В агар Biggy е твърда среда селективен и диференциална култура. Той е предназначен за изолиране и подпомагане на идентифицирането на основните видове Candida. Името му BIGGY идва от съкращението на английски бисмут глюкоза Glycine мая.
Оригиналната формула е създадена от Никерсън, поради което тази среда е известна още като агар на Никерсън. В момента той е съставен от екстракт от дрожди, глицин, декстроза, амониев цитрат, бисмутов цитрат, натриев сулфит и агар.
Графично представяне на BIGGY агар. Източник: Flickr.com
BIGGY агар е формулиран за разграничаване на видовете Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei и C. kefyr, но също така растат и други видове като Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum и Saccharomyces cerevisiae.
Той има добра чувствителност и специфичност, обаче, в сравнение с други носители с подобна функция, той е на второ място, като е надминат от CHROMagar. Поради тази причина много лаборатории предпочитат последната, въпреки че е много по-скъпа.
Трябва да е ясно, че използването на BIGGY агар, както и други подобни средства, помага за бързото предполагаемо идентифициране, но никога потвърждаващо. Следователно трябва да са налични допълнителни методи за идентификация; например системи за идентификация Vitek 32 и API 20.
основа
BiGGY агар се счита за частично селективна среда за изолиране на дрожди, особено от рода Candida, въпреки че могат да растат и други родове.
Освен това е диференциална среда, тъй като в зависимост от участващия вид ще се наблюдават различни характеристики по отношение на външния вид, цвета, формата и размера. Смята се за хромогенна среда, поради развитието на различни цветове в колониите.
Цветът на колониите от дрожди се дължи на наличието на бисмутов сулфит в агара. Никерсън осъзнал, че дрождите от рода Candida извършват извънклетъчно намаляване на сулфита на бисмут, превръщайки го в бисмутов сулфид (неразтворимо черно вещество). Това води до светлокафяви до черни колонии.
Този агар съдържа екстракт от дрожди и декстроза, който осигурява източника на основни хранителни вещества и енергия за развитието на дрождите. Глицинът е стимулатор на растежа на дрождите, докато инхибира растежа на някои бактерии.
В същия смисъл амониевият и бисмут цитратът, както и натриевият сулфит действат като инхибитори на бактериалния растеж. Агар е агентът, който придава средна твърда консистенция.
подготовка
Претеглят се 45 g от дехидратираната културална среда и се разтварят в литър дестилирана вода. Разклатете и загрейте сместа, кипейки за 1 минута до пълно разтваряне. Тази културална среда не е автоклавируема.
След охлаждане до приблизително 45 ° C във водна баня, изсипете 20 ml върху стерилни петри.
Цветът на дехидратираната среда е жълтеникаво сив, а приготвената среда е жълтеникаво бял гел, в който може да се наблюдава лека флокулираща утайка.
PH трябва да бъде 6,8 ± 0,2.
Приготвената среда трябва да се съхранява в хладилник (4 ° C) и да се пази от светлина. Тъй като е среда, която не може да бъде автоклавирана, тя трябва да се използва възможно най-скоро. Употребата му се препоръчва преди 3 дни след приготвянето му.
употреба
Плаките се инкубират при стайна температура (25 ° С) за 24, 48 и 72 часа, а времето за инкубация може да бъде удължено до 5 дни.
Всеки вид Candida развива определени характеристики, които ги карат да различават един от друг. Производителите на средата описват следните характеристики за всеки вид:
-Candida albicans комплекс: развива се в този агар като гладки, кръгли, кафяви или черни колонии, с лека мицелна граница. С изключение на това, че тъмният цвят не се разпространява до средата.
-Candida tropicalis: ярки, малки, тъмнокафяви колонии с черен център и лека мицелна граница. Тъмният цвят се разпространява към средата, характерна за този вид, след като се инкубира в продължение на 72 часа.
-Candida krusei развива големи, плоски, грубо изглеждащи колонии с кафява до черно граница.
-Candida parakrusei: колонии със среден размер, повечето пъти груби, плоски. Цветът може да варира от ярко тъмно червеникавокафяво до светлочервеникаво кафяво. Границата на колониите има обширен, жълтеникав мицел.
-Candida stellatoidea: развива средни, плоски колонии, тъмнокафяви, почти черни. Мицелното развитие е много оскъдно.
Проучване, проведено от Yücesoy и Marol през 2003 г., показа, че средата на CHROMagar има по-добра чувствителност и специфичност за диференциацията и идентифицирането на различни видове Candida в сравнение с BIGGY агар.
QA
За контрол на стерилността, неинокулираните плаки се инкубират при 25 ° С, на тъмно за 24 до 48 часа, очаква се да няма никакъв растеж или промяна на цвета.
ATCC щамовете, препоръчани за контрол на качеството на средата са:
Candida albicans ATCC 60193 комплекс, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. При всички тях се очаква растеж, както е описано по-горе.
Могат да се използват и следните щамове:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 и Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. При първите две се очаква пълно инхибиране, но в случай на частично нарастване на колониите ще бъдат оцветени в крема.
В случай на S. aureus се очаква то да бъде напълно инхибирано, но ако расте частично, колониите му са бели.
Ограничения
Някои бактерии са способни да растат в тази среда и дори могат да станат тъмни на цвят, симулирайки колония на Candida, но при намазване на колонията и наблюдение под микроскоп, тя лесно се изхвърля.
Таблица: Характеристики на колониите на някои дрожди на BIGGY агар според работата на Yücesoy M и Marol S.
Източник: Yücesoy M, Marol S. Изпълнение на CHROMAGAR candida и BIGGY агар за идентифициране на видове дрожди. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
Препратки
- Yücesoy M, Marol S. Изпълнение на CHROMAGAR candida и BIGGY агар за идентифициране на видове дрожди. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Технически данни BIGGY Agar. Достъпно на: mcdlab.net/
- Лаборатория Неоген. ГОЛЯМ Агар. Достъпно на: foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. ГОЛЯМ агар. Достъпно на: condalab.com
- BD Laboratories. BD BiGGY агар (бисмутов глюкозен глюкозен дрожден агар). 2011.Наличен на адрес: bd.com