БУЛЬОН ОТ СЕЛЕНИТ: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В селенит е селективен течна културална среда. Той е проектиран от Leifson за обогатяване на проби, при които се подозира наличието на ентеропатогенни бактерии от рода Salmonella.

Тази среда отговаря на изискванията на Американската асоциация за обществено здраве (APHA) и затова е приета за изследване на наличието на салмонела в проби от изпражнения, урина, течна или твърда храна, вода, наред с други.

Бульон от селенит. Източник: Снимка, направена от автора MSc. Мариелса гил

Неговият химичен състав благоприятства възстановяването на тези микроорганизми и от своя страна инхибира растежа на други. То е токсично предимно за повечето бактерии, принадлежащи към семейство Enterobacteriaceae. Въпреки това, той също така позволява възстановяване на щамовете Shigella и не инхибира растежа на Pseudomonas и Proteus.

Състои се от безводен натриев хидроген селенит, безводен натриев фосфат, пептони и лактоза. Има и вариант, към който се добавя цистин, оттук и името му бульон селенит-цистин.

Понастоящем се предпочита използването на селенит-цистинов бульон, тъй като се получава по-висок процент на възстановяване на салмонела, еквивалентен на този, наблюдаван с други селективни среди за същата цел, като например натриев тетратионатен бульон.

основа

Съдържащите се в бульона пептони служат като хранителни вещества за правилното развитие на микроорганизмите. Салмонелните щамове използват пептоните като източник на азот, витамини и аминокиселини.

Лактозата е ферментируемият въглехидрат, докато натриевият селенит е инхибиращото вещество, което спира растежа на грам положителни бактерии и повечето от бактериите, присъстващи в чревната флора, особено от семейство Enterobacteriaceae. Натриевият фосфат е буферът, който стабилизира рН на средата.

В случая на варианта на селенитния бульон, съдържащ L-цистин, това допълнително съединение е редуциращо средство, което намалява до минимум токсичността на селенит, увеличавайки възстановяването на салмонела.

подготовка

-Селенит бульон

Ако разполагате с компонентите на сместа, можете да претегляте:

4 g безводен натриев хидроген селенит.

10 g безводен натриев фосфат.

5 г пептони.

4 грама лактоза.

Съединенията се разтварят в 1 литър стерилна дестилирана вода. Може да се нагрява леко, за да се разтвори напълно.

Някои лаборатории излагат средата за 10 минути в течна пара, за да я стерилизират, тъй като не трябва да се използва автоклав. Ако средата е стерилизирана, тя може да се съхранява в хладилника до употреба.

Може също така да се приготви нестерилно и да се сервира директно 10 до 15 ml в стерилни епруветки.

В този случай трябва да се остави да почива и да се използва веднага. Тъй като средата не е стерилна, тя не може да се съхранява в хладилник за по-късна употреба.

- Подготовка на търговската среда

Ако търговската среда е налична, претеглете 23 g от дехидратираната среда и я разтворете в един литър стерилна дестилирана вода. Загрейте за кратко, за да завършите разтварянето. Не автоклавирайте. Асептично сервирайте 10 или 15 ml в стерилни епруветки.

Крайното рН на средата трябва да бъде 7,0 ± 0,2.

Трябва да се отбележи, че цветът на дехидратираната среда е бежов, а препаратът е лек и полупрозрачен кехлибар.

Вариант на селенит-цистинов бульон

Съдържа същите съединения като бульона селенит, но се добавят 10 mg цистин. Останалата част от процедурата е абсолютно същата като описаната по-горе.

Приложения

Тази среда е специална, за да се използва при епидемиологични изследвания, в случаите, когато болестта не е в остър стадий, при асимптоматични пациенти или здрави носители.

Изолирането на рода Salmonella като цяло е трудно, тъй като те обикновено са само слабо замърсяващи проби. Бидейки в малки количества, той лесно се припокрива с растежа на други бактериални родове, които се намират в по-голямо количество.

От друга страна, суровината, от която се произвеждат преработените храни, често е изложена на топлина, дехидратационни процеси, използване на дезинфектанти, радиация и консерванти.

Следователно, салмонелите, присъстващи в суровината, се малтретират чрез подлагане на продукта на гореспоменатите промишлени процеси. По същия начин, в случай на клинични проби, като например изпражнения, щамовете могат да бъдат слаби, ако идват от пациенти, лекувани с антибиотици.

Следователно всяка проба, в която се подозира наличието на салмонела, трябва да бъде предварително обогатена с бульон с лактоза и впоследствие обогатена в бульон селенит, за да се оптимизира възстановяването й в селективни среди, като SS агар, ксилозен агар, лизин деоксихолат (XLD), ентеричен Hektoen агар (HE) и ярко зелен агар, наред с други.

засети

За проби от изпражненията вземете 1 g проба и суспендирайте в епруветка с 10 до 15 ml селенитов бульон. Ако изпражненията са течни, вземете 1 ml и суспендирайте в бульона. За ректални тампони изхвърлете материала от тампона в бульона.

В твърди хранителни проби се взема 1 гр. И се суспендира в бульона на селенит.

В течните храни се смесват в равни части със селенитния бульон при двойна концентрация.

За проби от урина, центрофугирайте, изхвърлете супернатантата, вземете цялата утайка и я суспендирайте в селенитния бульон.

Бульоните се инкубират при 37 ° С в продължение на 24 часа инкубация. Бактериалният растеж се доказва от мътността. Допълнителна епруветка за проба също може да бъде включена за инкубиране при 42 ° С. Впоследствие, засяване на селективни твърди среди от бульона на селенит.

QA

За да се контролира стерилността, селенитов бульон от всяка неинокулирана партида се инкубира при 37 ° С в продължение на 24 часа. Очаква се да няма мътност или промяна на цвета на средата.

Известни щамове могат да се използват за контрол на правилното функциониране на средата, като например:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 и Proteus mirabilis ATCC 43071.

Очакваните резултати са:

• За първите три бактериални щама растежът трябва да е задоволителен.
• За частично инхибиране на Escherichia coli.
• За протеус умерен растеж.

Ограничения

Средата от бульон селенит е токсична за човешката кожа, поради което трябва да се избягва директен контакт.

Препратки

1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Сравнение между хранителни среди на натриев селенит и натриев тетратионат, и двете се инкубират при 37 ° C и 42 ° C за изолирането на Salmonella spp от изпражненията на носителите. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
2. Britannia Laboratories. Бульон Селенито. 2015.Наличен на: britanialab.com
3. Неогенни лаборатории. Бульон от селенит. Достъпно на: foodsafety.neogen.com
4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal-Camacho J. Микробиологична изолация на Salmonella spp. и молекулярни инструменти за неговото откриване. Здраве, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Достъпно от:
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.