TETRATHIONATE БУЛЬОН: ОБОСНОВКА, ПРИГОТВЯНЕ И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В тетратионат бульон или бульон ТТ е селективен течна хранителна среда за обогатяване и възстановяването на щамове от рода Salmonella. Той е създаден от Мюлер и по-късно модифициран от Кауфман, поради което има и такива, които го наричат ​​бульон Мюлер-Кауфман.

Оригиналната среда съдържа протеозни пептони, калциев карбонат и натриев тиосулфат. Кауфман добави жлъчни соли към него и създаде друга модалност с ярко зелено. Тези вещества инхибират растежа на колиформи, оставяйки средата свободна за развитието на патогенни бактерии, в случая салмонела.

Добавяне на йоден разтвор на йод към тетратионатния бульон. Източник: Мануел Алмагро Ривас

Модификацията беше много успешна, тъй като значително повиши чувствителността на средата. Поради тази причина в момента е полезно за търсенето на салмонели във всякакъв вид проба, но по-специално за твърди или течни изпражнения и храна.

Приготвянето му се състои от две фази; Търговската среда е основа за приготвяне на тетратионат бульон и впоследствие, за да може да се образува тетратионат, се добавя йодиран йоден разтвор за пълнене на средата.

Американската асоциация за обществено здраве (APHA) препоръчва използването на Tetrathionate бульон, допълнен с ярко зелено за обогатяване на пробите за салмонела, тъй като той е по-селективен от бульона на тетратионат и селенит.

По принцип тетратионатният бульон е идеален, когато се подозира наличието на бактерии от рода Salmonella в малки количества или когато те се злоупотребяват с излагане на инхибиторни вещества или чрез промишлени процеси, които свеждат до минимум тяхната жизнеспособност.

основа

Наличните пептони съответстват на панкреатичния смилане на казеина и пептичния смилане на животинската тъкан. Те осигуряват източника на въглерод, азот и общи хранителни вещества за растежа на бактериите.

От своя страна, натриевият тиосулфат реагира с йодирания разтвор, за да образува тетратионат. Това инхибира растежа на колиформи и благоприятства развитието на бактерии, които съдържат ензима тетратионат редуктаза, сред тях е родът Salmonella, но също и Proteus.

Жлъчните соли също действат като инхибиращо вещество за повечето грамположителни и някои грамотрицателни бактерии (колиформи).

Калциевият карбонат абсорбира токсичните вещества, генерирани при разпадането на тетратионат, който образува сярна киселина. В този смисъл калциевият карбонат неутрализира киселинността, поддържайки рН на средата стабилен.

В случай на яркозелената модалност, това вещество увеличава селективната сила на тетратионатния бульон чрез инхибиране на микроорганизми, различни от рода на Salmonella.

подготовка

-Тетрационален бульон

Йоден разтвор на йод

За да се претегля:

• 6 грама йод.
• 5 г калиев йодид.

Калиевият йодид се разтваря в приблизително 5 ml стерилна дестилирана вода, след това йодът се добавя малко по малко, докато сместа се загрява. След като се разтвори напълно, допълнете до марката със стерилна дестилирана вода до достигане на краен обем от 20 ml.

Базова среда за тетратионатен бульон

Претеглят се 46 грама дехидратирана среда и се суспендират в 1 литър стерилна дестилирана вода. Разбъркайте и загрейте, докато напълно се разтвори, може да доведе до кипене само за няколко минути. Не автоклавирайте. Основата на средата се оставя да се охлади до приблизително 45 ° С и по това време се прибавят 20 мл йодиран разтвор.

След добавяне на йодиран разтвор към средата, той трябва да се използва незабавно. Ако не искате да използвате цялата смес, продължете както следва:

10 ml от основната среда се разпределят в епруветки и само към тези, които ще се инокулират с проби, се добавят 0,2 ml йодиран разтвор.

Тези, които няма да бъдат използвани, все още могат да се съхраняват в хладилника, но тъй като средата не е стерилизирана, идеалът е да се приготви точното количество, което е необходимо.

Цветът на средата преди добавяне на йодиран йоден разтвор е млечно бял с бяла утайка, а след добавянето е кафяв с гъста утайка. Наблюдаваната утайка е нормална и съответства на калциев карбонат, който не се разтваря. Крайното рН на средата е 8,4 ± 0,2.

-Тетрационален вариант на бульон с ярко зелено

За приготвяне на яркозеления тетратионатен бульон се извършват всички описани по-горе стъпки, но допълнително към сместа ще се добавят 10 ml от яркозеления разтвор, приготвен в 0,1%.

Сияещо зелено

Този разтвор се приготвя по следния начин:

Претеглят се 0,1 g яркозелено и се суспендират в 100 ml дестилирана вода. Загрейте до кипене за постигане на пълно разтваряне. Да се ​​съхранява в кехлибарена бутилка.

употреба

За пробите на изпражненията (култура на изпражненията) протоколът е както следва:

Инокулирайте 1 g твърд изпражнения или 1 ml течен изпражнения в епруветка с 10 ml готов бульон за тетратионат. Разклатете енергично и инкубирайте аеробно при 43 ° С в продължение на 6-24 часа.

Впоследствие вземете аликвота от 10 до 20 ul от бульона и субкултурата в селективна среда за салмонела, като SS агар, XLD агар, яркозелен агар, Hektoen ентеричен агар, наред с други.

Успоредно с това, селективната среда за салмонела трябва да се инокулира с директната проба (изпражнения) без обогатяване. За ректални проби от проби, изхвърлете събрания материал в епруветката и продължете както е описано по-горе.

За проби от храна тежат 10 g твърда храна или 10 ml течна храна и се инокулира бутилка със 100 ml готов бульон за тетратионат. Продължете по същия начин, както е описано по-горе, но инкубирайте при 37 ° C.

Както се вижда, връзката между пробата и бульона винаги ще бъде 1:10.

QA

Известни контролни щамове могат да бъдат използвани за тестване на хранителната среда. Най-широко използваните са ATCC сертифицирани щамове.

Използваните щамове са Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 и Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Очаква се отличен растеж на щамовете на салмонела, докато Escherichia coli може да има слаб или редовен растеж, а грам положителните щамове (Enterococcus и Staphylococcus) са частично или напълно инхибирани.

препоръки

-Тъй като тази среда не инхибира растежа на Proteus, някои лаборатории използват 40 mg / L новобиоцин, за да предотвратят развитието на този микробен щам. Антибиотикът трябва да се добави преди йодния разтвор.

-След приготвянето на средата, включително йодния йоден разтвор, не трябва да отнеме повече от 2 часа, за да се инокулира.

-Когато средата се разпределя в епруветките, сместа трябва непрекъснато да се хомогенизира, за да ресуспендира образуваната утайка.

-В по-малко замърсени проби тетратионатният бульон се инкубира при 35-37 ° С, а при силно замърсени проби се препоръчва инкубация при 43 ° С.

Препратки

1. Conda Pronadisa Laboratory. 2010. Tetrathionate бульон база според Müeller-Kauffmann. Достъпен в:
2. BD Laboratories. 2003. Tetrathionate база за бульон. Достъпен в:
3. Britannia Laboratories. 2015. Основен бульон Tetranate. Достъпен в:
4. BBL Media. 2005. Приготвя се в епруветки за културата на вида Salmonella.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Сравнение между хранителни среди на натриев селенит и натриев тетратионат, и двете се инкубират при 37 ° C и 42 ° C за изолирането на Salmonella spp от изпражненията на носителите. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220