На агара манитол сол или манитол сол е твърда среда селективен и диференциална култура. Той е създаден от Чапман за изолиране на патогенни грам-положителни коки, особено Staphylococcus aureus.
Също така е полезно да се изолират Staphylococus epidermidis, който понякога може да присъства като опортюнистичен патоген, и Staphylococcus saprophyticus, признат патоген на урината, сред другите видове.
А. Фиола с подготвена среда на солен манитол агар. Б. Солени манитолови агарови плочи, засяти с ферментиращи и неферментиращи бактериални щамове на манитол. Източник: A и B: Снимки, направени от автора MSc. Мариелса Гил.
Някои ентерококи са способни да растат на тази среда, както и някои грам-положителни спорообразуващи пръчки.
Тази среда е много полезна при анализа на клинични проби, но се използва и при микробиологичното изследване на храните и при контрола на качеството на промишлени продукти, като козметика, лекарства, наред с други.
Соленият манитол агар се състои от екстракти и пептони от говеждо месо, триптеин, манитол, натриев хлорид, фенол червен и агар.
основа
Манитоловият агар е селективен благодарение на високата си концентрация на сол. Солеността действа като инхибиращо вещество и предотвратява растежа на грам отрицателни бактерии.
Той също е диференциален поради наличието на въглехидратен манитол и фенолния червен показател за рН. От това бактериите, способни да ферментират манитол, произвеждат киселини, подкисляват средата, превръщат колониите и средата в жълто.
От друга страна, колониите, които не ферментират манитол, растат в средата, приемайки хранителните вещества, осигурени от екстракти и пептони от месо и триптеин. Оттам бактериите извличат необходимите за растежа им въглерод, азот, витамини и минерали.
Колониите в този случай могат да бъдат слаби или силно розови, а средата остава същия цвят или се променя на фуксия.
Агар е веществото, което осигурява консистенцията на средата.
подготовка
За да се приготви литър солен манитолов агар, 111 g от дехидратираната среда от предпочитаната търговска компания се претегля и се разтваря в 1000 ml дестилирана вода, като се използва колба.
Топлината се прилага с често разбъркване на средата за подобряване на процеса на разтваряне. Варете за минута.
Колбата се поставя в автоклава при 121 ° С за 15 минути.
В края на времето извадете флакона от автоклава, оставете го да почине и сервирайте между 15 и 20 ml в стерилни чаши на Петри, когато температурата е приблизително 50 до 55 ° C.
Позволено е да се втвърди, като се подрежда по обърнат начин в плаки и се съхранява в хладилник до употреба. Преди да засяете проба, изчакайте плаката да достигне стайна температура.
Плочите се засяват чрез набраздяване или чрез повърхностно засяване с дригалска шпатула. Крайното рН на подготвената среда трябва да бъде 7,4 ± 0,2
Цветът на дехидратираната среда е светло бежов, а цветът на подготвената среда е оранжево червен.
Приложения
Поради високата си селективност тази среда е идеална за засяване на проби със смесена флора, в които се търси присъствието на Staphylococus aureus, като основен патоген на този род.
В този смисъл една от най-честите му приложения е в микробиологичния анализ на фарингеални ексудати и проби от назален секрет, особено за откриване на асимптоматични носители на S. aureus.
Някои страни прилагат този анализ като задължително изискване за хората, които искат да работят като доставчици на храни.
Този контрол предотвратява наемането на хора, които са носители на S. aureus, като по този начин се избягва масивно хранително отравяне поради консумация на храна, замърсена със стафилококов ентеротоксин.
Той може също да бъде включен в засяването на инфекции на рани, кръвни култури, CSF, бронхоалвеоларно промиване, наред с други.
Соленият манитолов агар е полезен за повторно изолиране на колонии от култури на урина от CLED агар или кръвен агар, чийто Грам е разкрил грам-положителни коки в клъстери.
Той е валиден и при микробиологичния анализ на храна, питейна вода, почви, наред с други приложения.
QA
След като се приготви партида чинии със солен манитолов агар, препоръчително е да се извърши контрол на качеството. Контролните щамове се засяват, за да се покаже дали има растеж или не.
Известните щамове на Staphylococcus aureus могат да се използват като положителна контрола. Той трябва да расте задоволително, като се развиват жълти колонии, а средата също превръща същия цвят.
По същия начин е удобно да се включи известен щам на Staphylococcus epidermidis. Тя трябва да расте задоволително, като се развиват розови колонии, а средата остава същия цвят или потъмнява до по-силно розово.
Като отрицателна контрола се използват щамове, които не трябва да растат върху тази среда. Например, може да се отглежда известен щам на Escherichia coli или Klebsiella pneumoniae. Очакваният резултат е пълно инхибиране, тоест няма растеж.
Освен това трябва да се инкубира неинокулирана плоча. В него не трябва да има растеж или промяна на цвета.
Важно е плаката да не се използва, ако има признаци на влошаване, като замърсяване, дехидратация, промяна на цвета, наред с други.
Заключителни мисли
Когато използвате среда със солен манитол агар, трябва да вземете предвид няколко важни аспекта:
- Получаването на растеж на жълти колонии не означава, че става въпрос за Staphylococcus aureus. Трябва да се помни, че някои щамове на Enterococcus са способни да растат в тази среда и ферментиращ манитол, както и някои спорообразуващи грамположителни пръчки.
Ето защо е важно да се направи грам на колонията и тест за каталаза.
- От друга страна, трябва да се счита, че други видове стафилококи, различни от ауреус, също са способни да ферментират манитол. Затова е важно да се субкултурира колонията до хранителен бульон, който да се вземе оттам и да се извърши коагулазния тест.
Сред видовете Staphylococcus с клинично значение за човека, които ферментират манитол са: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, наред с други.
Други могат да дадат променлива реакция, тоест понякога положителна, а понякога отрицателна. Някои са S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, наред с други.
-Не се препоръчва да се вземат колонии директно от манитолов агар за извършване на коагулазния тест, тъй като високата концентрация на сол в средата може да попречи на резултата.
-В крайна сметка се препоръчва да се инкубират плочите, засети със солен манитол, до 48 часа, тъй като някои щамове от S. aureus могат бавно да ферментират манитол, въпреки че това не е много често.
Препратки
- Britannia Laboratories. Солен манитолов агар. 2015.Наличен на: britanialab.com
- „Солен манитолов агар“. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 31 окт 2018, 19:08 UTC. 17 януари 2019 г., 20:55 ч., Достъпно на: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. (5-то изд.). Аржентина, редакция Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Аржентина. Редакция Panamericana SA
- BD Laboratories. BD манитол солен агар. 2013.Наличен на адрес: bd.com.