ТИОГЛИКОЛЕТЕН БУЛЬОН: ОБОСНОВКА, ПРИГОТВЯНЕ И УПОТРЕБА - БИОЛОГИЯ - 2025

В тиогликолат бульон е последователност среда, обогатена течност. Известен е от съкращението FTM за съкращението си на английски Fluid Thioglycollate Medium. Той е създаден от Brewer и модифициран през 1944 г. от Вера, която добавя към него казеинов пептон.

Тази среда има нисък потенциал за намаляване на окисляването, поради което не се препоръчва за развитието на строги аеробни бактерии, но е идеална за възстановяване на факултативни аеробни, строги анаеробни и неизискващи микроаерофилни бактерии.

Тиогликолатен бульон без индикатор. Показва вагинално течение. Източник: Bobjgalindo

Високата ефективност, наблюдавана с тази среда при изолирането и възстановяването на голямо разнообразие от микроорганизми, я накара да бъде приета от Фармакопея на САЩ (USP), от Официалната асоциация на селскостопанските химици (AOAC) и от Европейската фармакопея (ЕП).

Тези организации го препоръчват за тестване за контрол на стерилитета на фармацевтични продукти и за обогатяване на различни видове проби.

Кадо тиогликолатът е съставен от екстракт от дрожди, панкреатичен смилаж на казеин, безводна декстроза, L-цистин, натриев хлорид, натриев тиогликолят, резазурин и агар в малко количество.

Има няколко версии на тази среда, сред тях са: тиогликолетен бульон с индикатор, бульон с тиогликолат без индикатор, бульон от тиогликолат с индикатор, обогатен с хемин и витамин К _1, и бульон от тиогликолат с калциев карбонат.

По-специално, вариантът на тиогликолатния бульон, обогатен с хемин и витамин К, служи за засилване на растежа на бързи анаероби, а вариантът на тиогликолатния бульон, съдържащ калциев карбонат, е полезен за противодействие на киселините, получени по време на микробния растеж.

основа

Тиогликолатният бульон се счита за неселективна среда за обогатяване, тъй като позволява растежа на повечето неизискващи бактерии. Хранителните изисквания се осигуряват от екстракта от дрожди, панкреатичния храносмилател и глюкозата.

От друга страна, тази среда, въпреки че е бульон, съдържа малко количество агар; Това означава, че той има нисък потенциал за редукция на окисляването, поради факта, че забавя навлизането на кислород по такъв начин, че кислородът намалява с навлизането му по-дълбоко в тръбата.

Ето защо тази среда е идеална за развитието на факултативни аеробни, микроаерофилни и строги анаеробни бактерии, последните 2 без да е необходимо да се инкубират при тези условия. Същата среда регулира количеството кислород в средата, като липсва на дъното на тръбата и в достатъчно количество на повърхността.

По същия начин, тиогликолатът и L-цистинът действат като редуциращи агенти, допринасяйки за предотвратяване на натрупването на вещества, които са вредни за развитието на бактерии, като пероксид. В допълнение, тези съединения съдържат сулфхидрилни групи (-SH-), неутрализиращи инхибиторните ефекти на живачни производни, арсен, сред други тежки метали.

От своя страна резазуринът е показател за редукция на оксидите. Това вещество е безцветно при редуциране и розово при окисляване. Има варианти за индикация и неиндикатор на тиогликолат на бульона. Използването му ще зависи от вида на пробата и предпочитанията на лабораторията.

Междувременно натриевият хлорид поддържа осмотичния баланс на бульона от тиогликолати, а използването на глюкоза в безводна форма предотвратява излишната влага в дехидратираната среда.

подготовка

Тиогликолатен бульон с индикатор

Претеглят се 29,75 g от дехидратираната среда и се разтварят в 1 литър дестилирана вода. Сместа се оставя да престои около 5 минути. Довежда се до източник на топлина и се разбърква често, докато се разтвори напълно.

Изсипете средата в епруветки и автоклавирайте при 121 ° С за 15 минути. Оставете да изстине преди употреба. Проверете вложката на търговската къща за нейното запазване. Някои препоръчват да се съхраняват на стайна температура на тъмно място, а други в хладилник, защитено от светлина.

PH на подготвената среда е 7,1 ± 0,2.

Цветът на дехидратираната среда е светло бежов, а подготвената среда е светло кехлибарена с известна опалесценция.

Тиогликолатен бульон с индикатор, обогатен с хемин и витамин К

Има търговски среди, които вече съдържат хемин и витамин К ₁, особено за отглеждането на анаероби.

