ОРЦЕИН: ОСНОВА И ПОДГОТОВКА - ХИМИЯ - 2025

В orceína е естествен цвят лилаво, извлечен от различни лишеи като orchilla или archill, fruticose лишей Rocella tinctoria и Lecanora parella основно. Rocella tinctoria се среща на африканския и американския континент, въпреки че може да бъде заменен от други видове, разположени в Европа.

Това петно ​​се използва широко в цитогенетичните изследвания от древни времена. В този смисъл, орцеиновият препарат, който включва оцетна киселина, е въведен от LaCourt през 1941 г., поради което първоначално се нарича техника LaCourt.

Химична структура на орцеин и разтвор на орцеин. Източник: Wikipedia.org/ Oguenther от de.wikipedia (д-р Гюнтер)

По същия начин, поради своята простота и ниска цена, той е бил използван за производството на лакмус (багрило, извлечено от лишеи) и при хистологични изследвания (оцветяване на клетки и тъкани).

Различни проучвания са използвали това оцветяване, комбинирано с други химикали, като пикокарминат амоняк и оцетна киселина, за оцветяване съответно на еластични влакна и хромозоми. Понастоящем орцеинът продължава да се използва в цитогенетичните изследвания на животни и растения.

Наскоро Silva et al. 2017 успешно използва това оцветяване, за да наблюдава различните промени, които настъпват в еластичните влакна на кожата на палеца при чилийски възрастни възрастни. Това проучване разкри как влакната на палеца се променят със стареенето.

В този смисъл еластичните влакна са наблюдавани с кафеникаво-черен цвят при индивиди по-възрастни от 80 години; докато при най-младите (от 60 години) те се наблюдават като червеникаво-кафяви. Цитоплазмата и другите клетъчни структури стават жълтеникаво-зелени.

Това позволи да се потвърди наличието и състоянието на еластичните влакна по отношение на тяхното разположение, количество и цялостност. От друга страна, също е посочено, че орцеинът е от голяма полза за идентифициране на аневризми и диагностициране на артерит, наред с други състояния.

основа

Орцеинът е част от оксазиновата група багрила, а оцветяването се основава на афинитета му към ДНК. Багрилото се свързва с отрицателния заряд на тази молекула, представена от фосфатната група. Ето защо, хромозомите са оцветени в лилаво.

Останалата структура на клетката обаче придобива различен цвят. По-конкретно, при еластичните влакна, те са оцветени червеникавокафяви, клетъчни ядра от синьо до тъмно лилаво, докато колагенът не оцветява.

По тази причина орцеинът се използва за оцветяване на хроматин и диференциране на пола при някои видове мухи. По същия начин, ядра и някои чернодробни включвания, произведени от антигени на хепатит В, могат да бъдат оцветени.

Orcein разтворите имат специфични функции при оцветяването. Орцеин А има функцията да омекотява клетъчните мембрани, причинявайки тяхната смърт и парализира процеса на тяхното делене. Междувременно орцеин В е отговорен за завършването на оцветяването чрез адхезията си към хромозомите.

подготовка

Ацето-орцеинов разтвор 1%

За да се приготви 1% разтвор на ацето-орцеин, 2 грама орцеин се разтварят в 45 мл ледена оцетна киселина, за предпочитане гореща, и при стайна температура се прибавят 55 мл дестилирана вода.

След това непрекъснато се разбърква, за да се хомогенизира разтворът, за да се остави покой, докато изстине. Накрая се съхранява при 4 ° C в тъмни буркани. Този препарат е използван от Flores 2012 за наблюдение на фазите на зреене на краве яйцецити.

В този случай, например, разтворът на ацето-орцеин се поставя върху тъканта, предварително фиксирана в оцетна киселина-етанол за 24 часа. Този процес на оцветяване се провежда за 30 минути и тъканта впоследствие се обезцветява.

По същия начин може да се използва за идентифициране на органели в многоклетъчни тъкани. В този случай намазка на букалната лигавица се оцветява с капка разтвор на ацето-орцеин, покривката се поставя върху пързалката и веднага може да се наблюдава ядрото на клетката с нейните подструктури.

Лакто-пропонен разтвор орцеин 1%

Освен това, орцеинът може да бъде приготвен с други химикали като млечна киселина и пропионова киселина. За да направите това, един грам орцеин се разтваря в предварително смесен разтвор при стайна температура 23 ml млечна киселина и 23 ml пропионова киселина; допълване на обема с дестилирана вода до 100 ml.

