КСАНТОПРОТЕИНОВА РЕАКЦИЯ: ОБОСНОВКА, ПРОЦЕДУРА, УПОТРЕБА - ХИМИЯ - 2026

В реакцията xanthoprotein е химична процедура, използвана за определяне на наличието или отсъствието на ароматни аминокиселини, като например тирозин и триптофан, които могат да бъдат в свободна форма или представляват разтворими протеини, пептиди или полипептиди.

Използва се и за откриване на токсични вещества в кръвта, които съдържат бензолна група в структурата си. Този тест е известен още като ксантопротеинова реакция на Бехер.

Положителна реакция на ксантопротеин Източник: Взето от видеото:

Ксантопротеиновата реакция използва концентрирана азотна киселина, топлина и неутрализираща основа. Ако след неутрализиране на реакцията разтворът се превърне от жълт в оранжев, тестът се счита за положителен. Наблюдаваното оцветяване се дължи на образуването на азотни съединения, получени от нитрификацията на бензолните групи.

Ако количеството на общия протеин трябва да бъде количествено определено, е необходимо да се използват други методи за определяне на протеини, като Biuret.

Ксантопротеиновата реакция се използва главно, когато се анализират вещества, чийто химичен състав не е известен. Тази реакция обикновено е част от набор от тестове, които ще помогнат за определяне на химичния състав на определено вещество или екстракт. Ето защо той се използва широко от изследователите.

От друга страна, ксантопротеиновата реакция на Бехер се използва за откриване на фенолни и индолови вещества в кръвта, което прави възможно прогнозирането на появата на нефропатия, преди други по-късни параметри да бъдат увеличени.

основа

Реакцията по същество открива присъствието на бензен групата, както в аминокиселини, така и в протеини и пептиди. Азотната киселина действа върху бензолния пръстен на аминокиселините, които я притежават, образувайки фенолни нитросъединения.

Реакцията се нуждае от топлина, като обикновено се образува утайка, която замъглява средата, превръщайки я млечна. Утайката може да бъде бяла или жълта. И накрая, това изисква стъпка на алкализиране, която акцентира върху цвета. За това се използва основа като 40% натриев хидроксид или амоняк.

Реакцията ще бъде интерпретирана като положителна, ако се наблюдава силно жълто оцветяване по време на процеса на нагряване или тъмно оранжево, когато реакцията се алкализира. Аминокиселините, които открива, са главно тирозин и триптофан.

Ксантопротеинова реакция. Източник:

В случая на фенилаланин, въпреки че е ароматна аминокиселина, бензолното ядро ​​на тази аминокиселина е трудно да се нитрира в обикновена реакция, следователно, то ще излъчва или отрицателна, или слаба положителна реакция.

По принцип ксантопротеиновият тест може да бъде допълнен с теста на Хопкинс-Коул, който се използва за конкретна идентификация на триптофан. Ако ксантопротеиновият тест е положителен и тестът на Хопкинс-Коул е отрицателен, се изключва наличието на триптофан в този разтвор, което сочи основно присъствието на тирозин. По същия начин, той може да бъде допълнен и с реакцията на Милон за откриване на тирозин, наред с други неща.

Тази реакция може да се използва и върху проби от кръв, плазма или дезалбуминиран серум за диагностициране на уремия или бъбречна недостатъчност. В този случай се търси откриването на токсични вещества (фенолни и индол), произведени от чревна гнилост.

Тези вещества имат бензен групата и затова дават положителна ксантопротеинова реакция, въпреки че реагиращото вещество не е нито аминокиселина, нито протеин.

процес

- Ксантопротеинова реакция за откриване на аминокиселини с ароматни групи

Поставят се 1 ml от тестовата проба в чиста и суха епруветка.

-Добавете 0,5 ml концентрирана азотна киселина.

-Инкубирайте сместа на водна баня при 70 ° С в продължение на 2 минути. Преди това подгответе водната баня при споменатата температура.

-При отстраняването на епруветката от водната баня е възможно да се наблюдава, че разтворът е станал млечен и е придобил определен жълтеникаво-бял цвят.

-Разтворът се охлажда чрез изпускане на студена вода в основата на епруветката.

-Препаратът се алкализира чрез бавно добавяне (капка по капка) 40% разтвор на натриев хидроксид, докато не се промени цвета.

-Ако тестът е положителен, на интерфейса на течностите ще се образува тъмно оранжев пръстен.

-Ако реакцията е отрицателна, няма да има образуване на цвят.

- Ксантопротеинова реакция за откриване на фенолни и индол вещества в кръвта

-Dispense 5 cc 20% трихлороцетна киселина върху 5 cc венозна кръв, плазма или серум, като последният е най-показаният. Разбъркайте добре и филтрирайте.

