикално в центъра на средата. Трябва да се извърши еднократно излъчване. Пункцията не трябва да достига дъното на тръбата, правилното е да покриете само две трети от дълбочината.

Повтарянето на инокулума не се препоръчва, тъй като това може да доведе до неверни интерпретации на положителната подвижност. Инокулираната среда се инкубира аеробно при 37 ° С в продължение на 24 часа.

След като времето е сключен, в който се констатира дали е имало или не производство на H ₂ S и подвижността се чете. Накрая индолът се разкрива, добавяйки 3 до 4 капки от реактива на Ерлих или Ковач, разбърква се внимателно и се интерпретира.

Източник: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.

QA

Като контрол на стерилността една или две епруветки се инкубират без инокулация в пещ при 37 ° С за 24 часа. Очаква се след това време да няма растеж или промяна на цвета.

Като контрол на качеството могат да се използват известни сертифицирани щамове, като: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Очакваните резултати са: Escherichia coli H ₂ S отрицателна, индол и положителна подвижност, Enterobacter aerogenes само положителна подвижност, Salmonella typhimurium H ₂ S и положителна подвижност, с отрицателен индол. Proteus vulgaris всички позитивни, докато Klebsiella pneumoniae и Shigella са отрицателни.

Ограничения

-Някои щамове Morganella morganii, наред с други щамове, могат да произведат кафеникав пигмент в тази среда поради производството на меланин, това не трябва да се бърка с утайката на железен сулфид. В неопитни специалисти тази ситуация може да генерира фалшиви положителни резултати при тълкуването на H ₂ S теста.

-Стриктните аеробни бактерии ще растат само на повърхността на тръбата, което затруднява интерпретирането на подвижността.

Препратки

1. BD Laboratories. BBL SIM среден. 2008. Достъпно на: bd.com
2. Неогенни лаборатории. SIM среден. Достъпно на: безопасност на храните
3. Дифко Франсиско Сория Мелгуизо. SIM среден. 2009.Достъпна на:
4. Brizuela-Lab Laboratory. Средна SIM карта. Достъпно на:.brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratories. Средна SIM карта. 2015.Достъпно на адрес: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.