ЛАКТОЗИРАН БУЛЬОН: ОСНОВА, ПРЕПАРАТ И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В бульон лактоза е средство за трети - селективна среда течна култура използвани главно като на предварително обогатяване в изолиране на Salmonella щамове от микробиологичен анализ на обработени храни, млечни продукти или вода. Това препоръчва Международната комисия по микробиологични спецификации на храните (ICMPF).

Средата съдържа ензимно смилане на желатин, месен екстракт и лактоза, вещества, необходими за растежа на бактериите. Освен това лактозата е ферментируем въглехидрат, поради което някои колиформи са способни да я разрушат с производството на газ.

Лактирани бульони с мътност. Източник: Снимка, направена от автора MSc. Мариелса гил

По тази причина бульонът с лактоза се препоръчва от Американската асоциация за обществено здраве (APHA) за предполагаемото изследване на тотални и фекални колиформни бактерии, квалифицирайки го като отлична алтернатива за заместване на бульона с лаурил сулфат триптоза в стандартната техника на най-вероятния брой (MPN).), използвани за микробиологичен анализ на проби от храна, мляко и повърхност, подземни, развлекателни, битови и промишлени отпадни води.

основа

За микробиологичния анализ на някои проби, етапът на предварително обогатяване е от съществено значение за възстановяването на специфичен микроорганизъм, който може да бъде в много ниско количество или в неблагоприятни условия, които нарушават или минимизират неговата жизнеспособност.

Такъв е случаят със сушени и преработени храни, вероятно замърсени със Salmonellas sp. В тези случаи, ако бактериите присъстват, те са претърпели физическа и химическа злоупотреба по време на процеса на производство на продукта.

По такъв начин, че микроорганизмите са изложени на неблагоприятни фактори като дехидратация, излагане на инхибиторни или токсични продукти и припокриване, породено от присъствието на други бактерии в по-голямо количество, наред с други.

В този смисъл лактозният бульон има възстановяващ ефект върху увредените структури на микроорганизма, причинявайки му да се възстанови и да се размножи по такъв начин, че да може да бъде открит.

По същия начин, лактозният бульон има способността да разрежда инхибиращите вещества, които могат да повлияят на жизнеспособността му, позволявайки неговото развитие. В допълнение, хранителният състав на лактозния бульон е стратегически за благоприятстване на растежа на Salmonella sp спрямо други микроорганизми.

За окончателно идентифициране той трябва да бъде субкултуриран до други окончателни културни среди.

От друга страна, съставът на средата също позволява да се открият микроорганизми, ферментиращи лактоза, които произвеждат газ.

подготовка

За да се приготви литър бульон лактоза, трябва да се претеглят 13 грама дехидратирана среда и да се разтворят в 1000 ml дестилирана вода.

За да помогне за разтварянето на средата във водата, разтворът може да се нагрее малко, но не много.

След като е хомогенна, разтворът се приготвя по следния начин: ако бульонът трябва да се използва за търсене на колиформи, се приготвя стенд с епруветки, в които е поставена тръба за ферментация на Дърам.

Тръбата на Дърам е много важен детайл, защото ще позволи откриването на газообразуване, данни с голяма стойност при търсенето на колиформи.

След като епруветките са готови, 10 ml от лактозния бульон се разпределят в тях, количество, което трябва да е достатъчно, за да покрие цялата епруветка на Durham.

Ако бульонът с лактоза трябва да се използва като бульон за предварително обогатяване, не е необходимо да се поставя тръба за ферментация на Durham. В този случай е необходимо по-голямо количество среда (225 ml), което ще се сервира в бутилки от 500 ml, с широка уста и с термоустойчива винтова капачка.

Впоследствие епруветките или колбите се автоклавират при 121 ° С за 15 минути.

Средата трябва да остане при крайно рН 6,9 ± 0,2 при 25 ° С.

Бульоните се съхраняват в хладилника до употреба.

Преди употреба бульоните трябва да бъдат доведени до стайна температура.

От друга страна, лактозният бульон може да се приготви и в двойна концентрация.

