МАЛОНЕН БУЛЬОН: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В малонат бульон е хранителна среда на течност, използвана за диагностичен тест (малонат), използван за диференциране някои родове на семейството Enterobacteriaceae. Той е създаден от Leifson през 1933 г. и по-късно модифициран от Юинг, който добавя малко количество декстроза и екстракт от дрожди към първоначалната формула.

Понастоящем средата се състои от екстракт от дрожди, амониев сулфат, дикалиев фосфат, монокалиев фосфат, натриев хлорид, натриев малонат, декстроза и бромотимол синьо. Този тест обикновено е включен в биохимичната идентификационна батерия за Enterobacteriaceae, като помага за разграничаването на определени родове и видове.

Графично представяне на малонатния тест. А. Отрицателен тест, Б. (Подкисляване) Отрицателен тест, В. (Средна алкализация) Положителен тест. Източник: Цветни тръби publicdomainpictures.net

Малонатният тест се основава главно на способността на някои микроорганизми да използват натриев малонат като единствен източник на въглерод и амониев сулфат като техен източник на азот.

Малонатният тест обикновено е положителен при някои видове от родовете Enterobacter, Klebsiella и Citrobacter. Като има предвид, че повечето от родовете Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus и Providencia, дават отрицателна реакция.

основа

Малонатният тест се състои в показване на онези бактерии, които са способни да използват натриев малонат като единствен източник на въглерод и амониев сулфат като източник на азот.

Повечето от Enterobacteriaceae, които не използват малонат, са в състояние да растат в тази среда, приемайки декстроза и екстракт от дрожди като хранителни вещества.

В този случай всеки опит за алкализиране чрез използването на пептони ще бъде противодействащ от производството на киселини, генерирани от ферментацията на декстроза. По същия начин, дифолиевите и монокалиевите фосфати действат като буфер, поддържайки рН на 6,7.

Ето защо, когато тестът е отрицателен, бульонът остава със същия оригинален цвят (зелен). В редки случаи средата може да стане кисела поради ферментацията на декстроза; без използването на пептоните и pH индикатора, той ще превърне цвета на средата в жълто. За да се случи това, pH трябва да спадне до 6.

Когато обаче този тест е положителен, се казва, че микроорганизмът е използвал малонат и амониев сулфат съответно като източници на въглерод и азот, без да се използват другите компоненти.

В този случай средата става алкална поради освобождаването на натрий и последващото образуване на NaOH. В този смисъл pH индикаторът (бромотимол син) превръща цвета на средата от зелен в син, когато рН е равен или по-голям от 7,6. Синьото може да бъде леко или интензивно (пруско синьо).

Накрая, натриевият хлорид поддържа осмоларността на средата, а водата е разредител на всички компоненти.

Интерпретация

Едноцветен бульон (зелен) - отрицателен тест

Жълт бульон: отрицателен тест

Светъл или наситено син бульон: положителен тест

Има вариант, наречен бульон от фенилаланин малонат, наричан още среда на Шоу и Кларк. В този случай могат да бъдат анализирани два теста, използването на малонат като източник на въглерод и производството на пирувинова киселина от фенилаланин.

подготовка

Малонен бульон

Броят на грамовете, посочен от вложката на избраната търговска компания, се претегля (може да варира от една до друга). Претеглените грамове се суспендират в един литър дестилирана вода. Загрейте леко, докато се разтвори напълно. Разпределете 3 ml от средата в 13/100 епруветки с памучни капачки.

Стерилизирайте в автоклав при 121 ° С за 15 до 20 минути.

Охладете преди употреба. Ако те няма да се използват веднага, съхранявайте в хладилника до употреба. Донесете бульоните до стайна температура, преди да инокулирате.

PH на средата трябва да бъде 6,7 ± 0,2. Цветът на подготвената среда е зелено в бутилка.

Phenylalanine Malonate бульон

Претеглят се 11 g дехидратирана среда и се разтварят в 1 литър дестилирана вода. Останалата част от препарата е същата като описаната по-горе.

Може да се приготви и чрез добавяне на 2 g / L фенилаланин към хранителната среда на малонатния бульон, преди да се стерилизира.

употреба

Използва се като част от батерията от биохимични тестове, които са събрани за идентифициране на бактерии от семейство Enterobacteriaceae.

Помага за разграничаване между:

-Родът Klebsiella и Enterobacter (+) от рода Escherichia и Serratia (-).

-Видовете Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame и Salmonella enterica ssp diarizonae (+), от видовете Salmonella enterica ssp enterica (-).

-От рода Klebsiella обикновено (+) от рода Actinobacillus (-).

-Понякога може да помогне за разграничаването на родовете и видовете бактерии, които не принадлежат към семейството на Enterobacteriaceae, като например сред неферментиращите грамотрицателни бацили Alcaligenes faecalis (+) и Acinetobacter sp (-).

Източник: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.

процес

Под запалка се взема порция чист одеколон, като се използва правилно стерилизирана и охладена дръжка от платина. Взетата проба (лек инокулум) се разтваря в малонатния бульон. Инкубирайте с разхлабения капак при аеробиоза при 35 ° С ± 0,2 за 24 до 48 часа.

Малонатният бульон може също да се инокулира от 18-24 часа култура в соев бульон с триптиказа. В този случай се взема 0,01 ml със стерилна пипета и бульонът с малонат се инокулира. Инкубирайте с разхлабения капак при аеробиоза при 35 ° С ± 0,2 за 24 до 48 часа.

В края на времето резултатите се интерпретират. Всяка следа от син цвят след 48 часа инкубация трябва да се счита за положителна. Тестът не трябва да се тълкува като отрицателен, докато изтече 48-часовото време на инкубация.

В случай на използване на варианта с фенилаланин малонатен бульон първо се интерпретира малонатът и след това се добавят 5 капки 1N HCl и 3-5 капки 8% железен хлорид. Тъмнозеленият цвят се интерпретира като положителен тест за фенилаланин. Ако, от друга страна, средата стане бледо синя, тестът е отрицателен за фенилаланин.

QA

За да се извърши контрол на стерилността на средата, един или два бульона трябва да се инкубират при 35 ° С ± 0,2 за 24 часа инкубация. След това време не трябва да има облачност или промяна на цвета.

За контрол на качеството могат да се използват известни или сертифицирани щамове, като: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 и Escherichia coli ATCC 25922.

Очакваните резултати са:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae и Salmonella enterica ssp arizonae дават положителна реакция (средно син цвят).
• При Escherichia coli резултатът трябва да е отрицателен, тоест се очаква да няма промяна в цвета (зелен) или да пожълтее поради ферментацията на глюкозата.

Ограничения

Не използвайте бульон, който показва мътност, утайки, промяна на цвета или признаци на влошаване.

Препратки

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Микробиологична изолация на Salmonella spp. и молекулярни инструменти за неговото откриване. Uninorte Health. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73-94. Достъпно на: scielo.org.co
2. BBL. Малонатен бульон, Юинг модифициран. 2007. Достъпно на: bd.com
3. Senna Laboratories. Бульон Малонато. Достъпно на: cientificasenna.com
4. RenyLab. Бульон Малонато. 2013.Достъпна на адрес: es.renylab.ind.br
5. Mbiolog Диагностика. Бульон Малонато. Достъпно на: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
7. Conda Pronadisa Laboratories. Фенилаланин малонатен бульон. Достъпно на: condalab.com