-Вземете 2 ml от филтрата и го смесете с 0,5 ml азотна киселина. След това се нагрява до кипене, за това тръбата се поставя директно над по-лекия пламък за 30 секунди. Охлажда се с вода и се добавя 1,5 от 33% натриев хлорид.

Тя се тълкува по следния начин:

-Отрицателен резултат: жълтеникав цвят.

-Положителен (+) лимонено жълт резултат.

- (++) златисто жълто.

- (+++) тъмно жълто до кафяво

Тя може да се интерпретира и с помощта на референтна колоннаметрична скала Autenrieth, състояща се от различни концентрации на калиев дихромат. Той се приготвя в 10 на 10 разреждания от 0,03874% основен разтвор. Всяка епруветка представлява процент.

Интерпретационни везни

Има две скали на интерпретация, наречени древна и модерна. Нормалните стойности са:

Стара маса: между 75 до 85%

Модерна маса: между 15 и 25%

Ако цветът на епруветката е в средата на две стандартни епруветки, между двете измервания се прави средна стойност.

Стандартният разтвор на калиев дихромат се приготвя, както следва: 7,9 ml 10 N калиев дихромат се измерва и се долива до 100 ml в мерителна колба. Разрежданията се следват, както е показано в колориметричната таблица на Autenrieth.

Колориметрична таблица Autenrieth. Източник: Васкес А. Ксантопротеинова реакция. Испанско клинично списание. 1949; 35 (5): 326-327. Достъпно на: Elsevier

употреба

Използването на ксантопротеиновата реакция е част от набор от биохимични тестове, които помагат да се знае химичният състав на някакво неизвестно вещество. Този тест допринася за химичния анализ за откриването на протеини, които съдържат бензолни групи в структурата си.

Тази реакция се използва широко от изследователите в различни проучвания на вещества, представляващи интерес.

В този смисъл Васкес-Хорхе и сътрудниците използваха тази и други реакции, за да изследват съдържанието на протеин в течности, извлечени от мангровата стрида (Crassostrea rhizophorae).

По същия начин, Rojas et al. (2009) използват серия от тестове, включително ксантопротеиновата реакция, за да анализират гликомакропептидите в утайките от суроватка от рикота.

От друга страна, реакцията на Ксантопротеин на Бехер е модифицирана от Волхард, за да се използва за други цели. В този случай за откриване на фенолни и индол вещества, които могат да се повишат много по-рано (седмици или месеци), преди нивата на урея и остатъчен азот в кръвта да се увеличат.

Тези токсични отпадъци се образуват от чревната гнилост на храната.

Тези вещества се натрупват в кръвта, когато не са елиминирани правилно, следователно, положителен тест за ксантопротеин може да предскаже ранното начало на правилната бъбречна недостатъчност или състояние на уремия.

В зависимост от интензивността на цвета можете да определите колко напреднал е той. В този случай тестът е количествен.

При здрави хора този тест дава лек жълт цвят, съответстващ на нормалните нива на триптофан и тирозин, които може да са в кръвта.

Докато при пациенти с бъбреци ксантопротеиновата реакция е силно положителна поради наличието на следните вещества: фенол, индол, паракрезол, ароматни оксиациди и други.

Предпазни мерки

Този тест трябва да се извърши от обучени специалисти. Трябва да се вземат предвид всички разпоредби за биобезопасност, тъй като използваните реагенти са корозивни киселини и основи.

Ако случайно няколко капки азотна киселина попаднат върху кожата или върху ноктите, те ще пожълтяват, тъй като и двете структури съдържат протеини. Освен това по кожата и лигавиците причинява тежки изгаряния.

Ако възникне контакт с кожата, следва да се следва протоколът, който трябва незабавно да се измие със сапун и вода за около 20 минути.

Ако се напръска в очите, трябва да се измие с много прясна вода, опитвайки се да държи очите отворени.

Препратки

1. "Ксантопротеинова реакция" Уикипедия, The Free Encyclopedia. 2 септември 2019, 17:49 UTC. 21 окт 2019, 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. Физико-химична характеристика и съдържание на протеини в течни екстракти от мангрова стрида (Crassostrea rhizophorae). Rev Cubana de Química, 2014; 26 (1): 66-74. Предлага се в Redalyc.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. Изолиране и изпълнение на GMP чрез утаяване на суроватка с трихлороцетна киселина. Са-. (Маракайбо) 2009; 19 (3): 295-302. Достъпно на: ve.scielo.
4. Васкес А. Ксантопротеинова реакция. Испанско клинично списание. 1949; 35 (5): 326-327. Достъпно на: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate O. Реакциите на Becher и Andrewes в пикочната хирургия. Урологична служба на испанската болница. Аржентинско списание по урология 395-404