САФРАНИН: ХАРАКТЕРИСТИКИ, УПОТРЕБА, ТЕХНИКИ, ТОКСИЧНОСТ - ХИМИЯ - 2026

В сафранин е meriquinoide багрило, наречена за неговата химична структура, имаща два бензеноидни пръстени и от 2 quinoid пръстени на последните са тези, които предоставят на червения цвят.

Нарича се още диметил сафранин или основен червен 2 в кратката си форма, тъй като научното му наименование е 3,7-диамино-2,8-диметил-5-фенил-феназиниумхлоро диметил сафранин, а химическата формула е C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

Химична структура на сафранин, показващ бензеноидни и хиноидни пръстени / Воден разтвор на сафранин. Източник: NEUROtiker редактиран от MSc. Мариелса Гил / LHcheM

Има вариант, наречен триметил-сафранин, но няма съществена разлика между двете вещества.

Сафранинът е монохроматично багрило и в зависимост от характеристиките на химическата формула е положително заредено вещество. Следователно той има афинитет към отрицателно заредените структури. Тези структури ще бъдат оцветени в червено.

Това свойство му дава приложимост в много хистологични техники за оцветяване на различни клетъчни структури, както на еукариотни, така и на прокариотни организми.

Safranin се използва като контрастно багрило във важни и добре познати техники за рутинна употреба в бактериологията. Тези техники са: петно ​​по Грам-Хукер, петно ​​от Schaeffer Fulton за спори или оцветяване на бактериални капсули, наред с други.

характеристики

Цветът на шафран (подправка, получена от стигмите на цветето Crocus sativus) беше вдъхновението за назоваването на това багрило. От термина шафран идва името на сафранин. Това се дължи на голямото сходство между цвета на шафран и оцветяването, което предоставя тази боя.

Сафранин се предлага под формата на кристали или прах, като двете презентации са разтворими във вода. Багрилото на сафранин няма мирис. Оцветява структурите червено. Структурите, които привличат багрилото на сафранин, се наричат ​​сафранофили.

Структурно сафранинът е сложен, той има два бензеноидни пръстена в краищата и в центъра са разположени двата хиноидни пръстена, където се намира N ⁺ катионът. В центъра на структурата е системата, която отговаря за предоставянето на цвета. Поради тази характеристика този оцветител е класифициран в категория II.

употреба

Сафранин се използва за оцветяване на различни структури. Особено подчертава клетките на Кулчицки, присъстващи в стомашно-чревния тракт, наричани още ентерохромафинови клетки.

Способен е да оцвети микроорганизми, принадлежащи към семейство Rickettsiaceae. По същия начин се използва в различни техники, като методът на Koster, модифициран, използван за оцветяване на бактерии от рода Brucella.

От друга страна, сафранинът се използва в техниката за оцветяване на спори Schaeffer Fulton и в оцветяването по Грам-Хюкер. И в двете техники сафранинът работи като контрастно багрило.

В първия случай спорите приемат цвета на малахитово зелено, а останалите структури са червени от сафранин. Във втория, Gram отрицателните бактерии губят цвета на виолетовия кристал в етапа на обезцветяване, следователно сафранинът е този, който оцветява отрицателните бактерии по Грам в червено.

Освен това, сафранин се използва в бактериологията за приготвяне на Brucella агар среда с разреждане на сафранин 1: 5000. Тази среда служи за разграничаване на вида Brucella suis от останалите видове. Brucella melitensis и Brucella abortus растат на тази среда, но B. suis се инхибира.

В агроиндустриалното поле сафранинът е използван при 2,25% и разреден 1:10 за оцветяване на стволови проби от растението на захарна тръстика.

Това растение е често засегнато от бактерията Leifsonia xyli subsp. ксили, който уврежда ксилема на растението. Оцветените стъбла се оценяват, за да се определи функцията на съдовете на ксилема.

Техники в областта на бактериологията

Кастанеда петно ​​за оцветяване

Намазва се кръв или тъкан в буферен разтвор (фосфатен буфер рН 7,6). Оставете да изсъхне спонтанно и след това покрийте с метиленово синьо в продължение на 3 минути и противодействайте със сафранин. Rickettsiae са оцветени в синьо, контрастиращи с червения фон.

Петна Koster модифицирано за

Прави се намазка и пламва в запалката за фиксиране. Впоследствие се покрива със смес от 2 части наситен воден сафранин с 3 части 1 mol / L разтвор на KOH, за 1 минута. Измиването се извършва с дестилирана вода и се оцветява с 1% карболов метиленово синьо.

Ако пробата съдържа бактерии от рода Brucella, те ще се появят оранжеви на син фон.

Оцветяване на бактериална капсула

Приготвя се смес от бактериална суспензия с мастило на Индия и се добавя сафранин. Под микроскоп около всяка бактериална капсула с черен фон ще се появи червеникав ореол.