Ако обогатената анаеробна среда не е налична, може да се приготви основният тиогликолатен бульон. За това _{се добавят} 10 mg хемин хидрохлорид и 1 mg витамин К ₁ за всеки литър среда. Ако обаче към тиогликолатния бульон се добавят кръв или серум, добавянето на хемин или витамин К не е необходимо.

Тиогликолатен бульон с калциев карбонат

Той се предлага в търговската мрежа и се приготвя следвайки инструкциите на вложката.

Тиогликолатен бульон без индикатор

Това има същия състав на основния тиогликолат, но не съдържа резазурин.

Претеглят се 30 g дехидратирана среда и се разтварят в литър дестилирана вода. Останалата част от препарата е същата като тази, описана в тиогликолатния бульон с индикатор.

употреба

Тиогликолатният бульон е полезен за обогатяване на клинични проби, особено на тези от стерилни места. Полезен е и за неклинични проби, като козметика, лекарства и др.

За инокулиране на течни проби (като CSF, синовиална течност, наред с други), пробите първо се центрофугират и след това се вземат 2 капки от утайката и се поставят в тиогликолатния бульон. Инкубирайте при 35 ° C в продължение на 24 часа. Ако през това време няма растеж (мътност), той се инкубира до максимум 7 дни.

Ако пробата се вземе с тампон, средата за култивиране първо се инокулира в плочи и накрая тампонът се въвежда в бульона, стърчащата част се разделя и тръбата се затваря, оставяйки тампона вътре. Инкубирайте при 35 ° C за 24 часа, максимум 7 дни.

За твърди проби хомогенизирайте във физиологичен физиологичен разтвор (SSF) и след това инокулирайте тиогликолатния бульон с 2 капки суспензия.

Понякога може да се използва като транспортна среда за проби, при които се подозира строги анаероби, или като резервен хранителен бульон.

Вариантът на тиогликолетен бульон с калциев карбонат се използва за поддържане на контролните щамове за по-дълго време, тъй като има способността да неутрализира киселините, получени при използването на глюкоза; Тези киселини са токсични за определени бактерии.

Растежът в тиогликолатния бульон ще се наблюдава от мътността на средата. Препоръчва се да се извърши оцветяване по Грам и впоследствие субкултура в неселективна и селективна среда, в зависимост от вида на пробата и микроорганизмите, за които се подозира.

QA

За контрол на стерилността се препоръчва да се инкубират един или два бульона без инокулация. Очакваният резултат е бистър бульон, без промяна на цвета, въпреки че е нормално да се види лек розов цвят на повърхността на епруветката.

За контрол на качеството трябва да се инокулират между 10 - 100 CFU сертифицирани контролни щамове, като Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 11437 sporo Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Инкубирайте при 30-35 ° С в аеробиоза за 24 часа до максимум 3 дни, тъй като тези микроорганизми бързо растат.

Добро развитие се очаква във всички случаи, с изключение на Micrococcus luteus и Bacillus subtilis, където може да има умерено развитие.

За контрол на качеството на тиогликолат бульон, обогатен с хемин и витамин К ₁, могат да се използват контролните щамове Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 и Bacteroides fragilis ATCC 25285. Очакваният резултат е задоволителен растеж.

препоръки

-Понякога може да се наблюдава, че повърхността на тиогликолатния бульон с индикатор става розова; Това се дължи на окисляване на средата. Ако розовият цвят покрива 30% или повече от общия бульон, той може да се загрее на водна баня за 5 минути, отново да се охлади и да се използва.

Това ще премахне абсорбирания кислород, ще върне средата в първоначалния си цвят. Тази процедура може да се извърши само веднъж.

-За да подобрите растежа на аеробните бактерии, инкубирайте с леко разхлабен капак. За предпочитане е обаче за тази цел да се използва инфузионен бульон за мозъчно сърце или соев бульон с триптиказа за правилното развитие на строги аероби.

-Замразяването на средата или прегряването трябва да се избягва, тъй като и двете условия увреждат средата.

-Предната светлина уврежда хранителната среда, тя трябва да се съхранява защитена от светлина.

Препратки

1. Britannia Laboratories. Тиогликолат USP с индикатор. 2015.Наличен на адрес: labBritania.com.
2. Хиос Сас Лаборатории. 2019. Тиогликолетен бульон. Достъпно на: quios.com.co
3. Лаборатории BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003.Достъпно на: bd.com/Europe
4. BBL среда, приготвена в епруветки за култивиране на анаеробни микроорганизми. Тиогликолатна среда. 2013.Наличен на адрес: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологична диагностика на Бейли и Скот. 12 изд. Редакция Panamericana SA Аржентина.