КОАГУЛАЗЕН ТЕСТ: ОБОСНОВКА, ПРОЦЕДУРА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В теста коагулаза е лабораторна техника, използвана, за да разкрие присъствието на ензим коагулаза на. Този ензим има свойството да коагулира плазмата. Лоб през 1903 г. е първият, който описва този ензим.

Този тест се провежда върху грам-положителни, положителни за каталаза коки, което позволява да се разграничат щамовете Staphylococcus aureus от останалите стафилококи, тъй като той е единственият микроорганизъм с клинично значение, който го произвежда.

И двете изображения разкриват положителен тест за коагулаза. Източник: Ляв образ: Philippinjl. Правилно изображение: Снимка, направена от автора MSc. Мариелса Гил.

В този смисъл членовете на семейство Staphylococaceae, които са отрицателни за теста, често се наричат ​​коагулазен отрицателен стафилокок.

Има някои щамове, различни от S. aureus, които могат да произведат коагулаза, като Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius и S. delphini.

Първите три обаче имат клинично значение на ветеринарно ниво и много рядко могат да бъдат открити като причинител на инфекции при хората, докато S. delphini се среща само в морски среди.

Освен това те лесно се диференцират, тъй като S. hyicus и S. intermedius не ферментират манитол, а S. schleiferi spp coagulans не ферментира малтоза или трехалоза, докато S. aureus ферментира тези въглехидрати.

Наличието на ензима коагулаза е свързано с вирулентността на щамовете. Тази теория обаче се разпада, тъй като се наблюдават други вирулентни коагулаза-отрицателни видове, способни да предизвикат значителни инфекции.

основа

Интерпретация

Аглютинация в рамките на 5-20 сек (силен положителен тест).

Променлива аглутинация, възникваща между 20 секунди и една минута (забавен положителен тест).

Известна степен на аглутинация след една минута (съмнителни доказателства). Препоръчва се тестът да се повтори или потвърди по метода на тръбата.

Няма аглутинация (отрицателен тест).

Резултат с SSF. Винаги трябва да дава отрицателен резултат, ако автоматично дава положителен резултат, резултатът от теста е невалиден.

-Tube коагулазен тест

материали

-Стерилна епруветка

-Plasma

-Баня на Мария при 37 ° C.

Техника

Пипетирайте 0,5 ml плазма в епруветка с размери 12 x 75 със стерилна пипета. Заредете платиновия контур с 2 до 4 чисти колонии, за да се изследва от твърда култура за 18 до 24 часа и се разтваря в плазмата внимателно се разбърква и инкубира при 37 ° С в продължение на 4 часа.

Прегледайте тръбата през първия час, без да я разклащате, просто леко я наклонете. Ако съсирекът все още не се вижда, той може да се наблюдава на всеки 30 минути до приключване на 4-те часа. Ако след 4 часа той все още е отрицателен, може да се остави до 24 часа, но при стайна температура. Наблюдавайте и докладвайте резултата.

Въз основа на опита, някои микробиолози препоръчват да се използва 500 ul бактериална суспензия от 18-часова култура в течна среда за извършване на теста.

Изглежда, че предлага по-бързи и надеждни резултати, отколкото при емулгиране на колонии от твърди среди, особено ако е използвана човешка плазма, получена от банката на кръвта.

Използването на щамове от бульон помага за разреждане на възможното присъствие на човешки антистафилококови антитела в плазмата, които могат да инхибират действието на коагулазата.

Интерпретация

Ако се наблюдава съсирек, който обхваща цялата течност (пълно съсирване) или съсирек без нищо в останалата течност (частично съсирване), това трябва да се счита за положителен тест.

Ако не се образува съсирек, тоест суспензията остава хомогенна, тестът е отрицателен.

-Коагулазен тест с използване на фибриноген

Фибриногенът се използва същото като плазмата и се използва както за тестовете за слайдове, така и за епруветките. Продължете както е описано за плазмата и интерпретирайте по същия начин.

употреба

Използва се за разграничаване на Staphylococcus aureus от коагулазни отрицателни стафилококи.

QA

Предлагайте на разположение свежи култури от щам S. aureus, които да се използват като положителна контрола. Щамът S. epidermidis се предлага също като отрицателна контрола.

Ограничения

-Положителният тест не трябва да се оставя в инкубация за 24 часа, тъй като S. aureus произвежда фибринолизин, който разтваря съсирека.

-За надежден тест трябва да се използва прясна или наскоро възстановена плазма, както и е важно да се използват пресни бактериални култури (от 18 до 24 часа). По този начин се избягват фалшиви негативи.

-Тестът трябва да се извърши заедно с отрицателна и положителна контрола.

-Някои твърди среди могат да повлияят на коагулазния тест. Не се препоръчва използването на колонии от солен манитолов агар.

-Ако се използва цитрирана плазма, се препоръчва да се поставят 5 единици хепарин на ml плазма, за да се избегнат фалшиви положителни резултати. Това е така, защото някои микроорганизми, различни от S. aureus, могат да разграждат цитрата и да предизвикат съсирване на плазмата. В този случай е препоръчително да направите тест за грам и каталаза.

-В тест с епруветка е важно да се следи реакцията на всеки 30 минути, тъй като има щамове на S. aureus, които произвеждат високи концентрации на фибринолизин и бързо ще разреждат новообразувания съсирек. Избягвайте лъжливи негативи.

-Когато наблюдавате теста, избягвайте рязко разклащането на епруветката, това може да унищожи започването на образуването на съсиреци, които по-късно няма да бъдат възстановени, причинявайки фалшиви негативи.

Препратки

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
3. Mac Faddin J. (2003). Биохимични тестове за идентифициране на бактерии с клинично значение. 3-то изд. Редакция Panamericana. Буенос Айрес. Аржентина.
4. Pro-Lab Laboratories. Заекът коагулира плазмата. Достъпно на: pro-lab.com
5. "Коалгулаза". Уикипедия, Свободната енциклопедия. 12 февруари 2019 г., 04:23 UTC. 22 април 2019 г., 15:50. Wikipedia.org.