Rose Bengal е лабораторен тест, основан на реакция антиген-антитела за диагностициране на бруцелоза. Техниката позволява откриване на специфични антитела срещу бактерията Brucella abortus в проби от човешки серум. Резултатът може да бъде отчетен качествено или полуколичествено.
Качествената форма изразява дали пациентът е положителен или отрицателен за теста, тоест дали има или не антитела. Междувременно полу-количественият доклад се отчита в IU / ml и показва приблизителното количество налични антитела. Трябва да се отбележи, че антителата ще се произвеждат само ако пациентът е бил в контакт с микроорганизма.
Розова бенгалска реакция в плоча за аглутинация. Източник: взето от видеото
Поради голямата си простота, висока чувствителност и специфичност, тя е една от сероаглютинационните техники, които се използват най-често в медицината като първоначален тест за диагностициране на това заболяване.
Някои изследователи сравняват ефикасността на теста на Роуз Бенгал с други техники, като сероаглютинация (фебрилни антигени) и са забелязали, че въпреки че има добра корелация, те са видели изолирани случаи, в които тестът за фебрилен антиген е отрицателен и Rose de Положителен отблясък.
Получената разлика се дължи на факта, че тези пациенти имат подклас на IgG антитела срещу Brucella abortus с по-добра свързваща способност при киселинно рН, следователно те могат да реагират с реагента на Rose Bengal, но не и с фебрилните антигени.
В този смисъл те предложиха реагентите на техниката на фебрилния антиген да бъдат модифицирани до киселинно рН, така че да могат да открият този тип случай.
основа
Розовият бенгалски реагент се състои от антигенна суспензия. Той е съставен от щама S99 на Brucella abortus, разреден в киселинен лактатен буфер (рН 3.6), плюс фенол и боята Rose Bengal.
Следователно в извадката, която се търси, са анти-Brucella антитела, ако те присъстват, те ще реагират с антигена на реагента и ще се наблюдава макроскопски видима реакция на аглутинация. Тестът открива или IgM антитела, или IgG антитела.
Това означава, че той може да открие заболяването както в острия си стадий, където IgM антителата преобладават, така и в хроничния му стадий, където IgG антителата преобладават.
Това представлява предимство, тъй като повишава чувствителността на теста, но в същото време е недостатък, тъй като не прави разлика между един и друг етап, тъй като реакцията с IgM и IgG антитела е идентична.
Тестът винаги трябва да се извършва заедно с отрицателна контрола и положителна контрола. Отрицателната контрола съдържа животински серум без антитела, а положителната контрола съдържа серум от животински произход с 50 IU / ml анти-Brucella антитела.
употреба
Бруцелозата е сериозно заболяване, което има тенденция да бъде хронично и опасно, затова е много важно да се диагностицира рано. Това е зооноза и хората могат да се заразят чрез директен контакт със замърсен материал, като най-уязвимите хора са ветеринари и грижи за животните.
Заразяването може да възникне и чрез консумация на заразени сурови меса, наред с други форми на инфекция.
Това заболяване атакува локално или системно. Системната форма е най-сериозната, тъй като могат да бъдат засегнати различни органи, включително ендотелната система на ретикулума (черен дроб, далак, костен мозък), кожа (целулит и лимфаденопатия), дихателна система (пневмония), опорно-двигателна система (артрит и др. сакроилитит и спондилит), наред с други.
Тестът на Rose Bengal е много полезна техника за извършване на първоначален скрининг, тъй като е много евтин, лесен за използване и има голяма специфичност и чувствителност.
Случаите на фалшиви негативи и фалшиви положителни резултати са много редки и могат да се появят при хора с много ниски титри на антитела (<25 IU / ml) или изключително високи (> 1000 IU / ml).
процес
материали
-Розен бенгалски комплект
-Аглютинационен плоча бял фон
-50 µl пипета
-Ротатор (по избор)
-Vortex
Техника (качествен метод)
Търговските комплекти Rose Bengal се предлагат с готови за употреба реактиви.
-Умерете реагентите преди да започнете да работите.