Някои лаборатории добавят бромокрезол лилаво към бульона с лактоза като pH индикатор, за да покажат епруветките, където лактозата е ферментирала поради промяна на цвета. В този случай бульонът придобива лилав цвят и ако има ферментация, той става жълт.

Приложения

В лабораториите за микробиология лактозната бульон се използва широко, тъй като е сравнително евтина среда, която предлага надеждни и бързи резултати (24-48 часа).

Може да се използва за анализ на общите и фекални колиформи в храна и вода или като бульон за предварително обогатяване на салмонела.

Предварително обогатяване

Предварителното обогатяване е стъпка преди обогатяването на пробите, което значително подобрява възстановяването на бактерии от рода Salmonella в преработени храни.

За да направите това, пробата от твърда храна (25 грама) или течност (25 мл) се засява в 225 мл бульон лактоза, инкубира се за 24 до 48 часа. Впоследствие той ще бъде субкултивиран в обогатена среда, като селенитен цистинов бульон или тетратионатен бульон. След това преминете към XLD и SS селективни носители.

Тотален и фекален колиформен анализ

Той е отлична среда като индикатор за фекално замърсяване.

Поради тази причина бульонът с лактоза е идеален за предполагаемата фаза на колиформеното изследване по метода на най-вероятния брой.

За проби, в които се подозира голямо количество колиформи, ще бъде инокулирано по-малко количество (1ml), докато за проби, в които се подозира по-малко количество колиформи, ще бъде инокулиран по-голям обем от проби (10 ml).

За анализа се правят 10 ^-1, 10 ^-2, 10 ^-3 разреждания, образувайки батерия от 3-5 епруветки за всяка използвана концентрация.

От всяко разреждане се прибавя един и същ обем в лактозните бульони.

Епруветките се инкубират за 24 часа. Отрицателните бульони се инкубират още 24 часа.

Интерпретацията на резултатите се осъществява чрез спазване на две характеристики: първата е наличието или отсъствието на мътност и тъй като тази среда не съдържа pH индикатор, няма да има промяна в цвета.

Второто е производството или не на газ. Газът лесно се забелязва в тръбата на Дърам чрез появата на един или повече въздушни мехурчета вътре в него.

Счита се за положителен, ако се наблюдават и двете характеристики, тоест мътност при производството на газ. Позитивните епруветки трябва да бъдат повторно посяти в потвърждаваща среда (2% блестящ зелен бульон и бульон на ЕО).

Контрол на качеството на средата

- Когато подготвяте средата, важно е да не забравяте да поставите тръбите Durhams, ако целта на същата е да изследва колиформи.

- Не прегрявайте средата преди стерилизация.

- Разпределете в епруветки преди стерилизация, никога след това.

- Не използвайте, ако носителят е на повече от 3 месеца.

- Не използвайте, ако наблюдавате промяна в обичайните характеристики на носителя.

- Когато приготвяте партида лактозен бульон, тествайте качеството му, като посеете известни щамове като Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii и Klebsiella pneumoniae. Те растат много добре, с производство на газ (положителен контрол).

- Може също да включва Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium или Enterococcus faecalis, които растат добре, но без производство на газ (Отрицателен контрол).

- Трябва да се отбележи, че оригиналният цвят на дехидратираната среда е бежов, а този на подготвената среда е много светъл и прозрачно жълт. Ако се наблюдава промяна в цвета или външния вид, тя може да се влоши.

Препратки

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Биология на околната среда и микробиология. (2013) 1-во издание. Университет в Картахенас, Колумбия.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B и Velázquez O. (2009). Техники за микробиологичен анализ на храните. 2-ро изд. Химически факултет, UNAM. Мексико.
3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Двойна концентрация на бульон лактоза (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Сравнение на техники за извличане на колиформни бактерии от утайката на езерото Xochimilco, Мексико. Преподобни арженти. Microbiol. 2013; 45 (3): 180-184. Достъпно на: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Определяне на микробиологичното качество на артезианските сондажни води в районите на централните отдели, Кордилера и Столичната община. Мем. Инст. Разследване. Science. Здраве 2013; 11 (1): 5-14. Достъпно от: scielo.iics.