СОЕВ БУЛЬОН ОТ ТРИПТИКАСЕИН: ОСНОВА, ПОДГОТОВКА И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

Триптонът от соев бульон е течна културална среда, силно питателна, неселективна. Поради голямата си гъвкавост, тя е една от най-използваните среди за течни култури в лабораторията по микробиология.

Известно е и с името на триптичен соев бульон или усвоен казеин-соя, чието съкращение е TSB за съкращението му на английски Tryptic Soy Broth или CST за съкращението му на испански. Използването му е много разнообразно поради състава му. Състои се от триптеин, соев пептон, натриев хлорид, дикалиев фосфат и глюкоза.

Соевият бульон от триптикасеин, посят със щам на Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, където се наблюдава производство на пигменти. Източник: Снимка, направена от автора MSc. Мариелса Гил.

Той е способен да възпроизвежда клинично важни патогенни бактерии, включително тези, които са хранително-взискателни и анаеробни бактерии. Някои опортюнистични и замърсяващи гъбички също могат да се развият в тази среда.

Поради високата си хранителна сила, той има висока чувствителност за откриване на микробно замърсяване, поради тази причина той е избран от службата за здравна инспекция на животните и растенията USDA за микробиологичен анализ на ваксини.

По същия начин, соевият бульон на триптикасеин отговаря на изискванията на различните фармакопеи (европейски ЕП, японски JP и северноамерикански USP) за микробиологично изследване на продукти на индустриално ниво, като козметика и храни.

От друга страна, заслужава да се отбележи, че въпреки голямата си полезност, тази среда е сравнително евтина, което я прави достъпна за повечето микробиологични лаборатории. Приготвя се и много лесно.

основа

Триптеин, пептон и глюкоза осигуряват основни хранителни свойства, за да го направят идеална среда за бърз растеж на микробите.

При приблизително 6 до 8 часа инкубация растежът вече може да се наблюдава при повечето микроорганизми. Съществуват обаче бавнорастящи щамове, които могат да отнемат дни, за да растат.

Натриевият хлорид и дикалиевият фосфат действат съответно като осмотичен баланс и регулатор на pH. Наличието на растеж се доказва от появата на мътност в средата; ако няма растеж, средата остава полупрозрачна.

Поради светлия си цвят е възможно да се наблюдава производството на пигменти, като този, показан на изображението в началото на статията, който съответства на пигмента, произведен от Pseudomonas aeruginosa.

подготовка

-Триптисеин соев бульон

За да се приготви триптичен соев бульон, 30 g от дехидратираната търговска среда трябва да бъдат претеглени в цифров мащаб. След това се разтваря в литър дестилирана вода, съдържаща се в колба.

Сместа се оставя да почине 5 минути и след това се отвежда до източник на топлина, за да помогне за разтварянето на средата. Трябва да се разбърква често, докато кипи за 1 минута.

След като се разтвори, се разпределя в епруветки с подходящ размер според нуждите. Могат да се използват тръби с памучни тапи или с бакелитови капачки. Впоследствие епруветките се стерилизират със средата в автоклава при 121 ° С в продължение на 15 минути.

PH на средата трябва да остане 7,3 ± 0,2

Трябва да се отбележи, че цветът на обезводнената културална среда е светло бежов и трябва да се съхранява между 10 и 35 ° C, на сухо място. Докато приготвеният бульон е светло кехлибарен на цвят и трябва да се съхранява в хладилник (2 до 8 ° C).

-Различници от соев бульон с триптикасеин

Модифициран триптикасейнов соев бульон може да се приготви чрез добавяне на жлъчни соли и новобиоцин, за да стане селективен за изолирането на Е. coli. Друг вариант за същата цел е да се приготви соев бульон от триптиказа, допълнен с ванкомицин, цефиксим и телурит (2,5 µg / ml).

От друга страна, повече глюкоза (0,25%) може да се добави към триптичен соев бульон, когато целта е да се стимулира образуването на биофилми.

употреба

Той е достатъчно питателен, за да позволи растежа на по-бързи или по-бързи бактерии като Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp и Brucella sp, без да е необходимо да се допълват с кръв или серум.

