В бисмут сулфит агар е твърда среда селективен и диференциална култура, специално формулирани за изолиране на Salmonella enterica подвид enterica серотип Typhi, сред други видове Salmonella. Средата е известна като BSA агар заради съкращението си на английски бисмут сулфит агар.
Оригиналната формула за сулфитен агар от бисмут е създадена през 1927 г. от Уилсън и Блеър (желязна среда от глюкозен бисмут сулфит); съдържаше натриев сулфит, глюкоза, разтвор на бисмут, амониев цитрат, железен сулфат и агар-агар.
Растеж на 48 часа инкубация на Salmonella sp върху бисмутов сулфитен агар. Източник: Pixnio.com Автор: Д-р WR Erving, USCDCP
Днес има модификация на оригиналната среда, съставена от екстракт от месо, месни и казеинови пептони, индикатор за бисмут сулфит, глюкоза, динатриев фосфат, железен сулфат, яркозелен и агар-агар.
Има много средства за изолиране на видовете салмонела, но когато става въпрос за възстановяване на серотипа на тифи, бисмутов сулфитен агар има значително предимство пред тях, тъй като в повечето случаи се получава много слабо или изобщо не се възстановява този микроорганизъм, Необходимо е обаче да се използват повече от един вид среда при опит да се изолират ентеропатогени, тъй като бисмутовият сулфитен агар е по-малко ефективен за други видове Salmonella и за рода Shigella, които са инхибирани или се развиват много слабо. в този агар.
Трябва да се отбележи, че от всички видове Salmonella, серотипът на Typhi е един от най-важните ентеропатогени при хората, като това е единственият му резервоар. Този серовар причинява коремен тиф, гастроентерит, бактериемия и септицемия.
Поради тази причина е уместно да се включи този агар при анализиране на проби от вода, фекалии или храни, когато се подозира наличието му.
основа
Подобно на повечето културни среди, бисмут сулфитният агар съдържа хранителни вещества за насърчаване на растежа на бактериите, като пептони и екстракт от месо. По същия начин, глюкозата функционира като източник на енергия и въглерод.
Въпреки това, не всички бактерии ще растат на тази среда, тъй като бисмут сулфитният агар е селективна среда. Той съдържа съединения, които инхибират растежа на Грам положителни микроорганизми и някои Грам-отрицателни бактерии. Тези съединения са: индикатор бисмутов сулфит и яркозелен.
От своя страна, динатриевият фосфат поддържа осмоларността и рН на средата.
Освен това, бисмут сулфит агар е на диференциално средни благодарение на присъствието на железен сулфат, което показва образуването на Н 2 S. Н 2 S, образуван от бактерии реагира с железен сулфат и форми ясно видимо неразтворима утайка.
Накрая, агар-агарът осигурява твърдата консистенция на средата.
подготовка
Претеглят се 52,3 g от дехидратираната среда и се разтварят в един литър вода. Загрейте сместа да заври 1 минута при често разбъркване, докато се разтвори напълно. Не прегрявайте прекалено много. Тази среда не е автоклавируема, тъй като екстремната топлина уврежда хранителната среда.
Оставете да се охлади до 45 ° C и разклатете, преди да сервирате в стерилни петри. Препоръчва се да се правят плочи с добра дебелина. За целта трябва да се излее по 25 мл във всяка чиния. Оставете да се втвърди. Тъй като това е среда, която не е стерилизирана, нормално е незабавното му използване да бъде предложено.
Въпреки това, проучване, проведено от D'aoust през 1977 г., показва, че има по-добро възстановяване на Salmonella typhimurium и Salmonella enteritidis, тъй като средата на бисмут сулфитния агар старее, което не влияе на резултатите за сероварите Typhi и Paratiyphi B.
D'aoust препоръчва използването на плочите на 4-ия ден от охлаждане, въпреки че предупреждава, че с напредване на възрастта селективността намалява и щамовете Proteus vulgaris се развиват по-лесно.
Поради тази причина за силно замърсени проби, като например изпражнения, за предпочитане е да се използва прясно приготвена среда. В противен случай използвайте на 4-ти ден от приготвянето му. Други автори препоръчват да се използват чиниите ден след приготвянето им, съхранявани в хладилника.
Охладените чинии трябва да се темперират преди употреба. PH на средата трябва да бъде 7,5 ± 0,2. Суровата среда е бежова, а подготвената среда е зеленикаво-сива опалесцираща.
Приложения
Сред пробите, които могат да бъдат засадени в тази среда, са проби от фекалии, питейна или отпадни води и храна.
За подобряване на изолатите се препоръчва да се извърши предварително обогатяване с лактозен бульон и след обогатяване с тетратионатен бульон или цистинов селенит бульон, преди сеитбата на бисмутов сулфитен агар.
Плаките се инкубират при 35 ° С ± 0,2 за 24 до 48 часа, в аеробиоза.
Характеристики на колониите на бисмутов сулфитен агар
Обикновено колониите на Salmonella Typhi се наблюдават на този агар в рамките на 24 часа с черен център и са заобиколени от ярко зелен ореол. Докато за 48 часа те стават напълно черни поради образуването на сероводород.
-Това среда инхибира повечето видове от рода Shigella.
- S. Typhi и S. arizonae могат да дадат много сходни колонии.
-В колиформи, които произвеждат H 2 S като Proteus и Citrobacter произвеждат колонии, подобни на тези на Salmonella, така че е необходимо да се извършват биохимични тестове за идентификация.
- Трябва да се извърши добра ивица, за да се получат изолирани колонии; Това е единственият начин да се наблюдават типичните характеристики на колониите от род Salmonella.
QA
За контрола на стерилността неинокулирана плоча се инкубира при 37 ° С, очаква се да няма растеж или промяна на цвета.
За контрол на качеството известни щамове като:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Очаква се Escherichia coli и Shigella flexneri да бъдат частично инхибирани, като се развиват съответно зеленикаво-кафяви и кафяви колонии. Като има предвид, че и двете салмонели трябва да имат отлично развитие с черни колонии с метален блясък и накрая Enterococcus faecalis трябва да бъде напълно инхибиран.
Препратки
- Wilson, W., и EM McV. Блеър. Използване на желязна среда от глюкозен бисмут сулфит за изолиране на B. typhosus и B. proteus. The Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374-391. Извлечено от.jstor.org
- D'aoust JY. Ефект от условията на съхранение на действието на бисмутов сулфитен агар. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Достъпно в: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD Лаборатории. Бисмут-сулфитен агар според WILSON-BLAIR. 2009.Достъп на: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2).pdf
- Мултимедийни лаборатории. Бисмутов сулфитен агар. 2017.Достъпна на: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G и Ybarra M. Бактериологично качество на суровото козе мляко, произведено в Miravalles, Пуебла. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54