EC БУЛЬОН: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В ЕО бульон или бульон Ешерихия коли е селективен течна културална среда. Тази среда се препоръчва от стандартните методи за преброяване на общи и фекални колиформи, чрез най-вероятната техника на число (MPN) във водни и хранителни проби, където основният причинител е Escherichia coli.

EC бульонът се състои от триптеин, лактоза, жлъчни соли, дикалиев фосфат, монокалиев фосфат, натриев хлорид и вода. Формулата му е стратегически проектирана да благоприятства растежа на общите и фекални колиформи и да предотвратява развитието на други съпътстващи микроорганизми.

Фигурално представяне на приготвянето на ЕС бульон. Източник: Pixabay.com

Бактерията Escherichia coli е основният фекален колиформ, присъстващ като замърсител във водата и хранителните източници, като е причина за важни стомашно-чревни разстройства.

Трябва да се отбележи, че има много серотипове на Escherchia coli; Сред тях можем да споменем ентерохеморагичния (EHEC), ентероинвазивен (EIEC), ентеопатогенен (EPEC), ентеротоксигенен (ETEC) и ентероагрегативен (EAEC).

Този носител има способността да позволява развитието на всички тях, но без да може да ги разграничава един от друг. Това изисква допълнително тестване.

Микробиологичното изследване на водата и храната по най-вероятния брой (MPN) за търсене на общи и фекални колиформи е протокол, който се състои от няколко фази; предполагаема фаза, потвърдителна фаза и фаза на завършване. EC бульонът се използва в потвърдителната фаза.

основа

ЕО бульон

EC средата се основава на осигуряване на хранителни елементи, необходими за оптималното развитие на общите и фекални колиформи, в които са включени бактериите Escherichia coli.

Тези хранителни елементи се осигуряват от триптеин, като са отличен източник на пептиди и аминокиселини. В допълнение, тя също така съдържа лактоза, ферментируем въглехидрат, който осигурява енергия и позволява да се покаже дали бактериите произвеждат газ.

От друга страна, средата съдържа жлъчни соли, които осигуряват селективен характер, тъй като инхибира растежа на грам положителни микроорганизми, които могат да присъстват в пробата.

По същия начин, дикалиев фосфат и монокалиев фосфат действат като система за балансиране на pH. Тази система е необходима, тъй като съдържащата се в бульона лактоза има тенденция да подкислява средата, когато ферментира от микроорганизми, но това се компенсира от фосфатните соли.

Следователно тези елементи са от съществено значение, тъй като неконтролираната киселинност може да повлияе на правилното развитие на търсените микроорганизми.

От своя страна, натриевият хлорид стабилизира средата осмотично, докато водата е разтворителят на присъстващите разтвори и осигурява течната консистенция на средата.

Новобиоцин модифициран EC бульон

Окренд и Роуз създадоха разнообразие от бульон на ЕО, наречен новобиоцинов модифициран EC бульон. Модификацията се състои в намаляване на концентрацията на жлъчни соли и добавяне на 20 mg / dl новобиоцин.

Тази модификация благоприятства възстановяването на ентерохеморагични щамове Escherichia coli (O157: H7).

Този бактериален серотип причинява тежък хеморагичен колит, който може да доведе до хемолитичен уремичен синдром (HUS); което от своя страна може да генерира остра бъбречна недостатъчност, с висока смъртност, която може да достигне до 50% при възрастните хора.

Поради годишната заболеваемост и смъртност, причинени от тази бактерия поради консумация на замърсена храна, Министерството на земеделието на САЩ (USDA) силно препоръчва използването на тази среда.

подготовка

ЕО бульон

Претеглят се 37,4 g от дехидратираната среда и се разтварят в 1 литър дестилирана вода. Сместа трябва да се остави да престои 5 минути. Впоследствие в източник на топлина той се разтваря чрез често разбъркване.

След като се разтвори, той се разпределя в предварително подготвени епруветки с тръба Durham вътре. Стерилизирайте в автоклав при 121 ° С за 15 минути.

PH на средата трябва да бъде 6,9 ± 0,2. Цветът на дехидратираната среда е бежов, а подготвената среда е светло кехлибарена.

Бульоните се съхраняват в хладилника до употреба. По време на употреба бульоните трябва да са на стайна температура.

От друга страна, бульонът на ЕО също може да се приготви в двойна концентрация.

Новобиоцин модифициран EC бульон

Претеглят се 36,7 g дехидратирана среда и се разтварят в 1 литър вода. Останалата част от препарата е същата като описаната по-горе.

употреба

Тотален и фекален колиформен анализ

EC бульонът е идеален за потвърдителната фаза на изследването на колиформи по метода на NMP, както във водни проби, така и във фармацевтични продукти и храни.

Мътни, произвеждащи газове лактозни бульони, получени в предполагаемата фаза, трябва да бъдат пресадени в 2% жлъчни яркозелени бульони и ЕО бульон.

За общите колиформи ЕК бульоните се инкубират аеробно в продължение на 24 до 48 часа при 37 ° С, а за фекални колиформи се инкубират аеробно в продължение на 24 до 48 часа при 44 ° С.

И в двата случая се тълкува така: мътните тръби с производството на газ се считат за положителни. Ако няма производство на газ след 24 часа, инкубацията продължава до 48 часа.

EC положителните бульони преминават към пълната потвърдителна фаза, която се състои в повторно размножаване на селективни среди като агар Mac Conkey, EMB агар или Endo агар.

Ако използваният бульон е EC, модифициран с новобиоцин, препоръчва се положителните епруветки да бъдат засадени отново на агар Mac Conkey със сорбитол.

QA

Всяка партида подготвена среда трябва да бъде контролирана по качество. Първо трябва да се оцени стерилността на средата. В този смисъл един или два бульона се инкубират без инокулация в аеробиоза за 24 часа при 37 ° С. Очакваният резултат е прозрачен бульон, без мътност или промяна на цвета.

Второ, растежът на известните щамове трябва да бъде оценен, за това могат да се използват следните бактерии: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Във всички случаи се очаква задоволително развитие на микробите, като се наблюдава мътна среда с производство на газ за E. coli и няма газ за салмонела.

Други щамове, които могат да бъдат включени в контрола са: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Тези щамове трябва да бъдат напълно инхибирани.

препоръки

-Поставянето на тръбите на Дърам е от съществено значение за изследването на колиформи.

-Разпределете средата в епруветките преди стерилизация, никога след това.

-Не използвайте, ако носителят е на повече от 3 месеца.

-Не използвайте, ако се наблюдава промяна в обичайните характеристики на средата.

Препратки

1. Britannia Laboratories. EC Среден. 2015.Наличен на: britanialab.com
2. Ентерохеморагичен E. coli. Центърът за продоволствена сигурност и обществено здраве. 2010.Достъпна на: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. EC среда. Достъпно на: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Новобиоцин модифицирана среда на ЕС. Достъпно на: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Откриване, изолиране и характеристика на Escherichia coli, произвеждаща токсин от шига от прясно смляно месо от месари в Консепсион, провинция от Тукуман. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Достъпно на: www.scielo.org.