По същия начин в този бульон могат да се развият някои гъбички, като Candida albicans Complex, Aspergillus sp и Histoplasma capsulatum.

Освен това, тази среда при анаеробни условия е идеална за възстановяване на бактерии, принадлежащи към рода Clostridium, както и неспортулирани анаеробни бактерии с клинично значение.

Ако се добави 6,5% натриев хлорид, той може да се използва за растежа на ентерококи и други стрептококи от група D.

На ниво изследвания той е бил много полезен в различни протоколи, особено при изследване на биофилм или образуващи биофилм бактерии. Използва се и за приготвяне на 0,5% Mac Farland бактериална суспензия, необходима за извършване на антибиограмата по метода на Кирби и Бауер.

В този случай се вземат 3 до 5 колонии с подобен вид и се емулгират в 4-5 мл соев бульон от триптикасеин. След това се инкубира в продължение на 2 до 6 часа при 35-37 ° С и впоследствие се настройва до желаната концентрация, като се използва стерилен физиологичен разтвор. Соевите бульони с триптикасеин не трябва да се използват от 18 до 24 часа инкубация.

засети

Пробата може да бъде засята директно или могат да бъдат субкултивирани чисти колонии, взети от селективна среда. Инокулумът трябва да е малък, за да не замъглява средата преди инкубацията.

Обикновено той се инкубира при 37 ° С в аеробиоза за 24 часа, но тези условия могат да варират в зависимост от търсения микроорганизъм. Може също така да се инкубира при анаеробни условия при 37 ° С в продължение на няколко дни, ако е необходимо. Например, бързорастящите или бързи микроорганизми могат да бъдат инкубирани до 7 дни.

При микробиологичния анализ на фармацевтични вещества - като ваксини - протоколите са по-строги. В тези случаи бульонът без растеж не се изхвърля, докато достигне 14 дни непрекъсната инкубация.

QA

От всяка подготвена партида трябва да се инкубират 1 или 2 неинокулирани епруветки, за да се демонстрира тяхната стерилност. Тя трябва да остане непроменена.

Известни щамове също могат да бъдат засадени, за да се оцени тяхното поведение. Сред щамовете, които могат да бъдат използвани са:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 или 25923, Escherichia coli ATCC 8739;

Във всички случаи растежът трябва да бъде задоволителен при подходящи атмосферни и температурни условия за всеки микроорганизъм.

Ограничения

-Ферментацията на глюкозата причинява намаляване на pH на средата чрез производството на киселини. Това може да бъде неблагоприятно за оцеляването на някои микроорганизми, чувствителни към киселинност.

-Не се препоръчва за поддържане на щамове, тъй като освен киселинност, бактериите изчерпват хранителните вещества след няколко дни с последващото натрупване на токсични вещества, които правят околната среда негостоприемна.

- Трябва да работите, като се грижите за всички протоколи за стерилност, тъй като бульоните лесно се замърсяват.

-След като приготвите соевите бульони от триптикасеин, не трябва да се опитвате да прехвърлите бульона в друга стерилна епруветка, тъй като този вид маневра е много уязвим от замърсяване.

Препратки

1. Кона Е. Условия за добро изследване на чувствителност чрез тест за дифузия на агар. Преподобен чил. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Достъпно на: scielo.org
2. Британска лаборатория. Трифоен соев бульон. 2015.Наличен на: britanialab.com
3. MCD лаборатория. Соев бульон на Trypticasein. Достъпно на адрес: electronic-systems.com
4. Неогенна лаборатория. Триптих соев бульон. Достъпно на: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Оценка на техниката на магнитна имуносепарация за възстановяване на Escherichia coli O157: H7 в млечни кремове. Алън. 2006; 56 (3): 257-264. Достъпно на: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Образуване на биофилм в изолатите на Staphylococcus aureus според антимикробната чувствителност и клиничния произход. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Достъпно на: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Изолиране на Escherichia coli O157: H7 с двойни проби от говежди фекалии от община Миранда, държава Zulia, Венецуела. Преподобни Циент. (Маракайбо), 2007; 17 (3): 239-245. Достъпно на: scielo.org