Оцветяване на спори

Прави се намазване с бактериалната суспензия. След това се фиксира на топлина. Той е покрит с 5% малахитово зелено, пламтящо често до отделяне на пари. Процесът се повтаря за 6-10 минути. Накрая се промива с вода и се оцветява с 0,5% сафранин в продължение на 30 секунди. Бацилите оцветяват червено, а спорите - зелени.

Грам-Хукер петно

Прави се намазка с бактериална суспензия и се фиксира в топлината. Покрийте пързалката с кристално виолетово за 1 минута. След това луголът се поставя като разтвор за разтвор за 1 минута. Впоследствие се избелва с ацетонов алкохол и накрая се контрастира със сафранин в продължение на 30 секунди.

Грам-положителните бактерии оцветяват синкаво виолетово, а Грам-отрицателните бактерии - червени.

Някои лаборатории са спрели да използват техниката на Грам-Хукер, за да възприемат модифицираната техника на Грам-Копелоф. В последното, сафранинът се заменя с основен фуксин. Това е така, защото сафранинът оцветява слабо видовете от родовете Legionella, Campylobacter и Brucella.

Техники в областта на хистологията

Kulchitsky оцветяване на клетките (ентерохромафини)

Тъканните участъци от стомашно-чревния тракт се оцветяват със сребърен хлорид. След това се обезцветява с натриев тиосулфат и накрая контрастира със сафранин.

Кълчицките клетки се отличават с наличието на черно-кафяви гранули.

Остеоартрит петно

Тъй като сафранинът има положителен заряд, той се свързва много добре с карбоксилните и сулфатните групи гликозаминогликани. Това са част от протеогликаните, които съставят ставния хрущял. В този смисъл при оцветяване със сафранин О е възможно да се установи дали има или не загуба на хрущял или не.

Загубата на хрущялна тъкан може да бъде измерена с помощта на скалата на Манкин или също наречена скала на остеоартрит.

Техниката е обяснена по-долу: хистологичният участък се потапя в тава с железен хематоксилинов разтвор на Weigert, след което се прекарва през кисел алкохол и се промива с вода.

Продължете процеса на оцветяване чрез потапяне на слайда в бързо зелено, измива се с оцетна киселина и сега се потапя в сафранин О. За да завърши процеса, той се дехидратира с помощта на алкохоли в различни концентрации във възходящ ред. Последната стъпка изисква ксилол или ксилол за пробата да се изясни.

Слайдовете са обусловени от балсам на Канада или подобен, който се наблюдава под микроскоп.

С тази техника ядрата се оцветяват черно, костта е зелена и хрущялът, където протеогликаните са открити червени.

Петна за идентифициране на макроводорасли

Перес и др. През 2003 г. предложиха проста и евтина техника за боядисване на макроводорасли. Пробите се приготвят в парафинови хистологични секции. Секциите са фиксирани с 1% глицерин, което им позволява да изсъхнат напълно. След това се поставя в ксилол за отстраняване на парафина.

Секцията се рехидратира, като се прекарва през серия от тави, съдържащи етанол в различни степени на концентрация (низходящ ред), за 2 минути във всяка.

Впоследствие се оцветява в продължение на 5 минути със 3: 1 смес от 1% сафранин с 1% толуидин синьо, и двете приготвени с 50% етанол. Към сместа се прибавят три капки пикринова киселина, която действа като разяждаща.

След това се дехидратира, като отново преминава през тавите с алкохол, но този път нагоре. Накрая се изплаква с ксилол и пробата се приготвя с балсам от Канада, който трябва да се наблюдава.

токсичност

За щастие, сафранинът е багрило, което не представлява опасност за тези, които се справят с него. Той е безвреден оцветител, не е канцерогенен и не е запалим.

Директният контакт с кожата или лигавицата може да причини леко зачервяване в областта, без големи усложнения. За това се препоръчва да се измие засегнатата област с много вода.

Препратки

1. Гарсия Х. Колоранте сафранина О. Техник по здраве, 2012 г.; 1 (2): 83-85. Достъпно на: medigraphic.com
2. Оцветяване от Гил М. Грам: основа, материали, техника и приложения. 2019.Достъпна на: lifeder.com
3. Гил М. Оцветяване на спори: обосновка, техники и употреба. 2019.Достъпна на: lifeder.com
4. Сафранина “. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 7 март 2017, 10:39 UTC. 3 август 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Полезна техника за оцветяване в анатомичната интерпретация на Gracilariopsis tenuifrons и Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Акт Бот. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Достъпно на: scielo.org.
6. Църква Алейка, Пелта Естер Лилия, Алварес Елба, Милиан Дж, Матос Мадю. Връзка между функционалността на съдовете на ксилема и наличието на Leifsonia xyli subsp. xyli. Защита на веганите. 2007; 22 (1): 65-65. Достъпно на: scielo.sld