-На плочките за аглутинация са изведени кръгове, всяка от които за различна проба. Използвайте 3 кръга, първият за отрицателната контрола, вторият за пробата и третият за положителната контрола.
-Поставете капка или 50 ul от контролите и пробата в съответния им кръг.
-Смесете реагента на розова бенгала, като използвате вихър. Поставете капка до поставените по-рано.
-Миксирайте с дървени клечки за зъби (използвайте по един за всеки екземпляр или контрола). Направете кръгови движения и разнесете така, че да покриете целия кръг.
Източник: изображения, взети от Видео: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Редактирано оформление на изображението.
-Поставете плочата върху автоматичен ротатор при 80 до 100 оборота в минута или завъртете ръчно в продължение на 4 минути. Прочетете доказателството в края на това време.
-Проверете дали контролите са дадени както се очаква. Сравнете реакцията на тестовата проба с контролните. Отчитайте като положителен, ако се наблюдава аглутинация и като отрицателен, ако няма аглутинация.
Положителният тест показва, че пациентът има количество, равно или по-голямо от 25 IU / ml анти-Brucella антитела.
Тълкуване на положителна (с аглутинация) и отрицателна (без аглутинация) реакция. Източник: Цитрулин. Редактирано изображение.
Техника (полуколичествена)
Ако в качествената реакция пробата е силно положителна, тя може да бъде полу количествена. За това се правят серийни двойни разреждания на пробата с физиологичен физиологичен разтвор. Описаната по-рано процедура се провежда с всяко разреждане.
То се интерпретира и чрез макроскопско наблюдение на аглутинацията. Резултатът ще бъде титърът с най-голямо разреждане, при който е наблюдаван положителен резултат.
За да се изчисли приблизителната стойност на антитела срещу Brucella, се използва следната формула:
25 IU / ml х реакционен титър = IU / ml
Например, ако пациентът в полу количествените тестове е положителен при разреждане ½, ¼ и 1/8 и започне да бъде отрицателен от разреждането 1/16 нататък, това означава, че пациентът има титър 8, Прилагане на формулата:
25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml
QA
-Наборите имат срок на годност и той трябва да се спазва. Не трябва да се използва, ако реагентът е изтекъл.
-По време на употреба, уверете се, че реагентът не съдържа твърди частици, тъй като това е знак за влошаване.
-Поддържайте между 2 и 8 ° C.
-Да не се замразява, този акт уврежда реагента неотложно.
-Винаги провеждайте теста заедно с отрицателните и положителните контроли.
-Техниката понася серумни проби с определена степен на липемия и хемолиза, но не се препоръчва използването на прекомерно липемични и хемолизирани серуми, и двете условия променят резултатите от теста.
-Винаги привеждайте реагентите до стайна температура, преди да започнете анализа.
-Не интерпретирайте реакции, които отнемат повече от препоръчаното време, тъй като това генерира доклада за фалшиви положителни резултати, тъй като след определено време реагентът се утаява, симулирайки положителна реакция.
-Техниката е 100% чувствителна и има специфичност 98%.
-След полу-количествено определяне от 1000 IU / ml съществува възможност за наблюдение на прозонов ефект (фалшиво отрицателен поради излишък на антитела в сравнение с количеството антигени).
Препратки
- Rubio M, Barrio B и Díaz R. Стойност на тестовете Rosa de Bengala, Coombs и контраимуноелектрофореза за диагностициране на случаи на бруцелоза при хора, при които серумната аглутинация е отрицателна. Катедра по микробиология. Клинична служба по микробиология. Университетска клиника. Университета в Навара. 406-407. Достъпно на: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "Бруцелоза". Уикипедия, Свободната енциклопедия. 6 декември 2019 г., 14:37 UTC. 18 Дек 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
- Monlab Laboratories. Монлаб Бенгалска роза - тест. 2016.Достъпно на: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Преподобни Перу. Мед. Обществено здраве 1997; 14 (1): 63-66. Достъпно на: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Проследяване на клинична, серологична и полимеразна верижна реакция на семейство с бруцелоза. Преподобен чил. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. Достъпно на: scielo.conicyt.