С този лакто-пропионен орцеинов разтвор е възможно да се наблюдават различните фази на мейотичното деление на растителните клетки. В този случай предварително фиксираната и хидролизирана проба се поставя за 15 минути в лакто-пропионовия орцеинов разтвор и след това тъканта се разнася върху микроскопски стъкла.

В проучване на Duque 2016 върху полигенни хромозоми той използва препарат от 2 грама орцеин, разреден в оцетна киселина и 85% млечна киселина, разреждащ се с 65% разтвор на оцетна киселина. Накрая той погледна хромозомите в слюнчените жлези на Drosophila melanogaster.

Орцеин А и Орцеин В

Важно е да се отбележи, че в зависимост от пробата и какво се оценява, се приготвя подходящият разтвор на орцеин. Така например 1N солна киселина се добавя към разтвора на орцеин А, за да се наблюдават разделящите се клетки.

Докато разтворът на орцеин В се разтваря в 45% оцетна киселина. Тази техника е съкратен метод за оцветяване и обикновено се използва като допълнение към оцветяването на хромозомни структури.

Заключителни мисли

От векове насам, лишеите като Lecanora, Parmelia и Umbilicaria могат да бъдат намерени в страни от американския континент като Аржентина, които са чудесни източници на орцеин. Също така европейските райони като Канарските острови бяха навремето големи производители на орхила.

Това е изнесено в други градове на същия този континент като Генуа и страни като Англия, докато Холандия монополизира производството на лакмус от орхила. Следователно този лишей е по-късно намален, докато не е на път да изчезне.

Това доведе до замяна на орхила от други растения с багрилни свойства. Появата на синтетични оцветители обаче допринесе за прекратяването на търговията с този лишей от източник на орцеин.

Това беше възможно благодарение на Cocq, който през 1812 г. описа синтеза на орцеин, знаейки тогава, че той се синтезира от фенолно съединение, наречено орцинол. Въпреки това, естественият орцеин все още е предпочитаният.

Това може да се дължи на факта, че орцинолът е много силно миришещо съединение и продължителната му експозиция може да носи рискове за здравето, като загуба на способност за откриване на миризми. Тези увреждания на хипофизата могат да преминат от временни до постоянни, толкова по-голяма е експозицията.

Препратки

1. Ortega L, García R, Morales C. «Прилагане на лак, произведен от гъби за разграждане на микробиологични багрила (орцеин и кристално виолетово).» Младите хора в науката 2. 2015; 633-637. Достъпно на: jovenesenlaciencia.ugto.mx.
2. Barcat J. Orceína и еластични влакна. Медицина (Буенос Айрес) 2003; 63: 453-456. Достъпно на: Medicinabuenosaires.com.
3. Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. Хистологични характеристики на летящата кожа на лицето на палеца при чилийски индивиди с избледняване на дактилограма. J. Morphol. 2017; 35 (3): 1107-1113. Достъпно на: scielo.conicyt.
4. Orrillo M, Merideth B. "Картофева репродуктивна биология и цитогенетика." Международен картофиращ център (CIP). Техническо ръководство. Достъпно на: research.cip.cgiar.org/
5. Flores F. «Колекция, култура и съхранение in vitro на крави яйцеклетки (bos taurus) в боливийските планини.", Национален университет на Алтиплано, Пуно-Перу; 2012.Достъпна на: repositorio.unap.edu.pe.
6. Duque C. Полиетинови хромозоми: поглед върху феномена на ендоредупликацията. Национален университет на Колумбия, Меделин; 2016. Достъпно на: edu.
7. Camarena F. Клетъчна и молекулярна биология. Ръководство за практика Автономен университет в Баджа Калифорния. 2017.Достъпна на: pez.ens.uabc.mx.
8. ФАО / МААЕ. 2018. Ръководство за разграничаване на дивите и развъжданите мухи Anastrepha ludens (Loew) от нормален щам („бисексуален“) и генетично секси щам (Tapachula-7), облъчен и неразлъчен. Guillen Aguilar JC, López Muñoz L, López Villalobos EF и Soto García DN Организация на Организацията на обединените нации. Рим, Италия, 95 с.
9. Orcein. (2018 г., 30 ноември). Уикипедия, Свободната енциклопедия. Дата на консултация: 03:38, 31 юли 2019 г. es.wikipedia.org.
10. Merck Millipore. (2018 г., 16 юли). Орцейна микроскопия за микроскопия на Certistain. Достъпно на: merckmillipore.com